Calu-1人肺(fei)癌細胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供科(ke)研研究使用(yong)、不得用(yong)於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細胞(bao)傳代：

1）細胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次；

2）添(tian)加 0.25%消化液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微鏡下觀察，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加入 5ml 培養(yang)

液(ye)終止消化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打細胞(bao)使之(zhi)脫落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比例(li)進行分(fen)瓶傳代，最後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹次；

2）添(tian)加 0.25%消化液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微鏡下觀察，待(dai)細胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加入培養(yang)液(ye)終

止消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打細胞(bao)使之(zhi)脫落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並放(fang)置於(yu)凍(dong)存管中(zhong)；

4）先將(jiang)細胞(bao)凍(dong)存管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮中(zhong)進行長(chang)期(qi)保存。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降溫(wen)盒(he)可(ke)直(zhi)接放(fang)入-80℃。

壹(yi)、商(shang)品(pin)介(jie)紹(shao)：

二、細胞(bao)培養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細胞(bao)：以下細胞(bao)培養(yang)凍(dong)存處理(li)僅供(gong)參考(kao)，具體操作步(bu)驟以隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說明(ming)書為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有1 mL細胞(bao)懸液的凍(dong)存管在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培養(yang)基(ji)混合(he)均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹勻。然後(hou)將(jiang)所(suo)有細胞(bao)懸液加入含適量培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過夜(ye)（或將(jiang)細胞(bao)懸液加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養(yang)過夜(ye)）。第(di)二天換液(ye)並(bing)檢(jian)查細胞(bao)密度(du)。

2) 細胞(bao)傳代：如(ru)果細胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即可(ke)進行傳(chuan)代(dai)培養(yang)。

a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不含鈣(gai)、鎂離(li)子的PBS潤(run)洗(xi)細胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使消(xiao)化液浸潤所有(you)細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細胞(bao)情況(kuang)而定），然後(hou)在顯(xian)微鏡下觀察細胞(bao)消化情況(kuang)，若細胞(bao)大(da)部分(fen)變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落，迅速拿回操作臺(tai)，輕(qing)敲幾下培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培養(yang)基(ji)終止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻後(hou)裝入(ru)無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹勻。

c、將(jiang)細胞(bao)懸液按(an)1:2比例(li)分(fen)到新的含8 mL培養(yang)基(ji)的新(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待細胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時，可(ke)進行細胞(bao)凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄盡(jin)PBS，進行細胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據細胞(bao)數(shu)量(liang)加入無(wu)血清(qing)細胞(bao)凍(dong)存液，使細胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支凍(dong)存管凍(dong)存1mL細胞(bao)懸液，註(zhu)意凍(dong)存管做好標識(shi)。將(jiang)凍(dong)存管放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管位置以(yi)便下次拿取。

公(gong)司(si)正(zheng)在出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：

IGFBP6 Protein Human 重組(zu)人(ren) IGFBP6 / IBP-6 蛋(dan)白 (His 標簽) 大(da)鼠(shu)遊離雌三醇(chun)(FE3)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) NF-KapB p65 (Rabbit nuclear factor-KapB p65)  兔核因子κB亞基(ji)p65親和肽 96T

Phospho-mTOR (Thr2446)： 0酸化雷帕(pa)靶(ba)蛋(dan)白抗體 SERPINB3 Others Human 人 SerpinB3 / SCCA-1 桿(gan)狀病毒(du)-昆蟲(chong)細胞(bao)裂解液(ye) (陽性對照)

大(da)鼠(shu)腎上皮細胞(bao)培養(yang)基(ji) 100mL 大(da)鼠(shu)遊離β絨毛膜(f-βCG)ELISA試劑(ji)盒(he) CD3(Rat Cluster of differentiation 3,CD3)  大(da)鼠(shu)CD3分(fen)子 96T

MT-ND6： NADH復合(he)體6抗體 786-O [786-0], 人腎透(tou)明(ming)腺(xian)癌(ai)細胞(bao) 小鼠(shu)T細胞(bao),CTLL-2細胞(bao) HT-29(人結腸癌(ai)細胞(bao))

NRG1 Others Human 人(ren) NRG1-beta 1 (ECD) 人細胞(bao)裂解液(ye) (陽性對照) 大(da)鼠(shu)遊離β絨毛膜(f-βCG)ELISA 試劑(ji)盒(he) Mouse small nuclear ribonucleoprotein,snRNP/Sm  小鼠(shu)抗小核糖核蛋(dan)白/Sm抗體 小鼠(shu)肝(gan)癌(ai)細胞(bao);Hepa 1-6 [Hepa1-6]

HLC8： 肺(fei)癌相(xiang)關(guan)蛋(dan)白8抗體 人永(yong)生(sheng)化淋(lin)巴(ba)細胞(bao);CNLMG-B5537LC

