HACAT+LUC人(ren)永(yong)生化表(biao)皮細(xi)胞(bao)熒光(guang)素(su)酶標記(ji)

公(gong)司產品(pin)僅供科研研究(jiu)使用、不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨床診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培養液，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微鏡下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓後加入(ru) 5ml 培養

液終(zhong)止消(xiao)化，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養基重懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比(bi)例進行分瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培養液，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微鏡下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓後加入(ru)培養液終(zhong)

止消(xiao)化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放置於凍存管中；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放置於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過夜，24h 後轉入(ru)液氮(dan)中進行長(chang)期(qi)保(bao)存。使用程序

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作

1) 復(fu)蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存處(chu)理(li)僅供參(can)考，具(ju)體(ti)操(cao)作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產品(pin)說明書為主。將(jiang)含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍存管在 37℃水(shui)浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃解(jie)凍，加4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)含(han)適量培養基的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中培養過(guo)夜（或將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿中，加入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第二天換(huan)液並(bing)檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化液浸潤(run)所有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶置於37℃培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況而定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化情況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變(bian)圓並脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿(na)回操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後裝入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比(bi)例分到新(xin)的(de)含(han)8 mL培養基的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶中(zhong)，置於培養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞(bao)生長(chang)狀態(tai)良好時(shi)，可(ke)進行細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量加入(ru)無血清細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍存管凍存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註(zhu)意凍(dong)存管做好標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存管放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管位置以便下次(ci)拿(na)取(qu)。

三、培(pei)養註(zhu)意事項 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好，培(pei)養液是(shi)否(fou)有漏(lou)液、渾濁等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生請及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)說明書，了(le)解細(xi)胞(bao)相(xiang)關信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所用培(pei)養基、血(xue)清比(bi)例、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由於(yu)培養(yang)條件(jian)不(bu)壹(yi)致而導致細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問題(ti)，責任由 客戶(hu)自(zi)行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈碰亡(wang)破碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片，是(shi)正常現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種到新(xin)的(de)培養(yang)瓶或培養皿(min)中，置於培養箱(xiang)中(zhong)進行培養(yang)。

5. 請(qing)客戶用(yong)相(xiang)同(tong)條(tiao)件(jian)的(de)培養基用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和(he)我(wo)司(si)技術部(bu)溝(gou)通(tong) 交流。由(you)於運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因(yin)，個(ge)別敏感(gan)細(xi)胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情況，請及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)，告知細(xi)胞(bao) 的(de)具體(ti)情況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的技術人員(yuan)跟(gen)蹤回訪(fang)直(zhi)至問題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供科研使用。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用(yong)的培養基 (灌(guan)液培(pei)養基) 不(bu)能(neng)再用來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按照(zhao)說明書細(xi)胞(bao)培(pei) 養條件(jian)新(xin)配制(zhi)的培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)第壹(yi)次傳(chuan)代建議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司正在出(chu)售(shou)的產品(pin)：

MAPK13： 原(yuan)活化(hua)蛋白激酶13抗體(ti) PON3 Others Human 人 PON3 / Paraoxonase 3 (50 Ser/Asn) 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照)

大鼠腎(shen)管狀上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)培(pei)養基 100mL 大鼠乙(yi)醇(chun)脫氫(qing)酶1(ADH1)ELISA試(shi)劑盒 CMV IgM 巨細(xi)胞(bao)病(bing)毒(du) IgM(捕(bu)獲(huo)法二步(bu)法)

Multicilin： 多纖毛(mao)素(su)蛋白抗體(ti) RL95-2, 人子(zi)宮內(nei)膜腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao)系(xi) 羊膜細(xi)胞(bao),H.A.細(xi)胞(bao) WERI-Rb-1(人(ren)視網膜母細(xi)胞(bao)瘤(liu))

EFNB1 Others Rat 大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照) 大鼠乙(yi)醇(chun)脫氫(qing)酶(ADH)ELISA試(shi)劑盒 RV 風疹胞(bao)病(bing)毒(du) IgG(間接法二步(bu)法)

