Nthy-ori 3-1人(ren)甲狀(zhuang)腺正常細胞

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中的培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液終止(zhi)消(xiao)化，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈澱細胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸，然後(hou)按(an) 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶傳代，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中的培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru)培養(yang)液終

止(zhi)消(xiao)化，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並(bing)放置於(yu)凍(dong)存管中；

4）先將(jiang)細胞凍(dong)存管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉入液氮中進行(xing)長期(qi)保(bao)存。使用程序

降(jiang)溫(wen)盒(he)可直(zhi)接放入-80℃。

二(er)、細胞培養(yang)操作

1) 復蘇(su)細胞：以(yi)下細胞培養(yang)凍(dong)存處(chu)理(li)僅供(gong)參考(kao)，具(ju)體操作步驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說明書為主。將(jiang)含(han)有1 mL細胞懸(xuan)液的凍(dong)存(cun)管在(zai) 37℃水浴(yu)中迅速搖晃(huang)解凍，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所有細胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量培養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶中培養(yang)過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二天(tian)換液並檢(jian)查細胞密(mi)度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代：如果細胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳代培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中，使消(xiao)化液浸潤(run)所有細胞，將(jiang)培養(yang)瓶置於37℃培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞情況(kuang)而定(ding)），然後(hou)在(zai)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞消(xiao)化情況(kuang)，若(ruo)細胞大部(bu)分(fen)變圓並脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿回(hui)操作臺，輕(qing)敲幾下(xia)培養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後裝入(ru)無菌(jun)離(li)心管中，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液按(an)1:2比例(li)分(fen)到新(xin)的含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的新(xin)皿中或者(zhe)瓶中，置於培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存：待(dai)細胞生(sheng)長狀態良(liang)好時(shi)，可進(jin)行(xing)細胞凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為例(li)；a、收集(ji)細胞及(ji)細胞培養(yang)液，裝入(ru)無菌(jun)離(li)心管中，1000 rpm條件下離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計(ji)數(shu)。

b、根據細胞數(shu)量加(jia)入(ru)無血清(qing)細胞凍(dong)存液，使細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支(zhi)凍存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞懸(xuan)液，註意凍(dong)存(cun)管做好標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置(zhi)以(yi)便下(xia)次(ci)拿取(qu)。

公(gong)司(si)正在(zai)出售的產(chan)品(pin)：

IL36A Protein Mouse 重組小(xiao)鼠 IL-1F6 / IL-1 epsilon 蛋白(bai) 大鼠硒(xi)蛋白(bai)P1(SEPP1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) MT(Mouse Melatonin)  小(xiao)鼠褪(tui)黑(hei)素(su) 96T

Mst2： 蛋白(bai)激(ji)酶MST2抗(kang)體 GSK3B Others Mouse 小(xiao)鼠 GSK3B 桿(gan)狀(zhuang)病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

小(xiao)鼠氣(qi)管和支(zhi)氣(qi)管上(shang)皮(pi)細胞培養(yang)基(ji) 100mL 大鼠硒(xi)蛋白(bai)P(SEPP1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) IL-18(Human Interleukin 18)  人(ren)白介(jie)素(su)18 96T

MSY2： DNA結(jie)合(he)蛋白(bai)C抗(kang)體 TE-11細胞，食(shi)管癌(ai)細胞 人(ren)食(shi)管癌(ai)細胞,CaEs-17細胞 大鼠胰(yi)腺(xian)外分(fen)泌腺細胞;AR42J

SPINK4 Others Mouse 小(xiao)鼠 SPINK4 人(ren)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 大鼠戊糖素(su)(PTD)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) CD44  大鼠CD44分(fen)子 96T

HCMV UL49： 人(ren)巨細胞病毒UL49蛋白(bai)抗(kang)體 CD36 Others Mouse 小(xiao)鼠 CD36 / GP3B / SCARB3 人(ren)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

小(xiao)鼠誘(you)導(dao)性(xing)多(duo)潛(qian)能(neng)幹(gan)細胞;PUMC-mips-D2 人(ren)促腎上(shang)皮質(zhi)激素(su)釋放(fang)激(ji)素(su)(CRH)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) IKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha) KB抑(yi)制(zhi)蛋白(bai)α抗(kang)原 0.5mg

