DI TNC1大(da)鼠腦間質細(xi)胞(bao)

公司產品僅(jin)供(gong)科(ke)研研(yan)究使(shi)用、不(bu)得用於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生長至覆(fu)蓋培養(yang)瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入 5ml 培養(yang)

液(ye)終(zhong)止消化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈澱細胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例進行分瓶傳代(dai)，最後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋培養(yang)瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入培養(yang)液(ye)終(zhong)

止消化(hua)，輕輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適量的凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞(bao)，並(bing)放(fang)置於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍(dong)存管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉入(ru)液(ye)氮中(zhong)進行長期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降溫盒(he)可直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二(er)、細胞(bao)培養(yang)操作

1) 復蘇細胞(bao)：以下(xia)細胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存處理(li)僅供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體操作步驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產品說明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸液(ye)的(de)凍(dong)存管(guan)在 37℃水浴中(zhong)迅速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培養(yang)基混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心3 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，加1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將所(suo)有(you)細(xi)胞懸液(ye)加入含適量(liang)培養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜（或(huo)將細胞懸液(ye)加入10 cm皿中(zhong)，加入約8 mL培養(yang)基，培養(yang)過(guo)夜）。第二天(tian)換液(ye)並(bing)檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細胞傳代(dai)：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去培養(yang)上(shang)清，用不含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消化(hua)液(ye)浸(jin)潤所(suo)有(you)細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶置於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情況(kuang)而(er)定），然(ran)後(hou)在顯微鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部分變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速拿(na)回(hui)操作臺(tai)，輕敲(qiao)幾下(xia)培養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培養(yang)基終止(zhi)消化(hua)。輕輕(qing)打勻後(hou)裝入(ru)無菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，補加1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞懸液(ye)按1:2比例分到新的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的新皿中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待(dai)細胞生長狀(zhuang)態(tai)良好時(shi)，可進行細胞凍(dong)存。下(xia)面 T25 瓶為例(li)；a、收集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心4 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清洗壹遍，棄盡(jin)PBS，進行細胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數量加入無血清細胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置(zhi)以便下(xia)次拿(na)取(qu)。

三、培養(yang)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到細(xi)胞後(hou)首(shou)先觀(guan)察細(xi)胞瓶是否(fou)完好，培(pei)養(yang)液(ye)是否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發生請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我們聯系(xi)。

2. 仔細閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說明(ming)書(shu)，了(le)解細(xi)胞相(xiang)關信息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血清比例、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件壹(yi)致，若(ruo)由(you)於(yu)培養(yang)條(tiao)件不(bu)壹致(zhi)而導(dao)致細胞出(chu)現問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶自(zi)行承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細(xi)胞瓶表(biao)面，顯微鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分細胞由於(yu)溫度(du) 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破碎形成碎片(pian)，是正(zheng)常現象(xiang)。觀察好(hao)細胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以(yi)消化(hua)，懸浮細(xi)胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新鮮的(de)培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細(xi)胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的培(pei)養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)進行培養(yang)。

5. 請(qing)客戶用相(xiang)同(tong)條(tiao)件的(de)培養(yang)基用於(yu)細胞(bao)培養(yang)。

6. 建(jian)議客戶收到細(xi)胞後(hou)前 3 天(tian)各拍幾張細(xi)胞(bao)照片(pian)，記錄細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和我司技術(shu)部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運輸(shu)的原因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現不(bu)穩定(ding)的情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我們聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便我們的技術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供(gong)科(ke)研使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養(yang)基) 不能再用(yong)來(lai)培養(yang)細(xi)胞，請換用(yong)按照說明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件新配(pei)制的培(pei)養(yang)基來(lai)培養(yang)細(xi)胞。     收到細(xi)胞後(hou)第壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿。不是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的產品：

HA Others H1N1 甲(jia)型(xing)流(liu)感(gan) H1N1 (A/Beijing/22808/2009) 血(xue)凝素(su) (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照) 大(da)鼠皮質酮(tong)(CO)ELISA試(shi)劑盒(he) AFU(Mouse alpha-L-fucosidase)  小鼠(shu)αL巖藻糖苷(gan)酶 96T

