BL21 感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)100ul*10

BL21 感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)100ul*10操作(zuo)方(fang)法(fa)（以(yi)下操(cao)作(zuo)均按(an)無菌(jun)條件(jian)的標準進行(xing)）
1 取(qu)感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)置(zhi)於冰浴(yu)中(zhong)，如(ru)需(xu)分(fen)裝可將剛(gang)融化細(xi)胞(bao)懸液(ye)分裝(zhuang)到(dao)無菌(jun)預冷的離心(xin)管(guan)中(zhong)，置(zhi)於冰浴(yu)中(zhong)。
BL21 感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)100ul*10●  壹次轉(zhuan)化感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)的建議(yi)用量為50-100 μl，可(ke)以(yi)根據(ju)實際(ji)情(qing)況分(fen)裝(zhuang)使(shi)用。應(ying)註(zhu)意(yi)所用(yong)DNA 體(ti)積不要超(chao)過(guo)感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)懸液(ye)體(ti)積的十分(fen)之壹。
以下實(shi)驗(yan)以100 μl感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)為例(li)。
2 向(xiang)感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)懸液(ye)中(zhong)加(jia)入目(mu)的DNA（100 μl 的感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)能夠(gou)被(bei)1 ng 超(chao)螺(luo)旋質粒(li)DNA 所(suo)飽(bao)和(he)），輕輕旋轉(zhuan)離心(xin)管(guan)以混勻內容物，在(zai)冰浴(yu)中(zhong)靜置(zhi)30 分鐘。
3 將離心(xin)管(guan)置(zhi)於42℃水(shui)浴中(zhong)放(fang)置(zhi)60-90 秒，然後快速(su)將管(guan)轉(zhuan)移到(dao)冰浴(yu)中(zhong)，使(shi)細胞(bao)冷卻(que)2-3 分鐘，該過程不(bu)要搖動離心(xin)管(guan)。
4 向每個離心(xin)管(guan)中(zhong)加(jia)入900 μl 無菌(jun)的SOC 或LB 培(pei)養基(ji)（不含(han)抗生(sheng)素(su)）， 混勻後置(zhi)於37℃搖(yao)床(chuang)振蕩(dang)培(pei)養1 小時(shi)（160-220 轉(zhuan)/分鐘），目(mu)的是(shi)使(shi)質粒(li)上(shang)相關的抗性標記基因表(biao)達(da)，使(shi)菌體(ti)復(fu)蘇(su)。
BL21 感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)100ul*105 將離心(xin)管(guan)內容物混勻，吸(xi)取(qu)100 μl 已轉(zhuan)化的感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)加(jia)到含(han)相應抗生(sheng)素(su)的SOB 或LB 固(gu)體(ti)瓊脂(zhi)培(pei)養基(ji)上，用(yong)無菌(jun)的彎頭玻(bo)棒(bang)輕輕的將細胞(bao)均勻(yun)塗(tu)開。將平板(ban)置(zhi)於室(shi)溫直至(zhi)液(ye)體(ti)被(bei)吸(xi)收，倒(dao)置(zhi)平板(ban)，37℃培(pei)養12-16 小時(shi)。
●  塗(tu)布用量(liang)可(ke)根據(ju)具(ju)體(ti)實(shi)驗來(lai)調(tiao)整。如轉(zhuan)化的DNA 總量較多(duo)，可取(qu)更(geng)少量轉(zhuan)化產物塗(tu)布平板(ban)；反(fan)之，如轉(zhuan)化的DNA 總量較少(shao)，可(ke)取(qu)200-300 μl 轉(zhuan)化產物塗(tu)布平板(ban)。如(ru)果(guo)預(yu)計的克隆(long)較少(shao)，可通過離心(xin)（4,000 rpm, 2分(fen)鐘）後吸(xi)除部分培(pei)養液(ye)，懸浮(fu)菌體(ti)後將其塗(tu)布於壹個平板(ban)中(zhong)。（塗(tu)布剩余(yu)的菌液(ye)可置(zhi)於4℃保存，如果次日(ri)的轉(zhuan)化菌(jun)落(luo)數(shu)過(guo)少(shao)可(ke)以將剩下的菌液(ye)再(zai)塗(tu)布新的培(pei)養板(ban)）
註(zhu)意(yi)事項
1. 感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)應保存在 -70℃，不可多(duo)次凍融和(he)放(fang)置(zhi)時(shi)間(jian)過(guo)長(chang)，以避免(mian)降低感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)的轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)。
2. 進(jin)行(xing)轉(zhuan)化操(cao)作(zuo)時(shi)，應(ying)根據(ju)相應溫度及(ji)無菌(jun)條件(jian)的要求(qiu)進行(xing)。
3 為(wei)防(fang)止轉(zhuan)化實(shi)驗(yan)不(bu)成功，可以(yi)保留(liu)部分連(lian)接反(fan)應(ying)液(ye)，以重(zhong)新轉(zhuan)化，將損(sun)失(shi)降到(dao)低。
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