COLO320 HSR人結(jie)直腸(chang)腺(xian)癌(ai)細胞

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得(de)用(yong)於臨床診(zhen)斷！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞回縮(suo)變圓後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止(zhi)消化，再輕輕吹(chui)打細胞使之脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清，沈(chen)澱細胞用 1-2ml 培養(yang)基重懸，然後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分(fen)瓶傳(chuan)代，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞回縮(suo)變圓後(hou)加入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終

止(zhi)消化，輕輕吹打細胞使之脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並放(fang)置(zhi)於凍(dong)存管中；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍(dong)存管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中進(jin)行長(chang)期保存。使用程序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒(he)可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

壹、商品(pin)介(jie)紹(shao)：

二(er)、細胞培養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇細胞：以下細胞培養凍(dong)存處理(li)僅供(gong)參考，具(ju)體操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說明(ming)書為主。將(jiang)含有1 mL細胞懸液的(de)凍(dong)存管在(zai) 37℃水(shui)浴中迅速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培養基混(hun)合均勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離心3 min，棄去上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹勻。然後(hou)將(jiang)所有細胞懸液加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量培養(yang)基的(de)培養瓶中培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞懸液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天換(huan)液(ye)並檢(jian)查細胞密度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代：如果細胞密度(du)達(da) 80%-90%，即可(ke)進(jin)行傳(chuan)代培養。

a、棄去培養(yang)上(shang)清，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子的PBS潤(run)洗細胞1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶中，使消化液浸潤所(suo)有細胞，將(jiang)培養瓶置(zhi)於37℃培養箱中消(xiao)化1-2 min（視細胞情況(kuang)而(er)定(ding)），然後(hou)在(zai)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞消化情況(kuang)，若(ruo)細胞大(da)部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫(tuo)落，迅速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消化。輕輕打勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上(shang)清液(ye)，補加1-2 mL培養液(ye)後(hou)吹勻。

c、將(jiang)細胞懸液按1:2比(bi)例(li)分(fen)到新的含8 mL培養(yang)基的(de)新皿中或(huo)者(zhe)瓶中，置(zhi)於培養箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存：待細胞生長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行細胞凍(dong)存。下面 T25 瓶為例(li)；a、收(shou)集細胞及(ji)細胞培養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心管中，1000 rpm條件(jian)下離心4 min，棄去上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行細胞計(ji)數(shu)。

b、根據細胞數(shu)量加入(ru)無血(xue)清細胞凍(dong)存液，使細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻，每支(zhi)凍(dong)存管凍(dong)存1mL細胞懸液，註意凍(dong)存管做好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存管位(wei)置(zhi)以便(bian)下(xia)次(ci)拿取。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品(pin)：

MAP3K2： 原活(huo)化蛋白(bai)激酶激酶2抗體(ti) CM-H126人小(xiao)腦(nao)顆粒細胞培養基100mL

IFNB1 Protein Cynomolgus 重組(zu)食蟹猴(hou) IFNB1 / IFN-beta / Ierferon beta 蛋白(bai) (Fc 標簽) 大(da)鼠結(jie)合蛋3(IGFBP-3)ELISA試(shi)劑盒 COX IgG VI 柯薩奇(qi)病毒 IgG Ⅵ(間接(jie)法二(er)步(bu)法)

GPR24： G蛋白(bai)偶聯受體24抗(kang)體(ti) INSR Others Human 人 Insulin Receptor / INSR / CD220 桿狀病毒-昆蟲細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

大(da)鼠冠(guan)狀(zhuang)動(dong)脈(mai)平(ping)滑(hua)肌細胞培養基 100mL 大(da)鼠結(jie)合蛋1(IGFBP-1)ELISA試(shi)劑盒 RSV IgG 合胞病毒(du) IgG(間接(jie)法二(er)步(bu)法)

MAPK organizer 1： 原活(huo)化蛋白(bai)激酶組織(zhi)蛋白(bai)1抗體 HT-29, 人結(jie)腸(chang)癌(ai)細胞 貂肺上(shang)皮細胞,Mv1Lu細胞 SW620 [SW-620](人結(jie)腸(chang)腺(xian)癌(ai)細胞)

Histone H3 (mono methyl K79)： 單(dan)甲基組(zu)蛋白(bai)H3K9抗體 B3GALT5 Others Human 人 B3GALT5 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

129小(xiao)鼠(shu)胚胎幹(gan)細胞 The 129 mouse embryonic stem cells 人結(jie)締(di)組織(zhi)活(huo)化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA 試劑盒 Telomerase (TE) 端(duan)粒酶(mei)(催(cui)化亞單(dan)位(wei))(多肽抗原) 0.5mg

