TRzol LS（液體樣本 RNA 提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)）

公司(si)產(chan)品僅(jin)供(gong)科研研(yan)究使用、不(bu)得用於(yu)臨床(chuang)診斷！

商品屬性

產(chan)品介(jie)紹(shao)：

儲存條件：

TRzol LS 在室(shi)溫(wen)下(xia)能(neng)穩(wen)定保存(cun) 12 個月。盡管(guan)如此，為(wei)達到(dao)效(xiao)果，我們建(jian)議保(bao)存在 2-8°C 的(de)環(huan)境下(xia)。

重(zhong)要(yao)提(ti)示：

有毒物(wu)接(jie)觸(chu)皮膚(fu)或(huo)者不(bu)慎(shen)吞(tun)服，會(hui)導致灼(zhuo)傷。壹旦接觸(chu)皮膚(fu)後(hou)立(li)即以大量(liang)的(de)洗(xi)滌(di)劑(ji)和清(qing)水清(qing)洗(xi)。若(ruo)感不(bu)適，看(kan)醫生(sheng)並尋求苯和(he)其(qi)他成分(fen)的正(zheng)確(que)治(zhi)療方(fang)案(an)。

TRzol LS試(shi)劑(ji)是直接從細(xi)胞(bao)或(huo)組織中提(ti)取(qu)總(zong)RNA的(de)試(shi)劑(ji)。它在破碎(sui)和(he)溶(rong)解細(xi)胞(bao)時(shi)能(neng)保持RNA的完(wan)整(zheng)性。加入氯仿後(hou)離(li)心(xin)，樣品分(fen)成水樣層、中(zhong)間層和有機(ji)層(ceng)。RNA存在於(yu)水樣層中(zhong)。收(shou)集上面(mian)的的(de)水樣層後(hou)，RNA可以通(tong)過(guo)異丙(bing)醇(chun)沈澱(dian)來回(hui)收。無(wu)論是人、動(dong)物、植(zhi)物(wu)還是細(xi)菌(jun)，該方法(fa)對(dui)少量(liang)及大量(liang)的(de)組織和細(xi)胞(bao)均(jun)有較(jiao)好(hao)的分(fen)離效(xiao)果。TRzol LS 試(shi)劑(ji)操作(zuo)上的簡(jian)單性允許(xu)同時(shi)處理(li)多個樣品。所(suo)有的(de)操作(zuo)可以在壹小時(shi)內完(wan)成。TRzol 抽(chou)提(ti)的總(zong) RNA 能(neng)夠(gou)避(bi)免DNA 和(he)蛋(dan)白的汙(wu)染，可用於(yu) RNA 印(yin)跡(ji)分(fen)析、斑(ban)點雜交(jiao)、poly(A)+篩(shai)選、體外(wai)翻(fan)譯(yi)、RNA 酶(mei)保(bao)護分(fen)析和(he)分(fen)子(zi)克隆。如果是用於(yu) PCR，當(dang)兩條引(yin)物(wu)位於(yu)單(dan)壹外(wai)顯子(zi)內時(shi)，建(jian)議用擴增(zeng)級的(de)DNase I 來處理(li)抽(chou)提(ti)的總(zong)RNA。

註意(yi)事(shi)項：

1.從少量(liang)的(de)組織(1~10mg)或(huo)細(xi)胞(bao)(10 2-10 4 個)中分(fen)離RNA 樣品：往(wang)組織或(huo)細(xi)胞(bao)中加 入 800µl TRzol。待(dai)樣品裂(lie)解後(hou)，加入氯仿並進行步(bu)驟(zhou) 2 中的(de)抽(chou)提(ti)操作(zuo)。在用異丙(bing)醇(chun)沈 澱(dian) RNA 之前(qian)，加入 5~10μg 無 RNA 酶(mei)的(de)glycogen 作(zuo)為水樣層的(de)載(zai)體。為降低(di)其(qi)黏(nian)度(du) 在加入氯仿前(qian)用 26 號(hao)註射(she)器(qi)抽(chou)吸兩次(ci)以切(qie)斷基因組DNA。Glycogen 會(hui)留(liu)在水樣層中(zhong) 並和 RNA 共析出(chu)。在濃(nong)縮(suo)到(dao) 4mg/ml 之前(qian)它不(bu)會(hui)抑(yi)制(zhi)逆(ni)轉(zhuan)錄反(fan)應鏈的合成也(ye)不(bu)會(hui) 抑(yi)制(zhi) PCR。

