同(tong)型(xing)半ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒試(shi)驗(yan)原(yuan)理(li):
同(tong)型(xing)半ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒是(shi)固相(xiang)夾(jia)心(xin)法(fa)酶(mei)聯免(mian)疫(yi)吸附實驗(ELISA).已(yi)知(zhi)濃度(du)的(de)標(biao)準(zhun)品、未知(zhi)濃度(du)的(de)樣(yang)品加(jia)入(ru)微(wei)孔(kong)酶(mei)標板(ban)內進行檢測。先(xian)將標記(ji)的抗體(ti)同(tong)時溫(wen)育(yu)。洗滌(di)後,加入(ru)親和(he)素標(biao)記(ji)過的(de)HRP。再(zai)經(jing)過(guo)溫(wen)育(yu)和洗滌(di),去(qu)除未結(jie)合(he)的酶(mei)結合(he)物,然(ran)後(hou)加(jia)入(ru)底物(wu)A、B,和(he)酶(mei)結合(he)物同(tong)時作(zuo)用(yong)。產生顏(yan)色。顏(yan)色的深淺(qian)和(he)樣品中的濃度(du)呈(cheng)比(bi)例關系(xi)。
同(tong)型(xing)半ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒組(zu)成結(jie)構:
1、 血清:操作過(guo)程(cheng)中避免任(ren)何細胞(bao)刺激。使(shi)用(yong)不(bu)含熱原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素(su)的試管。收(shou)集(ji)血液後(hou),1000×g離(li)心(xin)10分(fen)鐘將血紅細胞(bao)迅速(su)小(xiao)心(xin)地分(fen)離(li)。
2、 血漿:EDTA、檸檬酸(suan)鹽(yan)、肝素血漿可(ke)用(yong)於(yu)檢測(ce)。1000×g離(li)心(xin)30分(fen)鐘去(qu)除顆(ke)粒。
3、 細胞(bao)上清液:1000×g離(li)心(xin)10分(fen)鐘去(qu)除顆(ke)粒和聚(ju)合(he)物。
4、 組(zu)織勻(yun)漿:將組織加(jia)入(ru)適量(liang)生(sheng)理鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。1000×g離(li)心(xin)10分(fen)鐘,取上清液。
5、 保(bao)存:如果(guo)樣品不(bu)立即同(tong)型(xing)半ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒使(shi)用(yong),應將其分(fen)成小(xiao)部(bu)分(fen)-70℃保存(cun),避免反(fan)復冷凍(dong)。盡(jin)可(ke)能的(de)不(bu)要使(shi)用(yong)溶(rong)血或高(gao)血脂(zhi)血。如果(guo)血清中大量(liang)顆(ke)粒,檢測(ce)前(qian)先(xian)離(li)心(xin)或過(guo)濾。不(bu)要在(zai)37℃或(huo)更高(gao)的溫(wen)度(du)加(jia)熱解(jie)凍(dong)。應在(zai)室(shi)溫(wen)下解(jie)凍(dong)並(bing)確保樣品均勻地(di)充分(fen)解(jie)凍(dong)。
同(tong)型(xing)半ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒安全性(xing):
1. 避(bi)免(mian)直(zhi)接接觸(chu)終(zhong)止液(ye)和底物A、B。壹(yi)旦接觸(chu)到(dao)這(zhe)些(xie)液(ye)體(ti),請(qing)盡快(kuai)用(yong)水(shui)沖(chong)洗。
2. 實(shi)驗(yan)中不要吃(chi)喝、抽煙或(huo)使(shi)用(yong)化妝品。
3. 不(bu)要(yao)用(yong)嘴(zui)吸取試劑盒裏的任何成份(fen)。
4. 同(tong)型(xing)半ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒應按(an)標(biao)簽(qian)說明書儲存,使(shi)用(yong)前(qian)恢復到(dao)室溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過(guo)後的(de)標準品應丟(diu)棄(qi),不(bu)可保(bao)存。
5. 實(shi)驗中不用(yong)的(de)板條應立即放回(hui)包裝袋(dai)中,密(mi)封保存(cun),以免(mian)變(bian)質(zhi)。
6. 不(bu)用(yong)的(de)其它(ta)試劑應包裝好或(huo)蓋(gai)好(hao)。不(bu)同(tong)批號(hao)的試(shi)劑(ji)不(bu)要混用(yong)。保(bao)質前(qian)使(shi)用(yong)。
7. 使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)的(de)吸(xi)頭(tou)以(yi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染(ran),吸(xi)取終(zhong)止液(ye)和底物A、B液時,避(bi)免(mian)使(shi)用(yong)帶(dai)金(jin)屬(shu)部(bu)分(fen)的加(jia)樣器。
8. 使(shi)用(yong)幹凈的塑料容(rong)器配(pei)置洗滌(di)液。使(shi)用(yong)前(qian)充(chong)分(fen)混勻(yun)試劑盒裏的各種成份(fen)及樣品。
9. 洗滌(di)酶(mei)標板(ban)時應充分(fen)拍幹,不要將吸水(shui)紙直(zhi)接放入(ru)酶(mei)標反(fan)應孔中吸水(shui)。
10. 底(di)物A應揮(hui)發,避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)打(da)開蓋(gai)子(zi)。底(di)物(wu)B對光(guang)敏感(gan),避免長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露於(yu)光(guang)下。避免(mian)用(yong)手(shou)接觸(chu),有(you)毒(du)。實(shi)驗完(wan)成後(hou)應立即讀取OD值。
11. 加入(ru)試劑(ji)的(de)順(shun)序應壹(yi)致(zhi),以(yi)保證(zheng)所有反(fan)應板孔溫育(yu)的時間(jian)壹(yi)樣。
12. 按(an)照(zhao)說明書中標明的時間、加(jia)液(ye)的(de)量(liang)及(ji)順(shun)序進行(xing)溫(wen)育(yu)操作。