SK-CO-1細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產品(pin)僅(jin)供科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不得用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養

液(ye)終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比例進(jin)行分瓶(ping)傳代(dai)，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆蓋培(pei)養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru)培(pei)養液(ye)終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放置於(yu)凍存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍存(cun)管(guan)放置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮中進(jin)行長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程序(xu)降(jiang)溫盒可(ke)直接放入(ru)-80℃。

壹(yi)、商品(pin)介(jie)紹：

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存(cun)處(chu)理僅(jin)供參考(kao)，具體操(cao)作(zuo)步(bu)驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍，加4 mL培(pei)養基(ji)混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離心3 min，棄去上清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹勻(yun)。然(ran)後將所(suo)有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入(ru)含適量培(pei)養基(ji)的培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過夜(ye)）。第(di)二天換(huan)液(ye)並檢查細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄去培(pei)養上清(qing)，用(yong)不含鈣(gai)、鎂離子的(de)PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤所(suo)有細(xi)胞(bao)，將培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況而定(ding)），然(ran)後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲幾(ji)下培(pei)養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養基(ji)終止(zhi)消化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心管(guan)中，1000 rpm離心5 min，棄去上清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例分到(dao)新(xin)的含8 mL培(pei)養基(ji)的新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態良好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下離心4 min，棄去上清(qing)液(ye)，用PBS清洗(xi)壹遍，棄盡PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量加入(ru)無血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍存(cun)管(guan)做好(hao)標識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管(guan)位(wei)置以(yi)便下次(ci)拿(na)取(qu)。

三、培(pei)養註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後首(shou)先觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是否完好，培(pei)養液(ye)是否有漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有上述(shu)現(xian)象 發(fa)生(sheng)請及(ji)時(shi)和(he)我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說明(ming)書(shu)，了(le)解細(xi)胞(bao)相關信息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形態、所(suo)用培(pei)養基(ji)、血清(qing)比例、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養條(tiao)件不壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出現(xian)問題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自行承(cheng)擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)，部分細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫度 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈碰亡破(po)碎形成碎片(pian)，是正(zheng)常現(xian)象。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀態(tai)後，75%酒精消毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直接混(hun)勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中進(jin)行培(pei)養。

5. 請(qing)客戶用(yong)相同條(tiao)件的培(pei)養基(ji)用於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客戶收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後前 3 天各拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便於(yu)和(he)我司(si)技(ji)術(shu)部溝(gou)通(tong) 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的原因(yin)，個(ge)別敏(min)感細(xi)胞(bao)會出現(xian)不穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況，請及(ji)時(shi)和(he)我們聯(lian)系(xi)，告知細(xi)胞(bao) 的具體情(qing)況，以(yi)便我們的(de)技(ji)術(shu)人員(yuan)跟蹤回訪直至問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用的培(pei)養基(ji) (灌液培(pei)養基(ji)) 不能再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用(yong)按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配(pei)制的(de)培(pei)養基(ji)來培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後第(di)壹次傳代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：

Mouse FMS like tyrosine kinase 3 ligand (Flt3L) ELISA Kit 小(xiao)鼠(shu)FMS樣(yang)酪(lao)激(ji)酶3配(pei)體(Flt3L)ELISA試(shi)劑(ji)盒

大鼠(shu)腸脂(zhi)肪酸(suan)結合(he)蛋(dan)白(bai)(iFABP)ELISA試(shi)劑(ji)盒 ，英文名(ming)： iFABP ELISA Kit

ELISA 小(xiao)鼠(shu)粒(li)細(xi)胞(bao)集(ji)落(luo)刺(ci)激(ji)因(yin)子(zi)(mouse G-CSF) 48T/96T 進(jin)口分裝(zhuang)

CLIAKitforLDLELISAKit大鼠(shu)低密(mi)度(du)脂(zhi)蛋(dan)白(bai)規(gui)格：48T/96T

通(tong)用(yong)型N-乙(yi)酰(xian)-β-D-氨(an)基(ji)糖苷(gan)酶(NAG)活(huo)性(xing)比色法(fa)定(ding)量檢測試(shi)劑(ji)盒20次(ci)

人球(qiu)菌(jun)蛋(dan)白(bai)A(SPA)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 96T/48T 試(shi)劑(ji)盒 組(zu)裝(zhuang)/原(yuan)裝(zhuang)

小(xiao)鼠(shu)心肌肌鈣(gai)蛋(dan)白(bai)(cTn-Ⅰ)免疫(yi)試(shi)劑(ji)盒 Mouse cardiac oponin Ⅰ,cTn-Ⅰ ELISA kit

弧菌(jun)CTX基(ji)因(yin)檢測試(shi)劑(ji)盒(PCR-熒(ying)光(guang)探(tan)針(zhen)法(fa)) 48T

HumanSalmonellatyphiaigen,St-AgELISA試(shi)劑(ji)盒人抗(kang)原(yuan)(St-Ag)ELISA試(shi)劑(ji)盒規(gui)格：96T/48T

ELISAKitANG-4小(xiao)鼠(shu)血(xue)管(guan)生成素(su)4規(gui)格：48T/96T

ELISAKitsIgA大鼠(shu)分泌型A規(gui)格：48T/96T

大鼠(shu)血纖蛋(dan)白(bai)原降(jiang)解產(chan)物(FDP)ELISA試(shi)劑(ji)盒 ，英文名(ming)： FDP ELISA Kit

人β澱粉樣(yang)蛋(dan)白(bai)1-42(Aβ1-42)ELISA檢測試(shi)劑(ji)盒Humanamyloidbetapeptide1-42,Aβ1-42ELISAKit96T 96T/48T

大鼠(shu)P0蛋(dan)白(bai)(p0)免疫(yi)試(shi)劑(ji)盒 Rat myelin protein zero,p0 ELISA Kit

CLIAKitforSoybeanagglinin,SBAELISAKit大豆(dou)凝集(ji)素(su)規(gui)格：48T/96T

腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因(yin)子(zi)相關雕亡誘導(dao)配(pei)體抗(kang)體

冠(guan)狀病(bing)毒刺(ci)突糖蛋(dan)白(bai)抗(kang)體

肉(rou)毒(du)堿(jian)棕(zong)櫚酰(xian)基(ji)轉(zhuan)移酶1A抗(kang)體

MSL2抗(kang)體

線(xian)粒(li)體二羧(suo)酸載(zai)體蛋(dan)白(bai)20抗(kang)體

白(bai)細(xi)胞(bao)介素(su)1受(shou)體相關激(ji)酶1結(jie)合(he)蛋(dan)白(bai)1抗(kang)體

磷(lin)酸化(hua)P63腫(zhong)瘤(liu)抑(yi)制基(ji)因(yin)抗(kang)體

SK-CO-1細(xi)胞(bao)CD8抗(kang)體

血(xue)小板源(yuan)性(xing)生長(chang)因(yin)子(zi)受(shou)體A/PDGFRα抗(kang)體