DLD-1人結(jie)直(zhi)腸(chang)腺癌細(xi)胞

公司(si)產品(pin)僅供科研研究(jiu)使用、不得用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆(fu)蓋培養瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒(dao)置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru) 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞使之(zhi)脫(tuo)落，然後將懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重懸，然後按(an) 1:2 比(bi)例進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養(yang)箱(xiang)中培(pei)養；

2、細(xi)胞凍存：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆(fu)蓋培養瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒(dao)置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru)培養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞使之(zhi)脫(tuo)落，然後將懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量(liang)的凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞，並(bing)放(fang)置於(yu)凍存管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞凍存管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後將其移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮中進行長期保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序

降溫盒可直接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細(xi)胞：以下(xia)細(xi)胞培養(yang)凍存處(chu)理僅(jin)供參(can)考，具(ju)體操作步驟以隨貨產品說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主。將含(han)有1 mL細(xi)胞懸液(ye)的凍存管在(zai) 37℃水浴(yu)中迅(xun)速(su)搖晃(huang)解凍，加4 mL培養基(ji)混(hun)合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離心3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將所(suo)有細(xi)胞懸液(ye)加入(ru)含適量(liang)培(pei)養基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中培養過(guo)夜（或將細(xi)胞懸液(ye)加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養過(guo)夜）。第二(er)天換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查細(xi)胞密度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如果(guo)細(xi)胞密度達 80%-90%，即(ji)可進行傳(chuan)代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上清(qing)，用不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子的PBS潤洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶(ping)中，使消化(hua)液(ye)浸潤(run)所(suo)有細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培養箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落，迅速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕敲(qiao)幾下(xia)培養瓶(ping)後加2-3ml培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新的含8 mL培(pei)養基(ji)的新皿(min)中或者(zhe)瓶(ping)中，置於(yu)培養箱(xiang)中培(pei)養。 3) 細(xi)胞凍存：待細(xi)胞生(sheng)長狀態良(liang)好(hao)時(shi)，可進行細(xi)胞凍存。下面 T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞及細(xi)胞培養(yang)液(ye)，裝入(ru)無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄盡PBS，進行細(xi)胞計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數量(liang)加(jia)入(ru)無血(xue)清(qing)細(xi)胞凍存液(ye)，使細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存管凍存1mL細(xi)胞懸液(ye)，註(zhu)意凍存管做(zuo)好(hao)標(biao)識。將凍存管放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮灌儲存(cun)。記錄(lu)凍存管位(wei)置以(yi)便下次拿取。

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞後首(shou)先(xian)觀察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完好(hao)，培(pei)養液(ye)是(shi)否(fou)有漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等現象(xiang)，若有上(shang)述現象(xiang) 發生(sheng)請及時(shi)和(he)我們(men)聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞說明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞相(xiang)關信(xin)息(xi)，如細(xi)胞形態、所(suo)用培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因子等，確(que)保細(xi)胞培養(yang)條件(jian)壹(yi)致，若由於培(pei)養(yang)條件(jian)不壹(yi)致而(er)導(dao)致細(xi)胞出現問題(ti)，責任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表面，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞狀態。因運(yun)輸問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞由於(yu)溫度 變(bian)化(hua)及劇烈碰(peng)亡(wang)破碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正常(chang)現(xian)象。觀察好(hao)細(xi)胞狀態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培養箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可以消化(hua)，懸浮細(xi)胞直接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮(xian)的培養(yang)基(ji)重懸 細(xi)胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的培養(yang)瓶(ping)或培養皿(min)中，置於(yu)培養箱(xiang)中進(jin)行培(pei)養。

5. 請客戶(hu)用相(xiang)同(tong)條件(jian)的培養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞培養(yang)。

6. 建議客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞後前 3 天各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞照片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞狀態，便(bian)於(yu)和(he)我司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸的原因，個別敏感(gan)細(xi)胞會出現不穩(wen)定(ding)的情況(kuang)，請(qing)及時(shi)和(he)我們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細(xi)胞 的具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便我們(men)的技(ji)術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直至問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞僅供科研使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸用的培養(yang)基(ji) (灌液(ye)培養(yang)基(ji)) 不能再(zai)用來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞，請換(huan)用按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞培 養(yang)條件(jian)新配(pei)制(zhi)的培養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞。     收到(dao)細(xi)胞後第(di)壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。

公司正在(zai)出售的產品(pin)：

MEGF10： 表皮(pi)生(sheng)長因子樣(yang)蛋(dan)白(bai)Megf10抗體 小鼠(shu)網織(zhi)細(xi)胞肉瘤(liu);M5076

