HCT116+LUC人(ren)結腸癌(ai)細胞熒(ying)光素酶標(biao)記(ji)

公(gong)司(si)產品僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨床診(zhen)斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生長至覆(fu)蓋培養瓶的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中(zhong)的培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察，待細胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養

液終(zhong)止消(xiao)化，再(zai)輕輕(qing)吹打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然後(hou)將懸液轉移(yi)至 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱(dian)細胞用(yong) 1-2ml 培養基重懸，然後(hou)按 1:2 比例進行(xing)分瓶傳(chuan)代(dai)，最後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆(fu)蓋培養瓶的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中(zhong)的培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗細胞壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察，待細胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入(ru)培養液終(zhong)

止消(xiao)化，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然後(hou)將懸液轉移(yi)至 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並(bing)放置於(yu)凍存管(guan)中；

4）先(xian)將細胞凍存管(guan)放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其移(yi)入-80℃過夜，24h 後(hou)轉入(ru)液氮中進行(xing)長期保存。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降溫盒可直接(jie)放入-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以(yi)下細胞培(pei)養凍存處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參考，具體操(cao)作步(bu)驟以(yi)隨貨產品說(shuo)明(ming)書(shu)為主。將含(han)有1 mL細胞懸(xuan)液的凍存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養基混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離心3 min，棄(qi)去上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹勻(yun)。然後(hou)將所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適(shi)量培養基的培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過夜（或將細胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養基，培養過夜）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並檢(jian)查(zha)細胞密度。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細胞密度達 80%-90%，即可進行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去培養上清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤洗細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液浸(jin)潤所(suo)有(you)細胞，將(jiang)培養瓶置於(yu)37℃培養箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞情況(kuang)而定），然後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察細胞消(xiao)化情況(kuang)，若細胞大(da)部分變(bian)圓並(bing)脫落(luo)，迅(xun)速拿回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基終(zhong)止消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心管(guan)中，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去上清液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液按1:2比(bi)例分到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養基的新(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶中(zhong)，置於(yu)培養箱(xiang)中培(pei)養。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時，可(ke)進行(xing)細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收(shou)集(ji)細胞及細胞培(pei)養液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下離心4 min，棄(qi)去上清液，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行(xing)細胞計(ji)數。

b、根據(ju)細胞數量加(jia)入(ru)無血清(qing)細胞凍存液，使(shi)細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存管(guan)凍存1mL細胞懸(xuan)液，註意(yi)凍存管(guan)做好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存管(guan)放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液氮灌儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍存管(guan)位置以便下次拿取。

三(san)、培(pei)養註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞後(hou)首先觀(guan)察細胞瓶是(shi)否完好(hao)，培(pei)養液是否有(you)漏液、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上述現(xian)象(xiang) 發(fa)生請(qing)及時和我們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細閱讀細胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了解(jie)細胞相(xiang)關信(xin)息，如細胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培養基、血清比例、所(suo)需 細胞因(yin)子(zi)等，確(que)保細胞培(pei)養條(tiao)件壹致，若(ruo)由於(yu)培養條(tiao)件不(bu)壹致(zhi)而(er)導(dao)致細胞出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細胞瓶表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察細胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸問(wen)題，部分細胞由(you)於(yu)溫度 變(bian)化及劇(ju)烈碰亡破(po)碎(sui)形(xing)成碎片(pian)，是正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察好細胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可(ke)以消(xiao)化，懸(xuan)浮(fu)細胞直(zhi)接混勻(yun)收(shou)集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養基重懸 細胞，並(bing)接種(zhong)到新(xin)的培(pei)養瓶或培養皿中(zhong)，置於(yu)培養箱(xiang)中進行(xing)培(pei)養。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相同條(tiao)件的培(pei)養基用於(yu)細胞培(pei)養。

6. 建議客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後(hou)前 3 天各拍幾(ji)張細胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和我司技術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸的原(yuan)因(yin)，個(ge)別敏感(gan)細胞會出現(xian)不(bu)穩(wen)定的情況(kuang)，請及時和我們聯(lian)系，告知(zhi)細胞 的具(ju)體情況(kuang)，以便我們的技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直(zhi)至問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用(yong)的培(pei)養基 (灌液培養基) 不(bu)能再(zai)用來(lai)培養細胞，請(qing)換(huan)用(yong)按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)細胞培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配(pei)制(zhi)的培(pei)養基來(lai)培養細胞。     收(shou)到(dao)細胞後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或者 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。

公司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產品：

Mitofilin： 線(xian)粒體內(nei)膜(mo)蛋(dan)白(bai)抗體 綠(lv)色熒(ying)光蛋(dan)白(bai)標(biao)記(ji)小鼠前胃癌(ai)細胞;MFC-GFP