HDHD2B： HDHD2B蛋白(bai)抗體 盤(pan)羊皮(pi)膚(fu)細胞;OAM-S1 大(da)鼠成(cheng)肌細胞，L6細胞 TM4細胞，正常小(xiao)鼠(shu)Leydig細胞

PROCR Others Human 人 Epcr / PROCR 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 人結(jie)蛋白(bai)(Des)ELISA 試劑盒 TGF-Alpha (Ttansforming Growth Factor –Alpha) 轉(zhuan)移(yi)生長(chang)因子–α(抗原) 0.5mg

HAX1： 造(zao)血(xue)幹細胞特(te)異性(xing)相關結合蛋白(bai)1抗體 CL-0348Hce-8693(人盲(mang)腸(chang)腺(xian)癌(ai)細胞(未分(fen)化))5×106cells/瓶×2

COLO320 HSR人結(jie)直腸(chang)腺(xian)癌(ai)細胞Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr228)： 0酸(suan)化核(he)糖(tang)體S6蛋白(bai)激酶β2抗體(ti) CLEC2D Others Rat 大(da)鼠 CLEC2D / OCIL 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

JF305 胰腺(xian)癌(ai) 大(da)鼠核(he)連(lian)蛋白(bai)1(NUCB1)ELISA試劑盒 TAb(Human Thyroid Antibody)  人甲(jia)狀(zhuang)腺(xian)抗(kang)體(ti) PA-1細胞，人卵巢畸胎瘤(liu)細胞 Ad5DNA轉(zhuan)化的胚腎(shen),HEK-293細胞 心肌細胞Many types of cells包裝(zhuang)：5 ×105次(ci)方(1ml)

IFNA14 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) IFNA14 / Ierferon alpha-14 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠核(he)呼(hu)吸(xi)因子1(F1)ELISA試劑盒 S-100(Mouse Soluble protein-100)  小(xiao)鼠(shu)S100蛋白(bai) 96T

phospho-P70 S6 Kinase beta 2 (Ser370)： 0酸(suan)化核(he)糖(tang)體S6K2蛋白(bai)激酶抗體(ti) CL-00086T-CEM (人T細胞白血(xue)病細胞)5×106cells/瓶×2

DU 145人前(qian)列腺(xian)癌(ai)細胞 DU 145 human prostate cancer cell F-12+10%FBS 大(da)鼠和(he)肽(tai)素(su)(CPP)ELISA試劑盒 IL-1(Mouse Interleukin 1)  小(xiao)鼠(shu)白介(jie)素(su)1 96T

三(san)、培養(yang)註意事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細胞後(hou)首先(xian)觀(guan)察(cha)細胞瓶是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養液是(shi)否(fou)有漏液、渾(hun)濁等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀(du)細胞說明(ming)書，了解(jie)細胞相關信(xin)息(xi)，如細胞形態、所(suo)用培養(yang)基、血(xue)清比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細胞因子等(deng)，確保細胞培養條件(jian)壹致，若(ruo)由於培養條件(jian)不(bu)壹致而(er)導(dao)致細胞出(chu)現問題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭(shi)細胞瓶表面(mian)，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞狀態。因運輸(shu)問題(ti)，部(bu)分(fen)細胞由於溫度(du) 變化及(ji)劇烈碰(peng)亡(wang)破碎形成(cheng)碎片，是(shi)正常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞狀態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於 37℃培養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可以消(xiao)化，懸浮細胞直接(jie)混(hun)勻收集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮(xian)的培養基重懸 細胞，並接種(zhong)到(dao)新的培養瓶或培養(yang)皿(min)中，置(zhi)於培養箱中進(jin)行培養(yang)。

5. 請客戶用相(xiang)同(tong)條件(jian)的培(pei)養(yang)基用(yong)於細胞培養。

6. 建(jian)議客戶收到(dao)細胞後(hou)前 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細胞照(zhao)片，記錄(lu)細胞狀態，便(bian)於和(he)我(wo)司技術部(bu)溝(gou)通(tong) 交流。由(you)於運輸(shu)的原因，個別敏感(gan)細胞會出(chu)現不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情況(kuang)，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們聯系(xi)，告知細胞 的具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便(bian)我們的技術人員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直至(zhi)問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅供(gong)科(ke)研(yan)使用。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用的培養基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養(yang)基) 不(bu)能(neng)再用來(lai)培養(yang)細胞，請換用(yong)按照(zhao)說明(ming)書細胞培 養條件(jian)新配制(zhi)的培(pei)養基來(lai)培養(yang)細胞。     收到細胞後(hou)第(di)壹次傳(chuan)代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。