ELISA實驗(yan)以(yi)靈敏度較高、特異(yi)性較好的特點(dian)在臨(lin)床(chuang)上得(de)到了廣泛(fan)的應(ying)用(yong)，但操作中(zhong)的各(ge)個環節對(dui)試驗(yan)的檢測效果(guo)影響較大，如(ru)不(bu)註(zhu)意，有可能導致顯色(se)不(bu)全、花(hua)板(ban)等結(jie)果(guo)。下面(mian)分析Elisa試驗(yan)操(cao)作中(zhong)標(biao)本(ben)的選擇與(yu)準(zhun)備：

      用(yong)於ELISA測(ce)定(ding)的臨床(chuang)標本最(zui)為(wei)常(chang)用(yong)的是(shi)血(xue)清(漿(jiang))，有時(shi)因(yin)為(wei)特定(ding)的檢測目的，也用(yong)到唾液(ye)、腦(nao)脊(ji)液、尿(niao)液、糞(fen)便(bian)等標(biao)本(ben)。目前(qian)臨床(chuang)上使用(yong)血(xue)清標(biao)本(ben)測(ce)定(ding)的標誌(zhi)物壹(yi)般有(you)傳(chuan)染(ran)性病原體(ti)的抗原(yuan)和(he)抗體(ti)、腫(zhong)瘤(liu)標(biao)誌(zhi)物、激(ji)素、特種蛋白、細胞因子(zi)和(he)治(zhi)療藥(yao)物等。對(dui)用(yong)於激(ji)素和(he)治(zhi)療藥(yao)物測(ce)定(ding)的血(xue)清標(biao)本(ben)的收(shou)集，要(yao)註(zhu)意收(shou)集時(shi)間甚或體(ti)位有可能會對測(ce)定(ding)結(jie)果(guo)產生影(ying)響。如(ru)ke 的松在早(zao)晨4～6點(dian)之(zhi)間，會(hui)有壹(yi)峰值(zhi)出(chu)現(xian)：生長激(ji)素(su)、促(cu)黃體(ti)激素(LH)和(he)促卵(luan)泡(pao)激素(su)(FSH)均(jun)以(yi)陣(zhen)發(fa)性方(fang)式(shi)釋(shi)放(fang)，因此，在測(ce)定(ding)此(ci)類(lei)激素(su)時，有(you)必要在密(mi)切(qie)相連的時間(jian)間隔內采取數(shu)份血(xue)樣(yang)本(ben)，以(yi)其(qi)中(zhong)間(jian)值(zhi)為(wei)測定(ding)值(zhi)。又(you)如(ru)當從臥(wo)位變(bian)為(wei)站(zhan)立(li)位(wei)時(shi)，血(xue)清中(zhong)腎(shen)素(su)活(huo)性將出(chu)現(xian)明顯增(zeng)高。再如(ru)治(zhi)療藥(yao)物的檢測，應(ying)根據(ju)藥代(dai)動(dong)力學選擇服藥(yao)後(hou)的最適(shi)時間抽(chou)血(xue)檢測。用(yong)於傳(chuan)染(ran)性病原體(ti)的抗原(yuan)和(he)抗體(ti)、腫(zhong)瘤(liu)標(biao)誌(zhi)物和(he)特種蛋白等的檢測的血(xue)清標(biao)本(ben)的收(shou)集則(ze)沒有時(shi)間(jian)和(he)體(ti)位方(fang)面(mian)的影響，只是(shi)在處理(li)和(he)保存(cun)方(fang)面(mian)需要考慮(lv)方(fang)面(mian)：

   1、要註(zhu)意避免出(chu)現(xian)嚴重溶血(xue)。血(xue)紅(hong)蛋白中(zhong)含有血(xue)紅(hong)素基(ji)團(tuan)，其(qi)有(you)類(lei)似過(guo)氧化物的活性，因此(ci)，在以(yi)HRP為(wei)標記酶的ELISA測定(ding)中(zhong)，如(ru)血(xue)清標(biao)本(ben)中(zhong)血(xue)紅(hong)蛋白濃(nong)度較高，則其(qi)就(jiu)很容易(yi)在溫(wen)育過(guo)程中(zhong)吸附(fu)於固(gu)相，從而(er)與後(hou)面(mian)加入的HRP底物反(fan)應(ying)顯色(se)。

