SK-ES-1細胞

公(gong)司產(chan)品僅供(gong)科研(yan)研究(jiu)使(shi)用、不(bu)得用於(yu)臨(lin)床診斷！

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培養液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞壹次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培養瓶中(zhong)，倒置顯微鏡下觀察，待細(xi)胞回縮(suo)變圓後(hou)加入(ru) 5ml 培養

液終(zhong)止消(xiao)化，再輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞(bao)用 1-2ml 培養基重懸，然後(hou)按(an) 1:2 比例進(jin)行分瓶(ping)傳(chuan)代，最後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞培養箱中(zhong)培養；

2、細胞(bao)凍存(cun)：

1）細胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中(zhong)的(de)培養液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞壹次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培養瓶中(zhong)，倒置顯微鏡下觀察，待細(xi)胞回縮(suo)變圓後(hou)加入(ru)培養液終(zhong)

止消(xiao)化，輕輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞，並放置於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍存(cun)管(guan)放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉入(ru)液(ye)氮中(zhong)進(jin)行長期保(bao)存(cun)。使(shi)用程(cheng)序降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直接放入(ru)-80℃。

壹(yi)、商品介紹：

二(er)、細(xi)胞培養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以下細胞(bao)培養凍存(cun)處理僅供(gong)參考(kao)，具體操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產品說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主。將(jiang)含(han)有1 mL細胞(bao)懸液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速搖晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培養基混合均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培養基後吹(chui)勻。然後(hou)將(jiang)所(suo)有細胞(bao)懸液(ye)加入(ru)含(han)適(shi)量培養基的培養瓶中(zhong)培養過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培養基，培養過夜(ye)）。第二(er)天(tian)換(huan)液(ye)並檢查(zha)細(xi)胞密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果細胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳(chuan)代培養。

a、棄去(qu)培養上清(qing)，用不(bu)含鈣、鎂離子的PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液浸(jin)潤(run)所(suo)有細胞(bao)，將(jiang)培養瓶置(zhi)於(yu)37℃培養箱中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況(kuang)而(er)定），然後(hou)在(zai)顯(xian)微鏡下觀察細胞(bao)消(xiao)化情況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大部(bu)分變(bian)圓並脫(tuo)落，迅速拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲幾(ji)下培養瓶後(hou)加2-3ml培養基終止(zhi)消(xiao)化。輕輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培養液後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比例分到(dao)新的(de)含8 mL培養基的新皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱中(zhong)培養。 3) 細胞(bao)凍存(cun)：待細胞生(sheng)長狀態良(liang)好時(shi)，可(ke)進(jin)行(xing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及細胞(bao)培養液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞數(shu)量加入(ru)無(wu)血清細胞(bao)凍存液，使(shi)細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支凍(dong)存(cun)管(guan)凍存1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管(guan)做好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮灌(guan)儲存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存管(guan)位置以便下次拿(na)取(qu)。

三(san)、培養註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後首先觀(guan)察細胞(bao)瓶是(shi)否完(wan)好，培養液是(shi)否有漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有上述現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了解(jie)細胞(bao)相(xiang)關(guan)信息，如(ru)細胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培養基、血清(qing)比例(li)、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因子(zi)等(deng)，確保細(xi)胞培養條件壹(yi)致，若(ruo)由(you)於(yu)培養條件不(bu)壹(yi)致而(er)導(dao)致細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行承擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯微鏡下觀察細胞(bao)狀態。因運(yun)輸(shu)問題(ti)，部分細(xi)胞(bao)由於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎形成(cheng)碎(sui)片(pian)，是正常現(xian)象(xiang)。觀(guan)察好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞(bao)可(ke)以消(xiao)化，懸浮細胞直接混勻收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培養基重懸 細(xi)胞，並接種到新的(de)培養瓶或(huo)培養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱中(zhong)進(jin)行培養。

