NRK-49F正常大鼠腎細(xi)胞(bao)

公司(si)產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研研究(jiu)使用、不(bu)得(de)用於臨(lin)床(chuang)診斷！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變圓(yuan)後(hou)加入 5ml 培養(yang)

液(ye)終(zhong)止(zhi)消化(hua)，再(zai)輕輕吹(chui)打細(xi)胞使之脫落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例進(jin)行(xing)分(fen)瓶傳(chuan)代，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)；

2、細(xi)胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變圓(yuan)後(hou)加入培養(yang)液(ye)終(zhong)

止(zhi)消化(hua)，輕輕吹(chui)打細(xi)胞使之脫落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並(bing)放(fang)置(zhi)於凍存管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞(bao)凍存管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)中(zhong)進(jin)行(xing)長(chang)期保(bao)存。使用程(cheng)序

降(jiang)溫盒(he)可直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇細胞：以(yi)下(xia)細胞培養(yang)凍存處(chu)理(li)僅供參考(kao)，具(ju)體(ti)操作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍存管在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃解凍，加4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將所(suo)有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入含適(shi)量培(pei)養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過(guo)夜（或將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二(er)天換(huan)液(ye)並檢查細胞密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如果細胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置(zhi)於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細胞情況而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞消化(hua)情況，若(ruo)細胞(bao)大部(bu)分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落(luo)，迅速(su)拿回操作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾下(xia)培養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後裝入無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比例分到新的(de)含8 mL培養(yang)基(ji)的新皿(min)中(zhong)或者瓶中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍存：待細(xi)胞(bao)生長狀態良(liang)好時，可進(jin)行(xing)細(xi)胞凍存。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集(ji)細胞(bao)及細(xi)胞培(pei)養(yang)液(ye)，裝入無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞凍存液(ye)，使細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每支(zhi)凍存管凍存1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍存管做好標識(shi)。將凍存管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)灌儲存。記錄(lu)凍存管位置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取。

三(san)、培養(yang)註(zhu)意事(shi)項 

1. 收到細胞(bao)後(hou)首先觀察(cha)細(xi)胞瓶是否(fou)完(wan)好，培養(yang)液(ye)是否有漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生請及時(shi)和我(wo)們(men)聯系。

2. 仔細閱讀(du)細胞說明(ming)書(shu)，了解(jie)細(xi)胞相關信息，如細胞形態、所用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例、所需 細(xi)胞(bao)因子等，確(que)保細(xi)胞(bao)培養(yang)條(tiao)件(jian)壹致，若(ruo)由於(yu)培養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題，責(ze)任由(you) 客(ke)戶自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀態。因(yin)運輸(shu)問(wen)題，部(bu)分細(xi)胞由(you)於溫度(du) 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好細胞(bao)狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精消毒瓶壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可以(yi)消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的(de)培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客戶用(yong)相同條(tiao)件(jian)的培養(yang)基(ji)用於細(xi)胞培養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶收到細胞(bao)後(hou)前 3 天各(ge)拍幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便於(yu)和我司(si)技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流。由於(yu)運輸(shu)的原因，個(ge)別敏感(gan)細胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩定的情況，請及時(shi)和我(wo)們(men)聯系，告(gao)知細(xi)胞 的(de)具(ju)體(ti)情況，以(yi)便(bian)我們的技(ji)術人(ren)員跟蹤回訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題解(jie)決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研使用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸(shu)用的培養(yang)基(ji) (灌液(ye)培養(yang)基(ji)) 不(bu)能再(zai)用來培養(yang)細(xi)胞，請換(huan)用按(an)照說明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新配(pei)制的培養(yang)基(ji)來培養(yang)細(xi)胞。     收到細胞(bao)後(hou)第壹次(ci)傳(chuan)代建議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

Nox1： 有(you)絲(si)分裂氧化(hua)酶(mei)1抗(kang)體 SGK3 Others Human 人 SGK3 / SGKL 桿狀(zhuang)病毒-昆(kun)蟲細胞(bao)裂解液(ye) (陽性(xing)對照)

(含(han)100mL 酶(mei)解(jie)緩沖液(ye)) 10mL 大鼠Ⅹ(FⅩ)ELISA 試劑(ji)盒 p53(Mouse p53/tumor protein)  小(xiao)鼠p53 96T

