H9C2大鼠心肌細胞(bao)

公(gong)司產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研研究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨床(chuang)診斷！

1、細胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒置顯微鏡(jing)下觀察(cha)，待(dai)細胞(bao)回縮變圓後(hou)加入 5ml 培(pei)養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消化(hua)，再(zai)輕(qing)輕吹打(da)細胞(bao)使(shi)之脫落，然(ran)後將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清，沈(chen)澱(dian)細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重(zhong)懸，然(ran)後按 1:2 比例進行(xing)分(fen)瓶傳代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒置顯微鏡(jing)下觀察(cha)，待(dai)細胞(bao)回縮變圓後(hou)加入培(pei)養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消化(hua)，輕輕(qing)吹打(da)細胞(bao)使(shi)之脫落，然(ran)後將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適量的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞(bao)，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中；

4）先將細胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移(yi)入-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)中進行(xing)長期保存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降溫盒可直(zhi)接放入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存(cun)處(chu)理僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操作(zuo)步(bu)驟以(yi)隨貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為主(zhu)。將含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液的凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴中迅(xun)速搖晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養基混(hun)合均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄(qi)去上清液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹勻。然(ran)後將所有(you)細(xi)胞(bao)懸液加入含(han)適量培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過夜(ye)（或(huo)將細胞(bao)懸液加入10 cm皿(min)中，加入約(yue)8 mL培(pei)養基，培(pei)養過夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換液並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去培(pei)養上清，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤所有(you)細(xi)胞(bao)，將培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況而定(ding)），然(ran)後在(zai)顯微鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分變圓並(bing)脫落，迅(xun)速拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消化(hua)。輕輕(qing)打勻後(hou)裝(zhuang)入無(wu)菌離(li)心管(guan)中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去上清液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養液(ye)後(hou)吹勻。

c、將細胞(bao)懸液按1:2比例分到(dao)新的(de)含8 mL培(pei)養基的(de)新皿(min)中或者(zhe)瓶中，置於培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態良好時(shi)，可(ke)進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收集細(xi)胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入無(wu)菌離(li)心管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄(qi)去上清液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據細(xi)胞(bao)數(shu)量加入無(wu)血(xue)清(qing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻，每支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管(guan)位置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取(qu)。

三、培(pei)養註意(yi)事項 

1. 收到(dao)細胞(bao)後首(shou)先觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有(you)上述現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和(he)我們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細胞(bao)相關(guan)信息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形態、所用(yong)培(pei)養基、血(xue)清(qing)比例(li)、所需 細(xi)胞(bao)因子等，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於培(pei)養條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞(bao)出現問題，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自(zi)行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦(ca)拭細胞(bao)瓶表(biao)面，顯微鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀態。因運輸問(wen)題，部分細胞(bao)由(you)於溫度(du) 變化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰亡破碎形(xing)成(cheng)碎片，是(shi)正常(chang)現象(xiang)。觀察(cha)好(hao)細胞(bao)狀態後，75%酒精消毒瓶壁(bi)將 T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞(bao)可以(yi)消化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培(pei)養基重(zhong)懸 細胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新的(de)培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿(min)中，置於培(pei)養箱(xiang)中進行(xing)培(pei)養。

5. 請(qing)客戶用(yong)相(xiang)同條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養基用(yong)於(yu)細胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議客戶收到(dao)細胞(bao)後前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細胞(bao)照片，記錄細胞(bao)狀態，便(bian)於和(he)我司技(ji)術部溝通 交(jiao)流。由(you)於運(yun)輸的(de)原因，個(ge)別(bie)敏(min)感細(xi)胞(bao)會出(chu)現不(bu)穩定的情況，請(qing)及(ji)時和(he)我們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細胞(bao) 的具(ju)體(ti)情(qing)況，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技(ji)術人員跟蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問題解(jie)決。

7. 該(gai)細胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用(yong)的(de)培(pei)養基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養基) 不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換用(yong)按照說(shuo)明(ming)書(shu)細胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件(jian)新配制的培(pei)養基來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細胞(bao)後第(di)壹次(ci)傳(chuan)代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。

