DH-82狗腎(shen)惡性組織細(xi)胞(bao)增生(sheng)癥細(xi)胞(bao)

公司產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)研研究(jiu)使用、不得(de)用於臨(lin)床(chuang)診斷！

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中的培養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加入 5ml 培養

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化，再(zai)輕輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養基(ji)重懸，然後按(an) 1:2 比例(li)進行(xing)分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後放入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培養箱(xiang)中培養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中的培養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加入培養液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化，輕輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並放置於凍(dong)存管中；

4）先將細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入液(ye)氮中進行(xing)長(chang)期保(bao)存。使用程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直接放入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培養凍(dong)存處(chu)理(li)僅供(gong)參(can)考，具體操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書為(wei)主。將含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的(de)凍(dong)存管在(zai) 37℃水浴(yu)中迅速(su)搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培養基(ji)混合均勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後將所(suo)有細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入含適量培養基(ji)的培養瓶(ping)中培養過(guo)夜（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中，加入約(yue)8 mL培養基(ji)，培養過(guo)夜）。第二天(tian)換(huan)液(ye)並檢查細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如果細(xi)胞(bao)密度(du)達(da) 80%-90%，即可進行(xing)傳(chuan)代培養。

a、棄去(qu)培養上(shang)清，用不含鈣、鎂離子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶(ping)中，使消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤所(suo)有細(xi)胞(bao)，將培養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況(kuang)而定），然(ran)後在(zai)顯微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓(yuan)並脫(tuo)落，迅速(su)拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾下(xia)培養瓶(ping)後加2-3ml培養基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。輕輕打勻後裝入無(wu)菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養液(ye)後吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比例(li)分(fen)到新(xin)的(de)含8 mL培養基(ji)的新(xin)皿(min)中或者(zhe)瓶(ping)中，置於(yu)培養箱(xiang)中培養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好時(shi)，可進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培養液(ye)，裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，用PBS清洗(xi)壹遍，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數量加(jia)入無(wu)血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存液(ye)，使細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管做好(hao)標(biao)識(shi)。將凍(dong)存管放入-80℃冰箱，24 h後轉入液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存。記錄凍(dong)存管位置以(yi)便下(xia)次拿取。

公司正(zheng)在(zai)出售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

IV型膠(jiao)原(yuan)酶(含100mL酶解緩沖液(ye)) 10mL 大(da)鼠(shu)能(neng)a1A受(shou)體(ADRA1A)ELISA試劑(ji)盒(he) PAP(Mouse Prostatic Acid Phosphatase)  小(xiao)鼠(shu)前(qian)列腺(xian)酸性0酸酶 96T

Neurabin 1： 神(shen)經(jing)組織特(te)異(yi)性F肌動蛋白結(jie)合(he)蛋白抗體 NIH/3T3細(xi)胞(bao)，胚(pei)胎成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao) 人高轉(zhuan)移(yi)肝癌細(xi)胞(bao),LM3細(xi)胞(bao) CL-0104HEp-2(人喉(hou)表(biao)皮樣(yang)癌細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2

HMGB1 Others Mouse 小鼠(shu) HMGB1 / HMG1 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 大鼠(shu)能(neng)a1A受(shou)體(ADRA1A)ELISA 試劑(ji)盒(he) PSA(Mouse prostate specific antigen)  小(xiao)鼠(shu)前(qian)列腺(xian)特(te)異(yi)性抗原 96T

NOTCH1： 胞(bao)內活(huo)化的(de)Notch1蛋白抗體 軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105次方(1ml)

MGC80-3人胃(wei)癌細(xi)胞(bao) Human gasic cancer cells MGC80-3 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠(shu)內(nei)脂素/內臟(zang)脂肪(fang)素(visfatin)ELISA試劑(ji)盒(he) C3a  大(da)鼠(shu)補(bu)體(ti)片斷3a 96T

KCNE4： 離子(zi)通(tong)道(dao)蛋白家族(zu)成員4抗體 人腦星(xing)形膠(jiao)質(zhi)母細(xi)胞(bao)瘤;U-87 MG [U87MG;U87 MG]

BSC-1細(xi)胞(bao)，猴(hou)腎細(xi)胞(bao)系(xi) CHRF(人巨(ju)核細(xi)胞(bao)白血(xue)病(bing)) 敘(xu)利(li)亞倉鼠(shu)腎(shen)細(xi)胞(bao);BHK-21 牛白細(xi)胞(bao)介素-2(IL-2)ELISA試劑(ji)盒(he) AFP 甲胎蛋白多肽 0.5mg