NADPH oxidase 3： NADPH oxidase 3抗(kang)體(ti) 22RV1細(xi)胞，前(qian)列腺癌(ai)細(xi)胞 人肝(gan)癌(ai)細(xi)胞,Bel-7405細胞(bao) CL-0024Anglne(人卵巢(chao)癌(ai)細(xi)胞)5×106cells/瓶×2

HA Others H4N8 甲型流感(gan) H4N8 (A/chicken/Alabama/1/1975) 血(xue)凝(ning)素HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽性(xing)對照) 大鼠Ⅹ(F10)ELISA試劑(ji)盒 cGMP(Mouse Cyclic guanosine monophosphate)  小(xiao)鼠環0酸(suan)鳥苷(gan) 96T

NADPH oxidase 4： NADPH氧(yang)化(hua)酶(mei)NOX家(jia)族的(de)成員4抗體(ti) 小(xiao)腸血(xue)管內(nei)皮(pi)細胞Many types of cells包裝：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)

CXCL16 Others Rat 大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 人細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽性(xing)對照) 牛支(zhi)原(yuan)體(ti)ELISA試劑(ji)盒 PAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c) 0脂(zhi)酸(suan)0酸(suan)酶(mei)2C(抗(kang)原) 0.5mg

phospho-c-Jun(Thr93)： 0酸(suan)化(hua)原(yuan)癌(ai)基(ji)因c-Jun抗體(ti) 小(xiao)鼠漿(jiang)細胞(bao)瘤(liu);MPC-11

L929細(xi)胞(bao)，小(xiao)鼠肺成纖維(wei)細(xi)胞 SGC7901(胃(wei)腺癌(ai)細(xi)胞) 大鼠腦膠質(zhi)瘤(liu)細(xi)胞(bao);C6 牛載(zai)脂蛋白(bai)B100(apo-B100)ELISA 試劑(ji)盒 PEPT1 (Peptide-transporters 1) 腸道(dao)肽轉(zhuan)運蛋白(bai)(小(xiao)肽(tai)轉(zhuan)運蛋白(bai))多肽(tai) 0.5mg

JAK2： 蛋白(bai)質(zhi)酪(lao)酸(suan)激酶(mei)JAK2抗(kang)體 ICAM1 Others Mouse 小(xiao)鼠 ICAM-1 / CD54 人細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽性(xing)對照)

人(ren)腎(shen)系(xi)膜細(xi)胞(bao)cDNAHRMC cDNA 牛孕激素/孕酮(PROG)ELISA 試劑(ji)盒 PTEN/MMAC1 壹(yi)種抑(yi)制(zhi)基(ji)因(yin)抗(kang)原 0.5mg

NRK-49F正(zheng)常大鼠腎細(xi)胞(bao)Hacat 人(ren)永生化(hua)角(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao) 大鼠Wolfram綜合征蛋白(bai)1(WFS1)ELISA試劑(ji)盒 Human hypothetical protein LOC677340  人(ren)假定蛋白(bai)LOC677340 96T

RNF12： 環(huan)指(zhi)蛋白(bai)12抗(kang)體 SH-77細胞，小(xiao)細(xi)胞(bao)肺癌(ai) 人(ren)T細胞白(bai)血(xue)病細(xi)胞(bao),T-CEM細(xi)胞 人(ren)T淋(lin)巴(ba)瘤轉(zhuan)基因(yin)細(xi)胞(bao);Jurkat D,E

EPHA4 Others Human 人(ren) EPHA4 人(ren)細(xi)胞裂解液(ye) (陽性(xing)對照) 大鼠WAP四二(er)硫化(hua)物核(he)心域(yu)蛋白(bai)1(WFDC1)ELISA試劑(ji)盒 Human hypothetical protein LOC433328  人(ren)假定蛋白(bai)LOC433328 96T

RNF113B： 環(huan)指(zhi)蛋白(bai)113B抗(kang)體 羅(luo)猴胎(tai)腎(shen)細(xi)胞(bao);MA104

CM-R115大鼠小(xiao)梁(liang)網(wang)細胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji)100mL 大鼠V-Rel網狀(zhuang)內(nei)皮(pi)增生病毒癌(ai)基(ji)因同源物A(RELA)ELISA試劑(ji)盒 MYD88(Human myeloid differentiation primary response gene 88)  人(ren)髓(sui)樣(yang)分(fen)化(hua)因(yin)子(zi)初(chu)次(ci)應(ying)答(da)基因(yin)88 96T