MTMR8： 肌(ji)管素相(xiang)關蛋白8抗體(ti) 人肺(fei)巨細(xi)胞(bao)癌(ai)高(gao)轉移(yi)細(xi)胞(bao)株(zhu);PG-BE1

SK-N-MC(人(ren)神(shen)經上(shang)皮(pi)瘤(liu)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 人抗EB病(bing)毒(du)抗體(ti)(EBV)ELISA 試(shi)劑盒 BMP4(bone morphogenetic protein 4) 骨形(xing)態(tai)發生蛋白4(抗原(yuan)) 0.5mg

Syndecan 2/heparin sulphate protoglycans 1： 肝(gan)素(su)糖(tang)蛋白1抗體(ti) CTSH Others Mouse 小鼠 Cathepsin H / CTSH 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照)

Wistar大鼠脂肪(fang)間質(zhi)幹(gan)細(xi)胞(bao) Wistar rat adipose mesenchymal stem cells 人(ren)抗DNA酶B抗體(ti)(ai-DNase B)ELISA 試(shi)劑盒 PLGF (Placenta growth factor) 小鼠胎盤(pan)生長(chang)因(yin)子(zi)(多肽(tai)抗原(yuan)) 0.5mg

HFH-4： 叉(cha)頭蛋白J1抗體(ti) 羊源細(xi)胞(bao) 人(ren)臍(qi)靜(jing)脈血(xue)管內(nei)皮細(xi)胞(bao)，HUVEC細(xi)胞(bao) 15P-1細(xi)胞(bao)，轉(zhuan)PYTL基因(yin)小鼠支(zhi)持(chi)細(xi)胞(bao)

WFDC2 Others Canine 狗(gou) WAP5 / WFDC2 / HE4 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照) 人抗BP230抗體(ti)(BP230-Ab)ELISA 試(shi)劑盒 PLGF (Placenta growth factor) 胎盤(pan)生長(chang)因(yin)子(zi)(多肽(tai)抗原(yuan)) 0.5mg

HACAT+LUC人(ren)永(yong)生化表(biao)皮細(xi)胞(bao)熒光(guang)素(su)酶標記(ji)VEGFA Protein Human 重組(zu)人(ren) VEGF121 / VEGF-A 蛋白 大鼠花生四(si)烯(xi)酸5脂氧合酶(Alox5)ELISA試(shi)劑盒 IL-1sR II  大鼠白介(jie)素(su)1可(ke)溶(rong)性(xing)受(shou)體(ti)Ⅱ 96T

PL6： 胎盤(pan)蛋白6抗體(ti) MAPK14 Others Human 人 p38 alpha / MAPK14 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照)

HuTu-80 人(ren)十二(er)指腸腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao) 大鼠花生四(si)烯(xi)酸-5-脂加氧酶(ALOX5)ELISA試(shi)劑盒 GLP-1HA(Mouse ghcagons-like pepfide 1)  小鼠胰(yi)高(gao)血糖(tang)素(su)樣肽(tai)1 96T

PIK3AP1： 0酸(suan)肌(ji)醇(chun)3激酶接頭蛋白1抗體(ti) TE 115.T細(xi)胞(bao)，人(ren)軟(ruan)組(zu)織(zhi)纖(xian)維瘤細(xi)胞(bao) SV40永(yong)生化的(de)人(ren)胚腎(shen)上(shang)皮細(xi)胞(bao),293T細(xi)胞(bao) 腎(shen)小(xiao)球(qiu)內(nei)皮細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次(ci)方(1ml)

PDCD1LG2 Others Mouse 小(xiao)鼠 B7-DC / PD-L2 / CD273 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照) 大鼠花生四(si)烯(xi)酸-15-脂加氧酶(ALOX15)ELISA試(shi)劑盒 EJ/GlyRS(Human anti-EJ-antibody)  人EJ抗體(ti) CL-0064CoC1(人卵(luan)巢癌細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2