載脂蛋白ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)操作(zuo)流(liu)程(cheng)如(ru)下(xia)：

1待(dai)測(ce)樣品(pin)孔(kong)中(zhong)每孔(kong)加(jia)入待(dai)測(ce)樣品(pin)100μl，每(mei)種樣品(pin)設(she)3個(ge)平行(xing)孔(kong)；設兩(liang)個(ge)陰性(xing)對照孔(kong)，每孔(kong)加(jia)未處(chu)理組(zu)的(de)細胞(bao)裂解液(ye)100μl；另設壹(yi)個(ge)空白對照孔(kong)，加(jia)入純(chun)細胞(bao)裂解液(ye)100μl。

2酶標(biao)板置4℃，包(bao)被過(guo)夜(ye)。

3洗(xi)板：吸幹孔(kong)內反應(ying)液(ye)，用洗(xi)滌(di)液(ye)過(guo)洗(xi)壹(yi)遍(bian)將洗滌(di)液(ye)註滿(man)板孔(kong)後，即甩(shuai)去，之(zhi)後將洗滌(di)液(ye)註滿(man)板孔(kong)，浸泡1-2分鐘(zhong)，間(jian)歇搖(yao)動。甩(shuai)去孔(kong)內液(ye)體後(hou)在吸(xi)水紙(zhi)上拍幹。重復洗(xi)滌3-4次(ci)。

4陰(yin)性(xing)對照孔(kong)每孔(kong)加(jia)入pbs 50μl，樣品(pin)孔(kong)及空(kong)白孔(kong)每孔(kong)加(jia)入1:500稀(xi)釋(shi)的(de)兔(tu)抗人aif抗體工(gong)作(zuo)液(ye)50μl。

5酶標(biao)板置37℃培(pei)養箱的(de)濕盒(he)內(nei)，孵育60min。

6洗(xi)板，同4。

7每孔(kong)加(jia)1:5000稀(xi)釋(shi)的(de)hrp-標(biao)記(ji)的(de)山羊(yang)抗兔(tu)抗體工(gong)作(zuo)液(ye) 100μl。

8酶標(biao)板置37℃培(pei)養箱的(de)濕盒(he)內(nei)，孵育60min。

9洗(xi)板，同4。

10每孔(kong)加(jia)tmb顯(xian)色液(ye) 100μl，輕輕混(hun)勻(yun)10s，置37℃暗(an)處反(fan)應(ying)15-20min。

11每(mei)孔(kong)加(jia)100μl 2mol/l h2so4終止(zhi)反應(ying)。

12分(fen)別(bie)測450nm 吸光(guang)值(zhi)w1和(he)630nm吸(xi)光(guang)值(zhi)w2，終(zhong)測(ce)得(de)的(de)od值為(wei)兩(liang)者(zhe)之(zhi)差w1-w2，以(yi)減(jian)少由容(rong)器上的(de)劃痕(hen)或指印等(deng)造(zao)成(cheng)的(de)光(guang)幹(gan)擾(rao)。

13數據處理：在(zai)得(de)出標(biao)本s和陰(yin)性(xing)對照n的(de) od值後(hou)，計(ji)算(suan)s/n值。s/n***2.1為(wei)陽(yang)性(xing)判(pan)定標(biao)準。