SKG-IIIa細胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅供(gong)科研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得用於(yu)臨床(chuang)診斷(duan)！

壹(yi)、商品(pin)介(jie)紹：

1、細胞(bao)傳代(dai)：

1）細胞(bao)生長至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下觀察(cha)，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕輕吹打(da)細胞(bao)使之脫落，然(ran)後將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)培養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞(bao)生長至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下觀察(cha)，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹打(da)細胞(bao)使之脫落，然(ran)後將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並放置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管中；

4）先(xian)將細胞(bao)凍(dong)存(cun)管放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中進(jin)行(xing)長期保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序降溫盒(he)可(ke)直接放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞(bao)培養(yang)操作

1) 復(fu)蘇細胞(bao)：以(yi)下(xia)細胞(bao)培養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體操(cao)作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨貨產(chan)品(pin)說明書為主(zhu)。將(jiang)含(han)有1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍(dong)存(cun)管在 37℃水(shui)浴中迅速搖晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹勻(yun)。然(ran)後將所有細胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)含(han)適(shi)量培養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基，培養(yang)過夜）。第(di)二(er)天(tian)換液(ye)並檢(jian)查細胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果(guo)細胞(bao)密度達(da) 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上清，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使消化(hua)液浸潤(run)所有(you)細胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化1-2 min（視細胞(bao)情況(kuang)而(er)定），然(ran)後在顯微鏡下觀察(cha)細胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫落，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比例(li)分(fen)到新(xin)的含(han)8 mL培養(yang)基的新(xin)皿(min)中或(huo)者瓶中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細胞(bao)生長狀態(tai)良好時(shi)，可(ke)進(jin)行(xing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為例(li)；a、收集細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄盡PBS，進(jin)行(xing)細胞(bao)計(ji)數。

b、根據(ju)細胞(bao)數量(liang)加入(ru)無(wu)血清細胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管做(zuo)好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管位置(zhi)以(yi)便下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

三(san)、培養(yang)註(zhu)意(yi)事項 

1. 收到細胞(bao)後首(shou)先(xian)觀察(cha)細胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養(yang)液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象，若(ruo)有上述現(xian)象 發(fa)生請及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞(bao)說明書，了解(jie)細胞(bao)相(xiang)關信息，如(ru)細胞(bao)形態(tai)、所用(yong)培養(yang)基、血清(qing)比例(li)、所需(xu) 細胞(bao)因子(zi)等，確保(bao)細胞(bao)培養(yang)條(tiao)件(jian)壹致，若(ruo)由於(yu)培養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹致而(er)導致細胞(bao)出現(xian)問(wen)題，責(ze)任由 客(ke)戶自行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦(ca)拭細胞(bao)瓶表(biao)面，顯微鏡下觀察(cha)細胞(bao)狀態(tai)。因運(yun)輸(shu)問題，部(bu)分(fen)細胞(bao)由於(yu)溫度 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎形成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀察(cha)好細胞(bao)狀態(tai)後，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮細胞(bao)直接混(hun)勻(yun)收(shou)集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮的培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細胞(bao)，並接種(zhong)到新(xin)的培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿(min)中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱中進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請客戶用相(xiang)同條(tiao)件(jian)的培(pei)養(yang)基用於(yu)細胞(bao)培養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶收到細胞(bao)後前 3 天(tian)各拍幾張(zhang)細胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄細胞(bao)狀態(tai)，便於(yu)和(he)我(wo)司(si)技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交流(liu)。由於(yu)運(yun)輸(shu)的原(yuan)因，個(ge)別敏感(gan)細胞(bao)會出現(xian)不(bu)穩定的情況(kuang)，請及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細胞(bao) 的具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便我(wo)們的技(ji)術人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直至問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供(gong)科研(yan)使用。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸(shu)用的培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液培養(yang)基) 不(bu)能(neng)再用(yong)來(lai)培養(yang)細胞(bao)，請換用(yong)按照(zhao)說明書細胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的培(pei)養(yang)基來(lai)培養(yang)細胞(bao)。     收到細胞(bao)後第壹次(ci)傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司(si)正(zheng)在出(chu)售的產(chan)品(pin)：

