HBE135-E6E7人(ren)支氣管(guan)上皮(pi)細胞

公司產(chan)品僅供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用、不得(de)用於臨床診(zhen)斷！

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生(sheng)長至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下觀察(cha)，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消化，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使之(zhi)脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱(dian)細胞用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然後(hou)按 1:2 比(bi)例進(jin)行(xing)分瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細胞凍存(cun)：

1）細胞生(sheng)長至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下觀察(cha)，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使之(zhi)脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞，並放(fang)置(zhi)於凍存(cun)管(guan)中；

4）先將(jiang)細胞凍存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中進(jin)行長(chang)期保存(cun)。使(shi)用程序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直接放(fang)入(ru)-80℃。

二、細胞培養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細胞：以(yi)下細胞培養(yang)凍存(cun)處理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具體(ti)操(cao)作步驟以(yi)隨貨(huo)產(chan)品說明書為(wei)主(zhu)。將(jiang)含(han)有1 mL細胞懸液的(de)凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去上清液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然後(hou)將(jiang)所有(you)細胞懸液加(jia)入(ru)含(han)適量培養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細胞懸液加(jia)入(ru)10 cm皿中，加入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第二天(tian)換液並(bing)檢(jian)查細胞密度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細胞密度(du)達(da) 80%-90%，即可(ke)進行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培養(yang)上(shang)清，用不含(han)鈣、鎂離子(zi)的(de)PBS潤(run)洗細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化液浸潤(run)所有(you)細胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化1-2 min（視(shi)細胞情況(kuang)而(er)定(ding)），然後(hou)在(zai)顯(xian)微鏡(jing)下觀察(cha)細胞消化情況(kuang)，若細胞大(da)部分變(bian)圓(yuan)並脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿(na)回操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上清液，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞懸液按1:2比(bi)例分到新(xin)的(de)含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞凍存(cun)：待(dai)細胞生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良好時，可(ke)進行(xing)細胞凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細胞及(ji)細胞培養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上清液，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞計數(shu)。

b、根據(ju)細胞數量(liang)加入(ru)無血(xue)清細胞凍存(cun)液，使(shi)細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞懸液，註(zhu)意凍存(cun)管(guan)做(zuo)好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管(guan)位置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿取。

公司正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：

MAML3： 主導(dao)控(kong)制(zhi)樣(yang)蛋(dan)白(bai)3抗體(ti) CM-R038大(da)鼠肝內(nei)膽(dan)管(guan)上皮(pi)細胞培養(yang)基(ji)100mL

幹擾(rao)素(su) 大(da)鼠胰(yi)腺(xian)再生(sheng)蛋(dan)白(bai)Ⅳ(REG4)ELISA試(shi)劑盒(he) C3  鮭(gui)魚補體(ti)蛋(dan)白(bai)3 96T

MEK3： 原活(huo)化蛋(dan)白(bai)激酶(mei)MKK3抗體 NELL2 Others Human 人(ren) NELL2 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆蟲(chong)細胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

大(da)鼠心(xin)肌細胞培養(yang)基(ji) 100mL 大(da)鼠胰(yi)高(gao)血(xue)糖(tang)素(su)樣肽2(Glp-2)ELISA試(shi)劑盒(he) Alpha2-AP (Rabbit Alpha2-Antiplasmin)  兔子(zi)α2抗纖溶(rong)酶(mei) 96T

MYSM1： MYSM1抗體(ti) Ca Ski, 人(ren)細胞 非(fei)洲(zhou)綠猴(hou)腎細胞,CV-1(M)細胞 PA-1(人(ren)卵巢(chao)畸胎瘤(liu)細胞)

Hep 3B(人(ren)肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0434SC-1(小(xiao)鼠胚胎細胞)5×106cells/瓶×2 人(ren)腎小(xiao)管(guan)上皮(pi)細胞;HKC 人(ren)軍團菌抗原(LP Ag)ELISA 試(shi)劑盒(he) BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A) 骨(gu)成型(xing)蛋(dan)白(bai)受體(ti)1A抗原 0.5mg

HPR： 結合(he)珠(zhu)蛋(dan)白(bai)相(xiang)關(guan)蛋(dan)白(bai)抗體(ti) 人(ren)無色(se)素睫狀(zhuang)上(shang)皮(pi)細胞總RNAHNPCEpiC NA

SNU-5(人(ren)胃癌細胞) 5×106cells/瓶×2 人(ren)軍團菌抗體IgM(LP Ab-IgM )ELISA 試(shi)劑盒(he) PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor) D型(xing)-過(guo)氧(yang)化酶活(huo)化增(zeng)生(sheng)受體(ti)(多肽(tai)) 0.5mg