2.在勻(yun)漿(jiang)化後(hou)和(he)加入氯仿之前(qian)，樣品可以在-60℃或(huo)者-70℃保存(cun)至(zhi)少壹個月。將 RNA 沈澱(dian)溶(rong)於(yu) 75%的(de)乙(yi)醇(chun)在 2-8℃至(zhi)少可以保(bao)存(cun)壹周，在-5—-20℃下(xia)至(zhi)少可保存(cun)壹年。

3.用 TRzol LS 抽(chou)提(ti) RNA 時(shi)要(yao)戴(dai)手(shou)套(tao)和(he)護眼(yan)罩。避(bi)免接(jie)觸(chu)皮膚(fu)和(he)衣(yi)服。在化(hua)學通(tong) 風(feng)櫥完(wan)成操作(zuo)。避(bi)免呼吸道(dao)吸入。如無(wu)例(li)外(wai)，室溫(wen)保持在 15~30℃的(de)條件下(xia)。

自(zi)備試(shi)劑(ji)：

氯仿 、 異丙(bing)醇(chun)、75%乙(yi)醇(chun)(RNase-Free water 配制)、RNase-Free water（將水加入 無 RNA 酶(mei)的(de)玻(bo)璃瓶中(zhong)，加入 DEPC 至 0.1% (V/V)。放(fang)置過夜(ye)並高(gao)壓滅(mie)菌(jun)）。0.5% SDS 溶(rong)液(RNase-Free water 配制)（可選）。

操作(zuo)步驟(zhou)：

1.樣品預處理(li) a.生(sheng)物液體 每0.25ml液(ye)體樣品(血(xue)清(qing)，血(xue)漿(jiang)等(deng)等(deng))加入0.75ml TRzol LS，用加樣槍(qiang)吹打(da)液(ye)體樣品 幾(ji)次(ci)以幫(bang)助裂(lie)解樣品中(zhong)細(xi)胞(bao)。每5~10×10 6個(ge)細(xi)胞(bao)至少加入0.75ml TRzol LS。對(dui)於(yu)含(han)有高(gao) 汙(wu)染物樣品如全(quan)血(xue)樣品，可以用滅(mie)菌(jun)水按(an)照(zhao)1：1比(bi)例(li)稀(xi)釋(shi)壹倍後(hou)開(kai)始提(ti)取(qu)。TRzol LS 和(he)液(ye)體樣品的(de)終(zhong)體積比(bi)總(zong)是3：1。 b.組織 用glass或(huo)強(qiang)力(li)勻(yun)漿器(qi)攪(jiao)勻(yun)組織樣品，每50~100mg組織或(huo)者0.25ml組織懸液(ye)加 0.75ml的(de)TRzol LS。壹般(ban)50~100mg組織體積都要(yao)小(xiao)於(yu)0.25ml，如果組織樣品的(de)體積小 於(yu)0.25ml，加入滅(mie)菌(jun)水將組織樣品體積調整(zheng)到(dao)0.25ml以(yi)保證(zheng)體積比(bi)例(li)是3：1。 c.單層生長(chang)的(de)細(xi)胞(bao) 直接往(wang)直徑(jing)3.5 cm的(de)培(pei)養(yang)板中加入0.3ml-0.4ml的TRzol LS溶(rong)解細(xi)胞(bao)，用加樣槍(qiang)吹打(da) 幫(bang)助充分(fen)裂(lie)解細(xi)胞(bao)。依據(ju)培(pei)養(yang)板的面積而(er)不(bu)是依據(ju)細(xi)胞(bao)的數量(liang)來決定所(suo)需的TRzol LS 量(liang) （每10cm2加0.3-0.4ml）。不(bu)需要(yao)往(wang)裂(lie)解物(wu)裏面(mian)加水，因為培(pei)養(yang)板中附著(zhe)殘留(liu)的(de)培(pei)養(yang)液 已經(jing)充分(fen)稀釋(shi)了(le)TRzol LS 。 d.懸浮(fu)生長(chang)的細(xi)胞(bao) 通(tong)過(guo)離心(xin)來沈澱(dian)細(xi)胞(bao)。在TRzol LS試(shi)劑(ji)中用移(yi)液管(guan)反(fan)復(fu)吹(chui)打來裂(lie)解細(xi)胞(bao)。每 5~10×10 6的(de)動(dong)物細(xi)胞(bao)，植(zhi)物(wu)或(huo)酵(jiao)母菌(jun)細(xi)胞(bao)或(huo)每1×10 7細(xi)菌(jun)加0.75ml的(de)TRzol LS。和(he)步驟(zhou) b 壹樣用滅(mie)菌(jun)水調(tiao)節樣品體積到(dao)0.25ml。在加入TRzol LS前(qian)應避(bi)免洗(xi)滌(di)細(xi)胞(bao)，因為那 樣會(hui)增(zeng)加mRNA降解的(de)可能(neng)性。破裂(lie)某些(xie)酵(jiao)母菌(jun)和(he)細(xi)菌(jun)可能(neng)需要(yao)使(shi)用勻漿器(qi)。 2.分(fen)離階(jie)段(duan) 將勻漿(jiang)樣品在15-30°C條件下(xia)孵育5min以(yi)使(shi)核蛋(dan)白體分(fen)解。每0.75ml TRzol LS 加0.2ml氯仿。蓋(gai)緊(jin)樣品管(guan)蓋(gai)，用手用力(li)搖(yao)晃試(shi)管(guan)15秒並將其(qi)在室(shi)溫(wen)下(xia)孵育2~15 min。 在2~8°C下(xia)以(yi)不(bu)超過(guo)12,000×g的離心(xin)力(li)高(gao)速冷(leng)凍離心(xin)15 min。離心(xin)後(hou)混合物(wu)分(fen)成三層(ceng)： 下(xia)層(ceng)苯-氯仿層(ceng)，中(zhong)間層，上層無(wu)色(se)的(de)水樣層。RNA無(wu)壹例(li)外(wai)地(di)存(cun)在於(yu)水樣層當(dang)中。 水樣層的(de)容(rong)量(liang)大(da)約(yue)為(wei)所(suo)加TRzol LS 容(rong)量(liang)的(de)70%。