公(gong)司正在(zai)出售(shou)的(de)產品(pin)：

試(shi)劑耗(hao)材 大鼠XIV(FXIV/protein C)ELISA試(shi)劑盒 (Mouse anti-IgE receptor antibody)  小鼠抗(kang)IgE受體抗(kang)體 MDA-MB-231細胞(bao)，癌細(xi)胞(bao) 人肝癌細(xi)胞(bao),Bel-7402細胞(bao) CL-00086T-CEM (人T細(xi)胞(bao)白血(xue)病細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2

HA Others H6N4 甲型(xing)流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血(xue)凝(ning)素HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) 大(da)鼠IX(FIX)ELISA試(shi)劑盒 ASK-1(Human apoptosis signal regulating kinase 1)  人雕(diao)亡信號調(tiao)節(jie)激酶(mei)I 96T

nNOS： 合成酶(mei)-1抗(kang)體 心肌細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 ×105次(ci)方(fang)(1ml)

KB人口腔(qiang)表(biao)皮樣癌細(xi)胞(bao) KB human oral epidermoid carcinoma cells MEM培(pei)養基(GIBCO)+10%FBSRPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大(da)鼠IX(FIX)ELISA 試(shi)劑盒 (Mouse anti-IVIgG antibody)  小鼠抗(kang)IVIgG抗(kang)體 CDH8 Others Human 人 Cadherin-8 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照)

CM-H028人(ren)淋巴血管內皮(pi)細胞(bao)培(pei)養基100mL 大(da)鼠Ⅻ(FⅫ)ELISA試(shi)劑盒 LDL-IC  大鼠低(di)密度脂(zhi)蛋白免(mian)疫復合物(wu) 96T

IER5： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CNR1/CB1 鈣粘蛋白相(xiang)關(guan)的神(shen)經(jing)受(shou)體(ti)1抗(kang)體 人紅(hong)系(xi)白(bai)血病細胞(bao);TF-1

ZR-75-30(人(ren)癌細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 小(xiao)鼠B淋巴細胞(bao)雜(za)交(jiao)瘤(liu)細胞(bao);SH2 犬5羥(qiang)色胺(an)(5-HT)ELISA 試(shi)劑盒 P63 protein P63 抑(yi)制基因(抗(kang)原) 0.5mg

IFFO2： 中間絲家族(zu)孤(gu)啡(fei)肽2蛋白抗(kang)體 JEC, 人子(zi)宮(gong)內膜(mo)腺(xian)癌細(xi)胞(bao)系

EFNB2 Protein Rat 重(zhong)組(zu)大(da)鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 標(biao)簽) 犬2,3-二(er)0酸(suan)甘(gan)油酸(suan)(2,3-DPG)ELISA 試(shi)劑盒 OPG(Osteoprotegerin) 護(hu)骨(gu)素(多肽抗(kang)原) 0.5mg

H9C2大(da)鼠心肌細胞(bao)CM-M006小(xiao)鼠肺(fei)成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)培(pei)養基100mL 大(da)鼠α2-HS糖(tang)蛋白(AHSG)ELISA試(shi)劑盒 ADAMTS4(Human ADAM metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif4)  人ADAM金屬肽酶(mei)含血(xue)小板反(fan)應蛋白1基元4 96T

Phospho-RIP2 (Ser176)： 0酸(suan)化(hua)受體(ti)結合絲酸(suan)蘇(su)酸(suan)激酶(mei)2抗(kang)體 IL8 Others Human 人 IL-8 (aa 1-77) 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照)

肺(fei)泡上皮細(xi)胞(bao)培(pei)養基AEpiCM 大(da)鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試(shi)劑盒 Human similar to RIKEN cDNA 4933429F08 gene  人類(lei)似(si)RIKEN cDNA 4933429F08 基因 96T

p90RSK： 絲酸(suan)/蘇(su)酸激酶(mei)p90RSK蛋白抗(kang)體 A2780(人卵(luan)巢(chao)癌細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2

EB病(bing)毒轉(zhuan)化(hua)的人(ren)B淋巴細胞(bao);KMY0907 人表(biao)皮黑(hei)色(se)素細(xi)胞(bao)培(pei)養基 100mL 大(da)鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA 試(shi)劑盒 PAQR7(Human progestin and adipoQ receptor family member VII )  人孕酮和(he)adipoQ受(shou)體家族(zu)成員Ⅶ 96T