公司(si)產(chan)品僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究使(shi)用、不(bu)得用於(yu)臨(lin)床診斷！
1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：
1）細(xi)胞生長至(zhi)覆蓋培養瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；
2）添加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下觀察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培養
液(ye)終(zhong)止(zhi)消化，再輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；
3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培養(yang)基重懸，然(ran)後按 1:2 比例進(jin)行分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞
培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養(yang)；
2、細(xi)胞凍(dong)存：
1）細(xi)胞生長至(zhi)覆蓋培養瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；
2）添加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下觀察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加入(ru)培養液(ye)終(zhong)
止(zhi)消化，輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；
3）用適(shi)量的凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放(fang)置於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；
4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞凍(dong)存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過夜，24h 後轉入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進(jin)行長期保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序
降(jiang)溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放(fang)入-80℃。
二、細(xi)胞培(pei)養操作(zuo)
1) 復(fu)蘇細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培(pei)養凍存(cun)處理僅(jin)供(gong)參考(kao)，具體(ti)操(cao)作步驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品說明(ming)書為(wei)主。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培(pei)養基混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下離心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹(chui)勻(yun)。然後將所有細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量培養(yang)基的培養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過夜(ye)（或將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基，培養過(guo)夜）。第(di)二天換液(ye)並(bing)檢查細(xi)胞密度(du)。
2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細(xi)胞密度(du)達(da) 80%-90%，即可進(jin)行傳(chuan)代(dai)培養。
a、棄去培養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。
b、加1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸潤所有(you)細(xi)胞，將(jiang)培養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況而(er)定），然後在顯微鏡下觀察(cha)細(xi)胞消(xiao)化情況，若細(xi)胞大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕敲幾下培養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培養(yang)基終止(zhi)消化。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝入無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻(yun)。
c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按1:2比例分到新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養基的新(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待細(xi)胞生長狀態良(liang)好時，可進(jin)行細(xi)胞凍(dong)存。下面 T25 瓶為(wei)例；a、收集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清洗(xi)壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞計數(shu)。
b、根據細(xi)胞數(shu)量加入(ru)無血清(qing)細(xi)胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做好標(biao)識(shi)。將凍存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿取(qu)。
三、培養(yang)註(zhu)意事(shi)項
1. 收到細(xi)胞後(hou)首先觀察(cha)細(xi)胞瓶是(shi)否完(wan)好，培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有(you)上(shang)述現(xian)象 發(fa)生請及(ji)時和(he)我們聯系(xi)。
2. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說明(ming)書，了解細(xi)胞相關信息(xi)，如(ru)細(xi)胞形(xing)態、所用培養(yang)基、血清比例、所需(xu) 細(xi)胞因子等(deng)，確(que)保細(xi)胞培(pei)養條(tiao)件壹致，若由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件不(bu)壹致而(er)導致細(xi)胞出(chu)現問(wen)題，責任由(you) 客戶(hu)自行承(cheng)擔。
3. 用 75%酒精擦拭(shi)細(xi)胞瓶表(biao)面，顯微鏡下觀察(cha)細(xi)胞狀態。因運輸(shu)問題，部(bu)分(fen)細(xi)胞由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變化及劇烈(lie)碰亡(wang)破碎(sui)形(xing)成碎(sui)片(pian)，是(shi)正常現象。觀察(cha)好細(xi)胞狀態後(hou)，75%酒(jiu)精消毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。