HDC： L-組(zu)酸脫(tuo)羧(suo)酶(mei)抗(kang)體(ti) S100A4 Others Mouse 小(xiao)鼠 S100A4 人(ren)細胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

SD大(da)鼠脂肪(fang)間(jian)質(zhi)幹細胞 SD rat adipose mesenchymal stem cells 人(ren)軍團菌抗體IgG(LP Ab-IgG)ELISA 試(shi)劑盒(he) PP-2A (protein phosphatase 2A) 蛋(dan)白(bai)質(zhi)0酸酶-2A(抗(kang)原) 0.5mg

HBE135-E6E7人(ren)支氣管(guan)上皮(pi)細胞phospho-PIK3R1(Tyr368)： 0酸化0脂酰肌醇(chun)激酶(mei)抗體 β-半(ban)乳(ru)糖(tang)苷(gan)酶比(bi)色(se)檢(jian)測試(shi)劑盒(he)GalC

VEGFA Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小(xiao)鼠 VEGFA / VEGF164 蛋(dan)白(bai) 大(da)鼠琥珀酸脫(tuo)氫(qing)酶(SDH)ELISA 試(shi)劑盒(he) BGP/Gehrelin(Mouse brain-gut peptides)  小(xiao)鼠腦腸肽 96T

phospho-PARK2(Ser101)： 0酸化帕金(jin)蛋(dan)白(bai)抗體(ti) LTA4H Others Human 人(ren) Leukoiene A4 Hydrolase / LTA4H 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆蟲(chong)細胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

IMR-32 人(ren)神經母細胞瘤(liu)細胞 大(da)鼠紅藻(zao)酸離子(zi)能谷酸受體(ti)2(GRIK2)ELISA試(shi)劑盒(he) PCNA(Human proliferating cell nuclear antigen antibody)  人(ren)抗增(zeng)殖細胞核(he)抗(kang)原抗體 Cates-1B細胞，人(ren)淋巴胚胎性(xing)癌細胞 SV40T轉化的(de)人(ren)胚腎細胞(亞系(xi)),293T/17細胞 食管(guan)上皮(pi)細胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)

IL12A & IL12B Others Mouse 小(xiao)鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 人(ren)細胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠紅細胞生(sheng)成素受體(EPOR)ELISA試(shi)劑盒(he) NAG  大(da)鼠N-乙酰-β-D-基(ji)葡萄糖(tang)苷(gan)酶 96T

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意事(shi)項 

1. 收(shou)到細胞後(hou)首(shou)先觀察(cha)細胞瓶是否(fou)完(wan)好，培養(yang)液是(shi)否有(you)漏液、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若有(you)上述(shu)現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及(ji)時和我(wo)們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀(du)細胞說明(ming)書，了解(jie)細胞相(xiang)關(guan)信息(xi)，如(ru)細胞形態(tai)、所用培養(yang)基(ji)、血(xue)清比(bi)例、所需(xu) 細胞因(yin)子(zi)等(deng)，確(que)保細胞培養(yang)條件壹(yi)致(zhi)，若由(you)於培(pei)養(yang)條件不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細胞出(chu)現問(wen)題，責(ze)任由(you) 客(ke)戶自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭(shi)細胞瓶表面(mian)，顯(xian)微鏡(jing)下觀察(cha)細胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸問(wen)題，部分細胞由於(yu)溫度(du) 變(bian)化及(ji)劇烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎形成碎片(pian)，是正常(chang)現象(xiang)。觀察(cha)好(hao)細胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精消毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可(ke)以(yi)消(xiao)化，懸浮細胞直接混勻(yun)收(shou)集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮的(de)培養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細胞，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿(min)中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中進行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶用相(xiang)同(tong)條件的(de)培養(yang)基(ji)用於細胞培養(yang)。

6. 建(jian)議客戶收(shou)到(dao)細胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張細胞照片(pian)，記錄(lu)細胞狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和我(wo)司技(ji)術(shu)部溝通 交流(liu)。由(you)於運(yun)輸的(de)原因(yin)，個(ge)別敏感(gan)細胞會出(chu)現不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情況(kuang)，請(qing)及(ji)時和我(wo)們聯系(xi)，告(gao)知細胞 的(de)具體(ti)情況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直至問(wen)題解決。

7. 該細胞僅供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸用的(de)培養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用來培養(yang)細胞，請換用按照(zhao)說明書細胞培 養(yang)條件新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培養(yang)基(ji)來培養(yang)細胞。     收到(dao)細胞後(hou)第壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。