PCR反(fan)應註(zhu)意(yi)事項：

1.  由於PCR反(fan)應靈(ling)敏(min)度很(hen)高，因(yin)此(ci)要特(te)別主意(yi)防止(zhi)DNA汙染(ran)的發生。樣(yang)品間的相互汙染(ran)可(ke)能產生假(jia)陽性結(jie)果(guo)，特(te)別是(shi)將PCR技(ji)術(shu)應(ying)用到臨(lin)床(chuang)病(bing)原(yuan)菌(jun)感染(ran)確(que)定中(zhong)。

2.  如(ru)果是公用的、沒(mei)有(you)密(mi)碼保(bao)護(hu)的PCR儀，經(jing)常檢查PCR儀上的程序正(zheng)確(que)與否。

3.  不(bu)使用(yong)過(guo)量試(shi)劑“less is usually better （more specific）"。

4.  試(shi)劑購(gou)回後應分裝(zhuang)成(cheng)小份使用(yong)，這樣(yang)壹(yi)旦(dan)有(you)汙染(ran)發生，可(ke)以立即(ji)丟(diu)棄(qi)汙染(ran)的試(shi)劑，不(bu)會造(zao)成大(da)的損失(shi)；試(shi)劑分裝(zhuang)也(ye)有(you)助(zhu)於減(jian)少反(fan)復(fu)凍融次數（例(li)如(ru)dNTPs對(dui)反(fan)復凍融敏(min)感）。

5.  加(jia)完所有(you)試(shi)劑後用(yong)槍頭吹(chui)打幾次或(huo)稍(shao)微(wei)渦旋或(huo)輕(qing)彈(dan)管(guan)壁以(yi)保(bao)證充(chong)分(fen)混(hun)勻。

6.  使用(yong)陰(yin)性對(dui)照(zhao)檢查汙染(ran)的發生。

7.  使用(yong)陽(yang)性對(dui)照(zhao)（能良(liang)好擴增(zeng)的樣(yang)本(ben)）。

8.  電泳時(shi)使用(yong)DNA分(fen)子量(liang)標(biao)準品（指示是否PCR失敗(bai)或(huo)條帶(dai)跑出(chu)凝膠或(huo)拍(pai)照(zhao)系統(tong)失敗(bai)）。

9.  當(dang)擴增(zeng)很長(chang)的、GC含(han)量高(gao)的模板時(shi)或(huo)容(rong)易產生二級結(jie)構的模板時(shi)適量(liang)使用(yong)添加(jia)劑（glycerol, formamide, NMP使變性和(he)退(tui)火(huo)溫(wen)度降低(di)幾度；glycerol也可(ke)起到穩定聚合酶(mei)活性(xing)的作(zuo)用；DMSO 減少二級結(jie)構的發生，並(bing)通過(guo)減弱非特(te)異(yi)性(xing)引(yin)物結(jie)合(he)的穩定(ding)性，提(ti)高反應(ying)的特(te)異(yi)性(xing)）。

10.  不(bu)使用(yong)帶(dai)有(you)自動(dong)除(chu)霜功能的冰(bing)箱存儲酶（避免反復(fu)凍融），每次取酶時(shi)都(dou)使用(yong)新的槍頭酶(mei)，酶使用(yong)後(hou)應立即(ji)放回冰(bing)箱。酶(mei)要在(zai)加(jia)完緩沖液後(hou)再(zai)加(jia)，直(zhi)接(jie)將酶(mei)加(jia)入(ru)水中可(ke)能導(dao)致(zhi)酶(mei)變性失(shi)活。

11.   PCR產物的電泳(yong)檢測(ce)時間，壹(yi)般為(wei)48 h以(yi)內(nei)，有(you)些最好(hao)於當日電泳檢測(ce)，大(da)於(yu)48h後帶(dai)型不(bu)規則甚致消(xiao)失(shi)。