NELL2： 蛋白激酶C結合(he)蛋白NELL2抗(kang)體 胰腺(xian)星狀(zhuang)細(xi)胞Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(1ml)

NCI-H929-CMV-EGFP(穩定(ding)株)人(ren)骨髓瘤細胞 NCI-H929-CMV-EGFP (stable sain) human myeloma cell 1640+20% FBS(熱滅(mie)活(huo)) 大(da)鼠結合(he)球(qiu)蛋白(CBG)ELISA試(shi)劑盒(he) CsA  大(da)鼠A 96T

NETO2： 腦特異(yi)性(xing)跨膜(mo)蛋白抗(kang)體 EFNA1 Others Human 人(ren) EFNA1 / Ephrin-A1 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照)

CM-H044人(ren)肝(gan)動脈內(nei)皮細(xi)胞培(pei)養(yang)基100mL 大(da)鼠(Coisol)ELISA試(shi)劑盒(he) SCCAg(Human squamous cell carcinoma related antigen)  人(ren)鱗狀(zhuang)細(xi)胞癌相(xiang)關抗(kang)原 96T

IDUA： α-L-艾杜(du)糖苷(gan)酶抗(kang)體 MVK Others Human 人(ren) MVK / Mevalonate kinase 桿(gan)狀(zhuang)病毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照)

真皮成纖維(wei)細胞培(pei)養(yang)基 100mL 犬白細胞(bao)分化(hua)抗(kang)原6(CD6)ELISA 試(shi)劑盒(he) NTP，Neurual thread protein 神經絲(si)蛋白(抗(kang)原) 0.5mg

IFT122： 細胞纖(xian)毛(mao)內(nei)轉運(yun)同(tong)源(yuan)蛋白122抗(kang)體 MA, 小鼠(shu)星形膠(jiao)質細(xi)胞(bao) 人(ren)SV40轉染(ran)成骨細(xi)胞，hFOB 1.19細胞 PIEC(豬髖動脈內(nei)皮細(xi)胞)

TNFRSF1A Others Rat 大(da)鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照) 犬白介素(su)8(IL-8/CXCL8)ELISA 試(shi)劑盒(he) OAT-1 (Organic anion transporter 1)human 陰離(li)子(zi)轉運(yun)蛋白-1(人(ren)源(yuan)) 0.5mg

IFT140： 細胞纖(xian)毛(mao)內(nei)轉運(yun)同(tong)源(yuan)蛋白140抗(kang)體 KM小鼠(shu)腦神經膠(jiao)質母細(xi)胞瘤瘤株;G422

DI TNC1大(da)鼠腦間質細(xi)胞(bao)EB病毒(du)轉化(hua)的人(ren)B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞;KMY0906 人(ren)內(nei)臟脂(zhi)肪細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 大(da)鼠α幹(gan)擾素(su)(IFN-α)ELISA 試(shi)劑盒(he) ANG(Human Angiogenin)  人(ren)血管(guan)生(sheng)長素(su) 96T

Phospho-Rb (Ser807 + Ser811)： 0酸化(hua)視網(wang)膜(mo)母細(xi)胞瘤相關蛋白1抗(kang)體 CL-0254A-498(人(ren)腎癌細胞)5×106cells/瓶×2

3T3-L1, 小鼠前(qian)脂(zhi)肪細(xi)胞(bao) 大(da)鼠α-輔肌動蛋白1(ACTN-1)ELISA試(shi)劑盒(he) ANG- II (Human angiotension II )  人(ren)血管(guan)緊(jin)張素(su)Ⅱ 96T

Phospho-Rb (Thr821)： 0酸化(hua)視網(wang)膜(mo)母細(xi)胞瘤相關蛋白1抗(kang)體 CDCP1 Others Cynomolgus 食蟹(xie)猴 CDCP1 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照)

GPH4 豚鼠心(xin)肌(ji)來(lai)源(yuan)細胞(bao) 大(da)鼠α-胞襯蛋白(SPTAN1)ELISA試(shi)劑盒(he) Park2(Human Panson disease 2 pan)  人(ren)帕金森氏病2Pan 96T