HCCC-9810(人(ren)肝(gan)內(nei)膽(dan)管癌細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 CL-0393NCI-H209(人小細胞(bao)肺(fei)癌細胞(bao))5×106cells/瓶×2 非洲(zhou)綠猴(hou)腎細胞(bao);VERO 人抗肝(gan)細胞(bao)胞(bao)質1型抗體(LC1)ELISA 試劑(ji)盒(he) Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter) 相(xiang)關(guan)死(si)亡促(cu)進因子Bad抗原 0.5mg

Hepatitis C Virus NS5a： 丙(bing)型肝(gan)炎病毒(du)NS5A抗體 人食(shi)道上(shang)皮細胞(bao)RNAHEEpiC miRNA5 μg

SF763(人(ren)腦瘤(liu)細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 人抗肝(gan)特(te)異(yi)性(xing)脂(zhi)蛋(dan)白抗體(LSP)ELISA 試劑(ji)盒(he) Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter) 相(xiang)關(guan)死(si)亡促(cu)進因子Bad抗原 0.5mg

Histone H2A.x： 組(zu)蛋(dan)白H2AX抗體 IL22RA1 Others Canine 狗(gou) IL22RA1 / IL22R 人細胞(bao)裂解液(ye) (陽性對照)

Calu-1人(ren)肺(fei)癌細胞(bao)PKA R2： 蛋(dan)白激酶A受(shou)體(ti)2α亞基(ji)抗體 CL-0128JeKo-1(人套(tao)細胞(bao)淋巴瘤(liu)細胞(bao))5×106cells/瓶×2

NCI-H460 [H460]人(ren)大(da)細胞(bao)肺(fei)癌細胞(bao) NCI-H460 [H460] large cell lung cancer cell 1640+10% FBS 大(da)鼠(shu)肌(ji)紅(hong)蛋(dan)白(MB)ELISA試(shi)劑盒(he) NP-Y(Mouse neuropeptide Y)  小鼠(shu)神經肽Y 96T

phospho-PKA R2 (Ser96)： 0酸化蛋(dan)白激酶A受(shou)體(ti)2α亞基(ji)抗體 TFPI Others Mouse 小鼠(shu) TFPI / LACI / EPI 人細胞(bao)裂解液(ye) (陽性對照)

非(fei)洲(zhou)綠猴(hou)腎細胞(bao);VERO E6 大(da)鼠(shu)肌(ji)酐(gan)(Cr)ELISA試劑盒(he) Sc1-70-Ab(Human Sc1-70 Antibody)  人(ren)抗Sc1-70抗體 兔晶體(ti)上皮細胞(bao)永(yong)生(sheng)系;N/N1003A(RLE)

大(da)鼠(shu)小腦星形膠(jiao)質細胞(bao)(RAc)(5×105) Ishikawa, 人子宮內膜癌細胞(bao)系 Human 大(da)鼠(shu)肌(ji)鈣(gai)蛋(dan)白T(Tn-T)ELISA試(shi)劑盒(he) VE  大(da)鼠(shu) 96T

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意事項 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後首先觀察細胞(bao)瓶是(shi)否完好(hao)，培養(yang)液(ye)是(shi)否有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等現象(xiang)，若有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及(ji)時(shi)和我們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀細胞(bao)說明(ming)書，了(le)解細胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息，如細胞(bao)形態(tai)、所(suo)用(yong)培養(yang)基(ji)、血清(qing)比例(li)、所(suo)需 細胞(bao)因子等，確(que)保(bao)細胞(bao)培養(yang)條(tiao)件壹(yi)致，若由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件不壹致而導致細胞(bao)出(chu)現問(wen)題，責(ze)任(ren)由 客(ke)戶自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)細胞(bao)瓶表面，顯(xian)微鏡下觀察細胞(bao)狀態。因運(yun)輸問(wen)題，部(bu)分(fen)細胞(bao)由於溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎形成碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀察好(hao)細胞(bao)狀態後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)可(ke)以(yi)消化，懸浮細胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細胞(bao)，並接種(zhong)到新(xin)的培(pei)養(yang)瓶或培養(yang)皿(min)中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相(xiang)同(tong)條(tiao)件的培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於細胞(bao)培養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶收(shou)到(dao)細胞(bao)後前(qian) 3 天各拍(pai)幾(ji)張(zhang)細胞(bao)照片，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀態，便於和我司(si)技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交流。由(you)於運(yun)輸的原因，個別敏感細胞(bao)會(hui)出(chu)現不穩(wen)定的情況(kuang)，請(qing)及(ji)時(shi)和我們(men)聯系(xi)，告(gao)知細胞(bao) 的具體情況(kuang)，以便我們(men)的技(ji)術人(ren)員跟(gen)蹤回訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題解(jie)決。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供科(ke)研使用(yong)。

8. 備註(zhu)：運輸用(yong)的培(pei)養(yang)基(ji) (灌液(ye)培養(yang)基(ji)) 不能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，請(qing)換用(yong)按照(zhao)說明(ming)書細胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件新(xin)配(pei)制(zhi)的培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後第(di)壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿(min)。