    2、樣(yang)本的采集(ji)及血(xue)清分(fen)離(li)中(zhong)要(yao)註(zhu)意盡(jin)量避免細菌汙染(ran)，壹(yi)則細菌的生長，其(qi)所分泌(mi)的壹(yi)些酶可(ke)能會(hui)對(dui)抗原抗(kang)體(ti)等蛋(dan)白產生(sheng)分解(jie)作用(yong);二(er)則壹(yi)些細菌的內源性酶如(ru)大腸(chang)桿(gan)菌(jun)的β-半乳糖苷酶本(ben)身會(hui)對(dui)用(yong)相應(ying)酶作標記(ji)的測定(ding)方(fang)法(fa)產生(sheng)非(fei)特(te)異(yi)性幹擾(rao)。

    3、血(xue)清標(biao)本(ben)如(ru)是(shi)以(yi)無菌操作分離(li)，則可(ke)以(yi)在2～8℃下(xia)保(bao)存壹(yi)周，如(ru)為(wei)有菌操作，則建(jian)議冰凍保(bao)存(cun)。樣(yang)本(ben)的長時(shi)間(jian)保(bao)存，應(ying)在-70℃以(yi)下(xia)。

     4、冰凍保(bao)存(cun)的血(xue)清標(biao)本(ben)須(xu)註(zhu)意避免因停(ting)電(dian)等造(zao)成(cheng)的反復(fu)凍融。標本的反復(fu)凍融所產生(sheng)的機(ji)械(xie)剪(jian)切(qie)力將對(dui)標本(ben)中(zhong)的蛋白等分(fen)子(zi)產生(sheng)破(po)壞作用(yong)，從而(er)引起假陰(yin)性結果(guo)。此外(wai)，凍(dong)融標本的混勻(yun)亦(yi)應(ying)註(zhu)意，不(bu)要進(jin)行劇烈振(zhen)蕩(dang)，反復顛(dian)倒(dao)混勻(yun)即可(ke)。

     5、標本(ben)在保(bao)存(cun)中(zhong)如(ru)出(chu)現(xian)細菌汙染(ran)所致的混濁(zhuo)或絮狀物時(shi)，應(ying)離心(xin)沈澱後(hou)取上清檢測。

註(zhu)意事項(xiang)：

血(xue)清標(biao)本(ben)宜(yi)在新鮮(xian)時(shi)檢測。如(ru)有(you)細菌汙染(ran)，菌體(ti)中(zhong)可(ke)能(neng)含有內源性HRP，也會產(chan)生(sheng)假陽性反應(ying)。如(ru)在冰箱中(zhong)保(bao)存(cun)過(guo)久，其(qi)中(zhong)的可發(fa)生聚合(he)，在間(jian)接(jie)法ELISA中(zhong)可(ke)使(shi)本(ben)底加深。壹(yi)般說(shuo)來，在5天(tian)內測定(ding)的血(xue)清標(biao)本(ben)可(ke)放(fang)置於4℃，超(chao)過(guo)壹(yi)周測(ce)定(ding)的需低(di)溫(wen)冰存。凍(dong)結(jie)血(xue)清融解後(hou)，蛋白質局部(bu)濃(nong)縮(suo)，分(fen)布(bu)不(bu)均(jun)，應(ying)充(chong)分混勻(yun)宜輕緩(huan)，避(bi)免(mian)氣泡(pao)，可上(shang)下顛倒(dao)混和(he)，不(bu)要在混勻(yun)器上(shang)強烈(lie)振蕩(dang)。混濁(zhuo)或有(you)沈澱(dian)的血(xue)清標(biao)本(ben)應(ying)先(xian)離心(xin)或過(guo)濾，澄(cheng)清後(hou)再檢測。反復凍(dong)融會使抗體(ti)效價(jia)跌落，所以測(ce)抗體(ti)的血(xue)清標(biao)本(ben)如(ru)需保存(cun)作多(duo)次(ci)檢測，宜少量分裝冰存。保(bao)存(cun)血(xue)清自(zi)采(cai)集(ji)時(shi)就應(ying)註(zhu)意無菌操作，也可加(jia)入適(shi)當防腐劑(ji)。