遊離脂肪酸ELISA檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)[實(shi)驗原理]

試(shi)劑(ji)盒(he)采(cai)用雙(shuang)抗體壹(yi)步夾(jia)心法(fa)酶聯免(mian)疫吸附試(shi)驗（ELISA）。往預(yu)先(xian)包(bao)被(bei)遊離脂肪酸（FFA）捕(bu)獲抗(kang)體的(de)包(bao)被(bei)微(wei)孔中(zhong)，依次加(jia)入標(biao)本(ben)、標(biao)準(zhun)品(pin)、HRP標(biao)記(ji)的(de)檢(jian)測抗(kang)體，經過溫(wen)育(yu)並*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在(zai)過氧(yang)化(hua)物酶的(de)催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍色，並在(zai)酸(suan)的(de)作用下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)終(zhong)的(de)黃色。顏色的(de)深淺和樣品中(zhong)的(de)人(ren)遊離脂肪酸（FFA）呈(cheng)正相關。用酶標(biao)儀在(zai)450nm 波(bo)長(chang)下(xia)測定(ding)吸光度(du)（OD 值），計算(suan)樣(yang)品濃(nong)度。

[樣本(ben)處(chu)理及(ji)要求(qiu)]

1.  血清(qing)：將(jiang)收集於血清(qing)分(fen)離管(guan)的(de)全(quan)血標(biao)本(ben)在(zai)室(shi)溫(wen)放置(zhi)2小(xiao)時(shi)或4℃過夜(ye)，然後(hou)1000×g離心20 分(fen)鐘，取(qu)上清(qing)即可(ke)，或(huo)將(jiang)上清(qing)置於-20℃或-80℃保存，但應(ying)避免反(fan)復凍融(rong)。

2.  血漿：用EDTA或肝(gan)素(su)作為抗凝(ning)劑采(cai)集標(biao)本(ben)，並(bing)將(jiang)標(biao)本(ben)在(zai)采(cai)集後(hou)的(de)30分(fen)鐘內(nei)於2-8℃ 1000×g離心15分(fen)鐘，取(qu)上清(qing)即可(ke)檢(jian)測，或(huo)將(jiang)上清(qing)置於-20℃或-80℃保存，但應(ying)避免反(fan)復凍融(rong)。

3.  組(zu)織勻漿：用預冷(leng)的(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去除(chu)殘留血液（勻漿中(zhong)裂解(jie)的(de)紅細胞會影(ying)響測量(liang)結(jie)果(guo)），稱(cheng)重(zhong)後(hou)將(jiang)碎。將(jiang)剪碎(sui)的(de)組織與對應(ying)體積(ji)的(de)PBS（壹(yi)般按(an)1:9的(de)重(zhong)量(liang)體積(ji)比，比如(ru)1g的(de)組織樣品對應(ying)9mL的(de)PBS，具體體積(ji)可(ke)根(gen)據實(shi)驗需要適(shi)當調(tiao)整(zheng)，並做好(hao)記(ji)錄(lu)。在(zai)PBS中(zhong)加(jia)入蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑(ji)）加(jia)入玻(bo)璃(li)勻漿器中(zhong)，於冰(bing)上(shang)充(chong)分(fen)研磨。為了進(jin)壹(yi)步裂(lie)解(jie)組織細胞(bao)，可(ke)以對勻漿液進(jin)行超(chao)聲破(po)碎，或(huo)反復凍融(rong)。後(hou)將(jiang)勻漿液於5000×g離心5~10分(fen)鐘，取(qu)上清(qing)檢(jian)測。

4.  細(xi)胞(bao)培養(yang)物上清(qing)或(huo)其它生物標(biao)本(ben)：請1000×g離心20分(fen)鐘，取(qu)上清(qing)即可(ke)檢(jian)測，或(huo)將(jiang)上清(qing)置於-20℃或-80℃保存，但應(ying)避免反(fan)復凍融(rong)。

註：標(biao)本(ben)溶(rong)血會影(ying)響後(hou)檢(jian)測結(jie)果(guo)，因此溶(rong)血標(biao)本(ben)不宜(yi)進(jin)行此項檢(jian)測。

[需要而(er)未(wei)提(ti)供(gong)的(de)試(shi)劑(ji)和器材(cai)]

1.酶(mei)標(biao)儀（450nm）

2.高(gao)精度(du)加(jia)樣器及(ji)槍(qiang)頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫(wen)箱

4.蒸(zheng)餾水或去離子水