豬(zhu)轉鐵蛋(dan)白(bai)(TF)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)流程

樹(shu)林間(jian)積(ji)著(zhe)半尺(chi)深的枯(ku)葉(ye)，風(feng)壹(yi)吹(chui)，旋(xuan)轉著(zhe)飛揚(yang)起(qi)來，又均(jun)勻地鋪散(san)下(xia)去，掩蓋了(le)那(na)壹條傾斜著(zhe)盤旋(xuan)到山(shan)頂(ding)的小(xiao)徑(jing)。接(jie)下(xia)來介(jie)紹(shao)  豬(zhu)轉鐵蛋(dan)白(bai)(TF)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)流程

樣(yang)品(pin)收集、處理(li)及(ji)保存方法(fa)：

1）血(xue)清-----操(cao)作(zuo)過(guo)程中(zhong)避(bi)免(mian)任(ren)何細胞刺激(ji)。使(shi)用不(bu)含(han)熱原和(he)內(nei)毒(du)素(su)的試(shi)管(guan)。收集血(xue)液(ye)後(hou)，10×g離(li)心(xin)10分(fen)鐘將血(xue)清和(he)紅細胞迅(xun)速小(xiao)心地分離(li)。

2）血(xue)漿-----EDTA、檸檬酸鹽(yan)、肝(gan)素(su)血(xue)漿可用於(yu)檢測(ce)。1000×g離(li)心(xin)30分(fen)鐘去(qu)除顆粒。

3）細(xi)胞上清液(ye)---1000×g離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)去除顆粒和(he)聚(ju)合物(wu)。

4）組織勻(yun)漿(jiang)-----將組織加(jia)入適量(liang)生理(li)鹽(yan)水搗碎(sui)。1000×g離心10分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清液(ye)

5）保(bao)存(cun)------如(ru)果樣(yang)品(pin)不(bu)立(li)即使用，應將其分(fen)成(cheng)小(xiao)部分-70 ℃保存(cun)，避(bi)免(mian)反復冷凍。盡(jin)可能(neng)

不(bu)要使(shi)用(yong)溶血(xue)或高(gao)血(xue)脂血(xue)。如(ru)果血(xue)清中大量(liang)顆粒，檢(jian)測前先離心(xin)或過(guo)濾。不(bu)要在(zai)37℃或更(geng)高的溫(wen)度(du)加(jia)熱解(jie)凍。應在室溫(wen)下(xia)解(jie)凍並確保樣(yang)品(pin)均(jun)勻地充分(fen)解(jie)凍。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)：

實驗(yan)開(kai)始前，各試(shi)劑均(jun)應平(ping)衡至室(shi)溫(wen)，試(shi)劑不(bu)能(neng)直(zhi)接(jie)在37℃溶(rong)解(jie)；試劑或樣(yang)品(pin)配制(zhi)時，均(jun)需充分(fen)混(hun)勻，混(hun)勻(yun)時盡(jin)量(liang)避免起(qi)泡。實驗(yan)前應樣(yang)品(pin)含量，如(ru)樣(yang)品(pin)濃度(du)過高(gao)時，應對(dui)樣(yang)品(pin)進(jin)行(xing)稀(xi)釋，以(yi)使稀(xi)釋後(hou)的樣(yang)品(pin)符(fu)合試劑盒的檢(jian)測(ce)範圍(wei)，計(ji)算(suan)時再(zai)乘以(yi)相應(ying)的稀(xi)釋倍(bei)數。

1、加(jia)樣(yang)：分別設空白(bai)孔(空白(bai)對照孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶標試(shi)劑(ji)，其(qi)余各步(bu)操(cao)作(zuo)相(xiang)同)、標準孔、待測樣(yang)品(pin)孔。在酶標包被(bei)板上(shang)標準品(pin)準確加(jia)樣(yang)50?l，待測樣(yang)品(pin)孔中先加(jia)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液(ye)40?l，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待測樣(yang)品(pin)10?l（樣(yang)品(pin)zui終(zhong)稀(xi)釋度(du)為(wei)5倍）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品(pin)加(jia)於酶(mei)標(biao)板孔(kong)底部，盡(jin)量(liang)不(bu)觸(chu)及(ji)孔壁，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混勻。

2、溫(wen)育(yu)：用封板膜(mo)封板後(hou)置 37℃溫(wen)育(yu)30分鐘。

3、配液(ye)：將(jiang)30倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌液(ye)用(yong)蒸餾水30倍稀(xi)釋後(hou)備(bei)用

4、洗(xi)滌：小(xiao)心揭(jie)掉封板膜(mo)，棄去液(ye)體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌液(ye)，靜(jing)置30秒(miao)後(hou)棄去，如(ru)此重(zhong)復5次(ci)，拍(pai)幹(gan)。

5、加(jia)酶：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶標(biao)試(shi)劑(ji)50?l，空白(bai)孔除(chu)外(wai)。

6、顯(xian)色(se)：每孔先加(jia)入顯色(se)劑A50?l，再(zai)加(jia)入顯色(se)劑B50?l，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混勻，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)10 分鐘.

7、終(zhong)止：每(mei)孔加(jia)終(zhong)止液(ye)50ml，終(zhong)止反(fan)應(此(ci)時藍色(se)立轉黃色(se))。

8、測定(ding)：以(yi)空白(bai)空調零，450nm波(bo)長(chang)依(yi)序(xu)測量各孔(kong)的吸光(guang)度(du)(OD值(zhi))。測定(ding)應在(zai)加(jia)終(zhong)止液(ye)後(hou)15分(fen)鐘(zhong)以(yi)內進(jin)行(xing)。