HNF1 beta： 肝(gan)細胞核(he)因(yin)子(zi)1β/HNF-1β抗(kang)體 EB病毒轉化的(de)人(ren)B淋巴(ba)細胞;KMY0919

NCI-H292(人(ren)肺癌(ai)細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感(gan) H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 人(ren)促卵(luan)泡(pao)素(su)(FSH)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) IL-12(Interleukin-12) 白(bai)介(jie)素(su)12抗(kang)原(白細胞介(jie)素(su)-12) 0.5mg

HHLA3： HHLA3蛋白(bai)抗(kang)體 豬角(jiao)膜(mo)上(shang)皮(pi)細胞PCEpiC

Nthy-ori 3-1人(ren)甲狀(zhuang)腺正常細胞人(ren)正常(chang)肺上皮細胞;BEAS-2B 人(ren)淋巴(ba)內皮細胞培養(yang)基(ji) 100mL 大鼠蛋白(bai)激(ji)酶Cα相(xiang)互(hu)作用蛋白(bai)1(PICK1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) ET-1(Human Endothelin 1)  人(ren)內皮(pi)素(su)1 96T

CAF1p55： 染(ran)色(se)質(zhi)組裝因(yin)子(zi)1P55抗(kang)體 腎癌(ai)組織(zhi)源性(xing)原(yuan)代細胞Many types of cells包裝：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)/1ml

人(ren)骨(gu)髓(sui)間充(chong)質(zhi)幹(gan)細胞(hMSCs) 大鼠蛋白(bai)激(ji)酶Cα(PKCα)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) FSH(Human follicle-stimulating hormone)  人(ren)促卵(luan)泡(pao)素(su) 96T

PTRF： RNA聚(ju)合(he)酶1和轉(zhuan)錄(lu)釋放(fang)因(yin)子(zi)抗(kang)體 CDH13 Others Rat 大鼠 CDH13 / Cadherin-13 / H Cadherin 人(ren)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

NCI-H524 人(ren)小(xiao)細胞肺(fei)癌 大鼠蛋白(bai)激(ji)酶C(PKC)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) f- BetahCG(Human free chorionic gonadotropin)  人(ren)遊(you)離(li)β絨(rong)毛膜 96T

三、培養(yang)註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細胞後(hou)首(shou)先觀(guan)察細胞瓶是否完好，培養(yang)液是否有漏液、渾濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有上述(shu)現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔細閱讀(du)細胞說明書，了解細胞相(xiang)關信息，如細胞形(xing)態、所用(yong)培養(yang)基(ji)、血清(qing)比例(li)、所需(xu) 細胞因(yin)子(zi)等(deng)，確(que)保(bao)細胞培養(yang)條(tiao)件壹致(zhi)，若由於培養(yang)條(tiao)件不壹(yi)致而導(dao)致(zhi)細胞出現問題，責任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭細胞瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題，部分(fen)細胞由(you)於溫度(du) 變(bian)化及(ji)劇(ju)烈(lie)碰亡破(po)碎形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是正常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察好細胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置於 37℃培養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接混勻收集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮的(de)培養(yang)基(ji)重懸 細胞，並(bing)接種到新(xin)的培養(yang)瓶或培養(yang)皿(min)中，置於培養(yang)箱(xiang)中進行(xing)培養(yang)。

5. 請客戶(hu)用相(xiang)同條件的培養(yang)基(ji)用於(yu)細胞培養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收到(dao)細胞後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和我(wo)司(si)技術(shu)部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流。由於(yu)運(yun)輸的原(yuan)因(yin)，個別敏(min)感(gan)細胞會(hui)出現不穩(wen)定的(de)情況(kuang)，請及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯系(xi)，告知(zhi)細胞 的(de)具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便我(wo)們(men)的技(ji)術人(ren)員跟(gen)蹤回(hui)訪直(zhi)至問題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供科研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運輸用(yong)的(de)培養(yang)基(ji) (灌(guan)液培養(yang)基(ji)) 不能(neng)再(zai)用(yong)來培養(yang)細胞，請換用(yong)按(an)照(zhao)說明書細胞培 養(yang)條(tiao)件新(xin)配制(zhi)的(de)培養(yang)基(ji)來培養(yang)細胞。     收到(dao)細胞後(hou)第壹次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。