Humahymidinephosphorylase,TPELISAKit人(ren)胸腺核苷0酸化(hua)酶(TP)ELISA試劑(ji)盒(he)規(gui)格(ge)：96T/48T

humanProstaglandinD2-methoxime,PGD2-MOXELISA試劑(ji)盒(he)人(ren)甲(jia)肟(wo)前列(lie)腺素D2(PGD2-MOX)ELISA試劑(ji)盒(he)規(gui)格(ge)：96T/48T

大鼠(shu)腸(chang)型脂肪(fang)酸結(jie)合(he)蛋(dan)白(FABP2)ELISA試劑(ji)盒(he) ，英(ying)文(wen)名： FABP2 ELISA Kit

Human alpha 2 macroglobulin (alpha 2-MG) ELISA Kit 人(ren)α2巨球(qiu)蛋白(α2-MG)ELISA試劑(ji)盒(he)

RatCholecystokinin,CCKELISAKit 大鼠(shu)膽(dan)囊(nang)收(shou)縮(suo)素(su)/腸(chang)促(cu)肽(tai)(CCK)ELISA試劑(ji)盒(he) 96T/48T 進(jin)口(kou)分(fen)裝(zhuang)

ELISAKitANG-2小鼠(shu)血管生成素2規(gui)格(ge)：48T/96T

HumanCaspase-9,Casp-9ELISAKit人(ren)胱(guang)天(tian)9(Casp-9)ELISA試劑(ji)盒(he)規(gui)格(ge)：96T/48T

人(ren)破骨細胞(bao)分(fen)化因子(zi)(ODF)ELISA 試劑(ji)盒(he) 96T/48T 試劑(ji)盒(he) 組裝(zhuang)/原(yuan)裝(zhuang)

小鼠(shu)腺病毒(du)IgG抗(kang)體免(mian)疫試劑(ji)盒(he) Mouse Adenovirus IgG aibody ELISA Kit

大腸(chang)桿菌(jun)(O157:H7)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)(PCR-熒光探(tan)針法(fa)) 48T

RatMyosin,MYSELISA試劑(ji)盒(he)大(da)鼠(shu)肌球蛋(dan)白(MYS)ELISA試劑(ji)盒(he)規(gui)格(ge)：96T/48T

HumanHerpesGestation,HGELISA試劑(ji)盒(he)人(ren)皰疹(zhen)抗(kang)體(HG)ELISA試劑(ji)盒(he)規(gui)格(ge)：96T/48T

HumanLymeIgGELISAKit人(ren)萊(lai)姆(mu)IgG(Lyme-IgG)ELISA試劑(ji)盒(he)規(gui)格(ge)：96T/48T

大鼠(shu)血纖(xian)蛋白原(yuan)(Fbg)ELISA試劑(ji)盒(he) ，英(ying)文(wen)名： Fbg ELISA Kit

人(ren)多(duo)聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISA檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)HumanPolyADPribosepolymerase,PARPELISAKit 96T/48T

腫瘤壞(huai)死因子(zi)誘(you)導蛋白3相(xiang)互作用蛋(dan)白1抗(kang)體

光導蛋白樣蛋白PDCL3抗(kang)體

肉(rou)毒(du)堿(jian)棕櫚酰(xian)基(ji)轉(zhuan)移(yi)酶2抗(kang)體

MSL3L2蛋白抗(kang)體

線粒(li)體(ti)翻譯起始因子(zi)3抗(kang)體

白細胞(bao)介(jie)素(su)23P19抗(kang)體

磷(lin)酸化PDZ連接激(ji)酶/T-LAK細胞(bao)源蛋(dan)白激(ji)酶抗(kang)體

SKG-IIIa細胞(bao)CD90抗(kang)體

血(xue)小板(ban)源性(xing)生長因子(zi)受體β樣蛋(dan)白抗(kang)體