HHCC(人(ren)肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 伯(bo)氏(shi)菌 大鼠胰島素原(yuan)(PI)ELISA試(shi)劑(ji)盒 Anti-Ins 胰島素抗體 CM-R014大鼠氣管(guan)和支(zhi)氣管(guan)上皮細胞培(pei)養基100mL

IFNG Protein Cynomolgus 重組食蟹猴(hou) / 恒河(he)猴(hou) IFNG / Ierferon Gamma 蛋(dan)白(bai) 大(da)鼠胰島素原(yuan)(PI)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Anti-GAD 谷酸脫羧(suo)酶抗體 PFKFB3 Others Human 人(ren) PFK2 / PFKFB3 桿狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆蟲(chong)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

大鼠主動脈(mai)平滑(hua)肌(ji)細胞培(pei)養基 100mL 大鼠胰島素樣(yang)因(yin)子(zi)3(INSL3)ELISA試劑盒 Ins 胰島素(間(jian)接(jie)法(fa)二步(bu)法) 96T

MMP-12： 基質(zhi)金屬(shu)蛋(dan)白(bai)酶-12抗體 GBC-SD, 人(ren)膽囊(nang)癌(ai)細胞 猴(hou)腎細胞,HepII細胞 TE 354.T(人(ren)皮膚基底細胞癌(ai))

HCN2： /超(chao)極化激(ji)活(huo)環核(he)苷酸門控(kong)通(tong)道蛋(dan)白(bai)2抗體 大耳(er)山(shan)羊皮膚細胞;LDG-3 B淋(lin)巴(ba)細胞，WEHI 22.1細胞 M5076細胞，小(xiao)鼠網(wang)織(zhi)細胞肉瘤

APCS Others Human 人(ren) Serum amyloid P compone / APCS / SAP 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 人(ren)巨噬細胞來(lai)源的趨(qu)化因(yin)子(zi)(MDC/CCL22)ELISA 試劑盒 SAP-1 (Synapse associated protein-I) peptide 突(tu)觸(chu)相(xiang)關蛋(dan)白(bai)-1(多(duo)肽抗原(yuan)) 0.5mg

HSPβ7： 熱休克(ke)蛋(dan)白(bai)β7抗體 CL-0373KiMA(人(ren)胚腎上皮細胞系)5×106cells/瓶×2

BE(2)-M17細胞，人(ren)神經母細胞瘤細胞 寄(ji)生曲(qu)黴 293來(lai)源病(bing)毒(du)包裝(zhuang)細胞;ΦA 人(ren)巨噬細胞集(ji)落(luo)刺(ci)激(ji)因子(zi)受體(M-CSFR)ELISA 試劑(ji)盒 SARS S-protein(抗原(yuan)) 0.5mg

HCN3： /超(chao)極化激(ji)活(huo)環核(he)苷酸門控(kong)通(tong)道蛋(dan)白(bai)3抗體 HA Others H11N2 甲(jia)型流(liu)感(gan) H11N2 (A/duck/Yangzhou/906/2002) 血凝(ning)素 (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

HCT116+LUC人(ren)結腸癌(ai)細胞熒(ying)光素酶標(biao)記(ji)小鼠中腦縫神經細胞(腦(nao)脊)(MN-r)(1×106) HT-29, 人(ren)結腸癌(ai)細胞 Human 大(da)鼠核(he)因子(zi)κB抑制蛋(dan)白(bai)α(IKB-α)ELISA試(shi)劑盒 P III NP(Mouse N-terminal procollagen III propeptide)  小鼠Ⅲ型前膠原(yuan)肽(tai) 96T

phospho-FAK(Tyr925)： 0酸化粘(zhan)著斑激(ji)酶抗體 無血(xue)清(qing)細胞凍存液SF-CFM

FIGF Protein Human 重組人(ren) VEGF-D / VEGFD / FIGF 蛋(dan)白(bai) (His 標(biao)簽) 大鼠核(he)因子(zi)κB抑制蛋(dan)白(bai)α(IKBα)ELISA試(shi)劑盒 VC(Mouse Vitamin C)  小鼠96T

phospho-PTK2(Tyr576+Tyr577)： 0酸化粘(zhan)著斑激(ji)酶抗體 ACVR2B Others Cynomolgus 食蟹猴(hou) ACVR2B / ACIIB 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

JAR 人(ren)胎盤絨毛(mao)癌細胞 大(da)鼠核(he)因子(zi)κB亞(ya)基p65親(qin)和(he)肽(tai)(NF-κB p65)ELISA試(shi)劑盒 GAD-Ab(Human glutamic acid decarboxylase autoantibody)  人(ren)谷酸脫羧(suo)酶自(zi)身(shen)抗體 SNU-182細胞，人(ren)肝癌細胞 穩(wen)定表(biao)達EBNA1的人(ren)胚腎細胞,293E細胞 外(wai)周(zhou)血(xue)白(bai)細胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(1ml)