5. 請客戶(hu)用(yong)相同條件的(de)培養基用於(yu)細(xi)胞培養。

6. 建(jian)議(yi)客戶(hu)收(shou)到細胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司技術(shu)部(bu)溝通(tong) 交流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的原因，個(ge)別(bie)敏(min)感細(xi)胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩定(ding)的(de)情況(kuang)，請及時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告知細胞(bao) 的(de)具體情況(kuang)，以(yi)便我(wo)們(men)的(de)技術(shu)人員跟(gen)蹤(zong)回訪直至問(wen)題(ti)解決。

7. 該細胞(bao)僅供(gong)科研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用的培養基 (灌(guan)液培養基) 不能(neng)再用(yong)來培養細胞(bao)，請換(huan)用(yong)按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)細胞(bao)培 養條件新配(pei)制(zhi)的培養基來培養細胞(bao)。     收到(dao)細胞後第壹次傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公司正(zheng)在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品：

大鼠(shu)腸脂(zhi)肪(fang)酸(suan)結合蛋(dan)白(bai)(iFABP)ELISA 試劑盒(he) 96T/48T 試劑盒(he) 組(zu)裝(zhuang)/原裝(zhuang)

ELISAKiths-CRP猴(hou)超(chao)敏(min)C反應蛋白(bai)規格(ge)：48T/96T

人G Fc段(duan)受(shou)體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)免(mian)疫(yi)試劑盒(he) Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅠ ELISA Kit

MouseUlasensitivityi-iodothyronine,u-T3ELISAKit小鼠高(gao)敏(min)狀腺(xian)原(u-T3)ELISA試劑盒(he)規(gui)格(ge)：96T/48T

石蠟切(qie)片(pian)組(zu)織(zhi)CASPASE-10蛋白表(biao)達(da)NBT顯色光學(xue)顯微鏡檢測(ce)試(shi)劑盒(he)10/20次

Humancatecholamine，CAELISAKit人兒茶酚(fen)胺(an)(CA)ELISA試劑盒(he)規(gui)格(ge)：96T/48T

人破(po)傷(shang)風抗體(Tetanus Ab)ELISA 試劑盒(he) 96T/48T 試劑盒(he) 組(zu)裝(zhuang)/原裝(zhuang)

小鼠腺(xian)苷高(gao)半胱酶(AHCY)免(mian)疫(yi)試劑盒(he) Mouse Adenosylhomocysteinase,AHCY ELISA kit

大腸桿(gan)菌(jun)通(tong)用型(EC-U)檢測(ce)試(shi)劑盒(he)(PCR-熒(ying)光探針(zhen)法(fa)) 48T

HumanSalusinαELISA試劑盒(he)人Salusin-αELISA試劑盒(he)規(gui)格(ge)：96T/48T

乳品類食(shi)物(wu)DNA分離(li)試(shi)劑盒(he)10次

ELISAKitCTGF人結締(di)組(zu)織(zhi)生(sheng)長因子(zi)規(gui)格(ge)：48T/96T

大鼠(shu)血纖蛋白(bai)原降(jiang)解產物(wu)(FDP)ELISA 試劑盒(he) 96T/48T 試劑盒(he) 組(zu)裝(zhuang)/原裝(zhuang)

降(jiang)解產物(wu)(FDP)免(mian)疫(yi)試劑盒(he) Human Fibrinogen Degradation Product,FDP ELISA Kit

超(chao)氧化物歧(qi)化酶(SOD)測(ce)試(shi)盒(he) 可見分光光度(du)法(fa) 50管(guan)/48樣

腫瘤壞死(si)因子(zi)誘(you)導(dao)蛋白(bai)2抗體

冠狀病毒(du)抗體

肉(rou)毒堿棕(zong)櫚(lv)酰基轉移酶1B抗體

MSL3L1蛋白抗體

線(xian)粒(li)體二(er)羧酸(suan)載體蛋白抗體

白細胞介素-20抗體

磷酸(suan)化PDZ和(he)LIM結構域結(jie)合(he)蛋白5抗體

SK-ES-1細(xi)胞CD8重組(zu)兔(tu)單(dan)克隆抗體

血(xue)小板(ban)源性(xing)生(sheng)長因子(zi)受(shou)體B/PDGFRβ抗體