2.RNA 的(de)沈澱(dian) 將水樣層轉(zhuan)移(yi)到(dao)壹幹(gan)凈的試(shi)管(guan)中(zhong)，如果希望(wang)分(fen)離DNA和(he)蛋(dan)白，有機(ji)層(ceng)和中(zhong)間層同 樣要(yao)予(yu)以(yi)保(bao)留(liu)。通(tong)過(guo)將水樣層和(he)異丙(bing)醇(chun)混合來沈澱(dian)RNA。每0.75ml TRzol LS對(dui)應0.5ml 異丙(bing)醇(chun)。將混合的(de)樣品在15-30°C條件下(xia)孵育10min並在2~8°C下(xia)以(yi)不(bu)超過(guo)12,000×g的離 心(xin)力(li)高(gao)速冷(leng)凍離心(xin)10 min。RNA沈澱(dian)在離(li)心(xin)前(qian)通(tong)常(chang)不(bu)可見，離(li)心(xin)後(hou)會(hui)形(xing)成壹膠狀片(pian)狀 沈澱(dian)附著(zhe)於(yu)試(shi)管(guan)壁(bi)和管(guan)底。

3.RNA 的漂(piao)洗(xi) 移(yi)去(qu)上(shang)層(ceng)懸液(ye)。用75%的乙醇(chun)(RNase-Free water配制)洗(xi)滌(di)RNA沈澱(dian)壹次(ci)，每0.75ml 的(de)TRzol LS至少加1ml的(de)75%乙(yi)醇(chun)。旋(xuan)渦振蕩(dang)混合樣品並在2~8°C下(xia)以(yi)不(bu)超過(guo)7,500×g的 離心(xin)力(li)高(gao)速冷(leng)凍離心(xin)5 min。

4.RNA 的再(zai)溶(rong)解 室(shi)溫簡(jian)單幹(gan)燥 RNA 沈澱(dian)，不(bu)要(yao)在真(zhen)空(kong)管(guan)裏離(li)心(xin)幹(gan)燥 RNA。尤為重(zhong)要(yao)的(de)是，不(bu)能(neng)讓 RNA 沈澱(dian)幹(gan)燥那樣會(hui)極(ji)大(da)地(di)降低(di)它的(de)可溶(rong)性。部分(fen)溶(rong)解的(de) RNA 樣品其(qi) OD260 /OD280 比(bi)值(zhi)<1.6 。用移(yi)液管(guan)分(fen)幾(ji)次(ci)移(yi)取(qu) RNase-Free water 或(huo) 0.5%SDS 溶(rong)液 (RNase-Free water 配制)來溶(rong)解RNA（如果RNA 以後(hou)要(yao)用於(yu)酶(mei)切(qie)反(fan)應時(shi)，避(bi)免使(shi)用SDS。） RNA 還能(neng)被(bei) 甲酰(xian)胺（除(chu)去(qu)離(li)子(zi)）再(zai)溶(rong)解並保存在-70°C。

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