H9c2(2-1)大(da)鼠(shu)心肌(ji)細(xi)胞 H9c2 (2-1) in myocardial cells of rats DMEM+10%FBS+1%P/S 大(da)鼠(shu)原激(ji)活(huo)蛋(dan)白(bai)激(ji)酶(mei)10(MAPK10)ELISA試劑(ji)盒 ChAT (Rat Choline Acetyltransferase )  大(da)鼠(shu)乙酰轉(zhuan)移(yi)酶(mei) 96T

MPP4： MPP4蛋(dan)白(bai)抗體 PRMT5 Others Human 人 PRMT5 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照(zhao))

視(shi)網(wang)膜(mo)神經節細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次方(fang)(1ml) 大(da)鼠(shu)原肌(ji)球蛋(dan)白(bai)2β(TPM2)ELISA試(shi)劑盒 bFGF (Rabbit basic fibroblast growth factor)  兔(tu)子堿(jian)性成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞生(sheng)長因子 96T

MCM7/CDC47： 染(ran)色(se)體維持缺陷蛋(dan)白(bai)7抗體 小鼠(shu)單核(he)巨噬(shi)細(xi)胞白血(xue)病細(xi)胞;RAW 264.7 [RAW264.7

Rhesus antibody Rh BTBD6 BTBD6蛋(dan)白(bai)抗體 HA Others H7N9 甲型流(liu)感(gan) H7N9 (A/Shanghai/2/2013) 血(xue)凝(ning)素(su) (Hemagglutinin / HA) 桿(gan)狀病毒-昆(kun)蟲細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照(zhao))

骨髓(sui)間質幹(gan)細(xi)胞 Adult bone marrow mesenchymal stem cells 人抗脊(ji)髓灰(hui)質炎病毒(PV-Ab)ELISA試(shi)劑盒 NGF-R(p75NTR) 神經生(sheng)長因子受(shou)體(抗原) 0.5mg

HCA25a： 肝(gan)癌相(xiang)關抗原hca25a 0.2ml

Rhesus antibody Rh BTBD7 BTB/POZ結(jie)構(gou)域(yu)蛋(dan)白(bai)7抗體 兔(tu)角膜(mo)前基(ji)質層(ceng)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞;RCFBF 癌細(xi)胞，MCF7細(xi)胞 Cl.Ly1+2-/9細(xi)胞，小鼠(shu)T淋(lin)巴細(xi)胞

F3 Others Rat 大(da)鼠(shu) Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照(zhao)) 人抗肌(ji)內膜(mo)抗體IgA(EMA IgA)ELISA 試劑(ji)盒 AT1R(Angiotensin II Type 1 Receptor) 血(xue)管緊(jin)張素(su)Ⅱ-1型受(shou)體抗原 0.5mg

DLD-1人結(jie)直(zhi)腸(chang)腺癌細(xi)胞SV40轉(zhuan)化(hua)的非(fei)洲(zhou)綠(lv)猴(hou)腎細(xi)胞;COS-1 大(da)鼠(shu)基(ji)端前腦素(su)(-ProBNP)ELISA試(shi)劑(ji)盒 AHA(Human anti-Histone antibody)  人抗組蛋(dan)白(bai)抗體 兔(tu)主動脈(mai)平滑肌(ji)細(xi)胞;CCC-SMC-1

大(da)鼠(shu)腹部(bu)脊(ji)髓神經元(RVSCI)(1×106) HNE2, 人鼻(bi)咽癌細(xi)胞系 Human 大(da)鼠(shu)肌(ji)質網膜(mo)鈣(gai)ATP酶(mei)(SERCA)ELISA試劑(ji)盒 MOG  (human) 抗髓鞘(qiao)少樹突(tu)膠(jiao)質細(xi)胞糖蛋(dan)白(bai)(人) 96T

Prostatic Acid Phosphatase： 前列腺酸(suan)性0酸(suan)酶(mei)抗體 人主動脈(mai)平滑肌(ji)細(xi)胞裂解(jie)物HASMCL

VEGFA Protein Canine 重組(zu)狗(gou) VEGF / VEGFA 蛋(dan)白(bai) 大(da)鼠(shu)肌(ji)原纖(xian)蛋(dan)白(bai)1(FBN1)ELISA試(shi)劑盒 Cry Alpha(Human crystal proteins Alpha)  人晶(jing)體蛋(dan)白(bai)α 96T

PAR6： 缺陷(xian)性分(fen)配(pei)同(tong)源(yuan)物α抗體 HA Others H1N1 甲型流(liu)感(gan) H1N1 (A/California/04/2009) 血(xue)凝(ning)素(su) (Hemagglutinin / HA) 桿(gan)狀病毒-昆(kun)蟲細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照(zhao))