4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞可(ke)以消化，懸浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接混(hun)勻收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養基重懸 細(xi)胞，並(bing)接(jie)種到新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培(pei)養(yang)。
5. 請客戶(hu)用相同(tong)條(tiao)件的(de)培(pei)養基用於(yu)細(xi)胞培(pei)養。
6. 建議(yi)客戶(hu)收到細(xi)胞後(hou)前 3 天各拍幾張(zhang)細(xi)胞照片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞狀態，便(bian)於(yu)和(he)我司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由(you)於(yu)運輸(shu)的原因，個(ge)別(bie)敏感(gan)細(xi)胞會(hui)出(chu)現不(bu)穩(wen)定的情況，請及時和(he)我們聯系(xi)，告(gao)知細(xi)胞 的(de)具體(ti)情(qing)況，以便(bian)我們的技(ji)術(shu)人(ren)員跟蹤回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問題解決(jue)。
7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供(gong)科研(yan)使用。
8. 備註(zhu)：運輸(shu)用的培(pei)養(yang)基 (灌液(ye)培(pei)養(yang)基) 不(bu)能再用來培(pei)養細(xi)胞，請(qing)換用按照說明(ming)書細(xi)胞培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配(pei)制(zhi)的培(pei)養基來培(pei)養細(xi)胞。 收到細(xi)胞後(hou)第(di)壹次(ci)傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。
9. 註意： 1:2 傳(chuan)代(dai)就是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。
公司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品：
MTHFR： 亞甲基四氫還原酶MTHFR抗(kang)體(ti) CM-R022大(da)鼠(shu)甲(jia)狀腺(xian)上(shang)皮細(xi)胞培(pei)養基100mL
IFNA8 Protein Human 重組人(ren) Ierferon alpha-B / IFNA8 蛋白(bai) (His 標(biao)簽) 大鼠(shu)胰α2A(AMY2A)ELISA試(shi)劑盒(he) HSV- I IgM 單(dan)皰疹Ⅰ型病毒(du) IgM(捕獲(huo)法二步法)
MEK1： MEK1/MAPKK1抗(kang)體(ti) PDPN Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) Podoplanin / PDPN 桿(gan)狀病毒(du)-昆(kun)蟲細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照)
大鼠主動(dong)脈內皮細(xi)胞培(pei)養基 100mL 大鼠胰(yi)島(dao)細(xi)胞抗(kang)體(ti)(ICA)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) HSV- II IgG 單(dan)皰疹Ⅱ型病毒(du) IgG(間(jian)接(jie)法二步法)
MTNR1B： 褪黑素受體(ti)1B抗(kang)體(ti) Raw264.7, 小(xiao)鼠(shu)單(dan)核(he)巨(ju)噬細(xi)胞白(bai)血(xue)病細(xi)胞 牛(niu)腎細(xi)胞,MDBK細(xi)胞 Hs 578Bst(人(ren)成纖維(wei)細(xi)胞)
HCA57： 肝癌相關抗(kang)原57抗(kang)體(ti) CL-0381MDA-MB-175VII(人(ren)導管(guan)癌細(xi)胞)5×106cells/瓶×2
BE(2)C細(xi)胞，人(ren)神經母(mu)細(xi)胞瘤細(xi)胞 乙型溶血(xue)性鏈球菌 人(ren)胚肝二倍體細(xi)胞;CCC-HEL-1 人(ren)巨(ju)噬細(xi)胞炎(yan)性蛋白(bai)2(MIP-2/CXCL-2)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) PSD-95 突觸(chu)後密度(du)蛋白(bai)95(抗(kang)原) 0.5mg
Complement C3： 補體C3抗(kang)體(ti) HA Others H11N2 甲(jia)型流感(gan) H11N2 (A/duck/Yangzhou/906/2002) 血凝(ning)素HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照)
人(ren)慢性髓系(xi)白(bai)血(xue)病細(xi)胞;K562 人(ren)巨(ju)噬細(xi)胞炎(yan)性蛋白(bai)1β(MIP-1β/CCL4)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2) 癌易感(gan)基因2抗(kang)原 0.5mg
H1N1 Hemagglutinin 2： 甲型流感(gan)病毒(du)血(xue)凝(ning)素抗(kang)體(ti) 人(ren)胚肺(fei)二倍體細(xi)胞;HEL-2
HCMEC/D3永(yong)生化人(ren)腦微(wei)血管(guan)內(nei)皮細(xi)胞小鼠腦(nao)膜(mo)細(xi)胞(MMC)(5×105) CNE1, 人(ren)鼻(bi)咽癌細(xi)胞系(xi) Human 大鼠(shu)黑色(se)素細(xi)胞抗(kang)體(ti)(MC Ab)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) apo-B100(Mouse apoprotein B100) 小鼠載脂(zhi)蛋白(bai)B100 96T
PKC mu： 蛋白(bai)激(ji)酶C mu型抗(kang)體(ti) 溶(rong)液(ye)P/S
VEGFA Protein Human 重組人(ren) / 食蟹(xie)猴 VEGF / VEGFA / VEGF165 蛋白(bai) 大(da)鼠(shu)核(he)轉錄(lu)因子κBP65(NFκBp65)ELISA試(shi)劑盒(he) ATMA/TMAB(Human Anti-Thyroid Microsome Antibody) 人(ren)抗(kang)甲(jia)狀腺(xian)微(wei)粒(li)體(ti)抗(kang)體(ti) DPP4 Others Cynomolgus 食蟹(xie)猴 DPP4 / DPPIV / CD26 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照)
J82 人(ren)膀胱(guang)移行細(xi)胞癌 大鼠(shu)核(he)轉錄(lu)因子κB(NFκB)ELISA試(shi)劑盒(he) 25(OH)D3/25 HVD3(Mouse 25-Dihydroxy vitamin D3) 小(xiao)鼠(shu)25羥(qiang)基維(wei)生3 96T
Pepsinogen II： 原C抗(kang)體(ti) Hep 3B2.1-7[Hep 3B;Hep-3B;Hep3B]細(xi)胞，人(ren)肝癌細(xi)胞 人(ren)胚腎(shen)細(xi)胞(亞(ya)系(xi)克隆(long)),FIP293細(xi)胞 胎兒表(biao)皮角(jiao)化細(xi)胞Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)