KCNF1： 電壓門控(kong)性通道(dao)蛋白亞(ya)基(ji)kv5.1抗體 REG1A Others Human 人 REG1A / PSPS 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照)

人結(jie)膜細(xi)胞(bao)裂解物(wu)HConFL 牛白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA 試劑(ji)盒(he) AFP 人(ren)甲胎蛋白多肽 0.5mg

KCNG1： 電壓門控(kong)性通道(dao)蛋白亞(ya)基(ji)kv6.1抗體 人T淋巴瘤轉基(ji)因(yin)細(xi)胞(bao);Jurkat D,E

DH-82狗腎(shen)惡性組織細(xi)胞(bao)增生(sheng)癥細(xi)胞(bao)THP-1人單核(he)白血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao) 大鼠(shu)Ras相(xiang)關(guan)C3底物(wu)1(RAC1)ELISA試劑(ji)盒(he) HS(Human heparan sulfate)  人(ren)類肝素 96T

Steroid sulfatase： 類固醇(chun)酯酶抗體 ERBB4 Others Rat 大鼠(shu) HER4 / ErbB4 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照)

HIT-T15 敘(xu)利(li)亞倉鼠(shu)胰島β細(xi)胞(bao) 大鼠(shu)Qa淋巴細(xi)胞(bao)抗原2(Qa-2)ELISA 試劑(ji)盒(he) KS(Human keratan sulfate)  人(ren)角質(zhi)素 96T

SCAP： 固醇(chun)調(tiao)節元件結合蛋白裂解激(ji)活(huo)蛋白抗體 NIH/3T3細(xi)胞(bao)，鼠(shu)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)系(xi) 人Butts淋巴瘤細(xi)胞(bao)系(xi),CA46細(xi)胞(bao) 小鼠(shu)胚(pei)胎成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao);3T3-L1

EPOR & CD131 Others Human 人 EPOR & CD131 Homodimer 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 大鼠(shu)P選(xuan)擇(ze)素(SELP)ELISA試劑(ji)盒(he) ASCA(Human Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody)  人(ren)抗釀(niang)酒(jiu)酵母抗體 豬腎(shen)細(xi)胞(bao);LLC-PK1

三、培養註意(yi)事(shi)項(xiang)

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後首先觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好(hao)，培養液(ye)是(shi)否(fou)有漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述現(xian)象(xiang) 發生請及(ji)時(shi)和(he)我們(men)聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相關(guan)信息，如細(xi)胞(bao)形態、所(suo)用培養基(ji)、血清(qing)比例(li)、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因子(zi)等，確保(bao)細(xi)胞(bao)培養條(tiao)件壹致，若(ruo)由於(yu)培養條(tiao)件不(bu)壹致而導(dao)致細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題，責(ze)任(ren)由 客(ke)戶(hu)自行(xing)承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸問題，部分(fen)細(xi)胞(bao)由於(yu)溫度(du) 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎形成碎片，是(shi)正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞(bao)可以(yi)消(xiao)化，懸浮細(xi)胞(bao)直接混勻收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的(de)培養基(ji)重懸 細(xi)胞(bao)，並接種到新(xin)的培養瓶(ping)或(huo)培養皿(min)中，置於(yu)培養箱(xiang)中進行(xing)培養。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相同(tong)條件的培養基(ji)用於細(xi)胞(bao)培養。

6. 建(jian)議客(ke)戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各拍(pai)幾張細(xi)胞(bao)照片，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便於(yu)和(he)我司技術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由於(yu)運(yun)輸的原(yuan)因(yin)，個(ge)別敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定的(de)情況，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我們(men)聯系(xi)，告(gao)知細(xi)胞(bao) 的具(ju)體情(qing)況，以(yi)便我(wo)們(men)的技術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤(zong)回訪直至(zhi)問(wen)題解決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供(gong)科(ke)研使用。

8. 備註：運(yun)輸用的培養基(ji) (灌(guan)液(ye)培養基(ji)) 不能(neng)再(zai)用來(lai)培養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞(bao)培 養條(tiao)件新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培養基(ji)來(lai)培養細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細(xi)胞(bao)後第壹次傳代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。