遊(you)離(li)脂肪酸(suan)ELISA檢(jian)測試(shi)劑盒(he)原理

 本試(shi)劑(ji)盒(he)系由預(yu)包(bao)被(bei)豬瘟(wen)病毒(du)重(zhong)組E2蛋(dan)白(bai)的(de)酶標板(ban)、酶標記(ji)物(wu)及(ji)其他(ta)配(pei)套(tao)試劑組成(cheng)，應(ying)用酶聯免(mian)疫(yi)法(fa)（ELISA）原(yuan)理檢(jian)測(ce)豬(zhu)血(xue)清、血(xue)漿(jiang)樣(yang)本中(zhong)豬(zhu)瘟病(bing)毒抗體。實驗時在酶標板(ban)中加入(ru)對照(zhao)血清和(he)待檢樣本，經(jing)溫(wen)育後若(ruo)樣品(pin)中含(han)有豬(zhu)瘟(wen)病(bing)毒抗體，則(ze)將(jiang)與(yu)酶標板(ban)上抗原結合，經洗(xi)滌(di)除(chu)去未(wei)結合的其他(ta)成(cheng)分(fen)後；再加入(ru)酶標記(ji)物(wu)，與(yu)酶標板(ban)上抗原抗體復合(he)物(wu)發(fa)生特異(yi)性結合；再經洗(xi)滌(di)除(chu)去未(wei)結合的酶標記(ji)物(wu)，在孔中加TMB底(di)物(wu)液，與(yu)酶反應(ying)形(xing)成(cheng)藍色(se)產(chan)物(wu)，顯(xian)色深(shen)淺(qian)與樣(yang)品(pin)中的(de)特(te)異(yi)性抗體含量(liang)成(cheng)正相關；加入(ru)終止(zhi)液終(zhong)止(zhi)反應(ying)後，產(chan)物(wu)變(bian)為(wei)黃色(se)；用酶標儀(yi)在450nm波長測(ce)定各反應(ying)孔中的(de)吸光(guang)值，即可(ke)知樣(yang)品(pin)是否含(han)有豬(zhu)瘟(wen)病(bing)毒抗體。

遊離(li)脂肪酸(suan)ELISA檢(jian)測試(shi)劑盒(he)樣本處(chu)理及(ji)要求(qiu)：

1. 血(xue)清：室(shi)溫(wen)血(xue)液自(zi)然(ran)凝固10-20分(fen)鐘(zhong)，離(li)心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。
仔細收(shou)集(ji)上清，保存(cun)過(guo)程(cheng)中如(ru)出(chu)現沈澱，應(ying)再次離(li)心。

2. 血(xue)漿：應(ying)根據(ju)標本的(de)要(yao)求選(xuan)擇(ze)EDTA或(huo)檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉(na)作為(wei)抗凝劑，混(hun)合(he)10-20分(fen)鐘(zhong)後，離(li)心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細收(shou)集(ji)上清，保存(cun)過(guo)程(cheng)中如(ru)有沈澱形(xing)成(cheng)，應(ying)該(gai)再次離(li)心。

3. 尿液：用無菌管收(shou)集(ji)，離(li)心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細收(shou)集(ji)上清，保存(cun)過(guo)程(cheng)中如(ru)有沈澱形(xing)成(cheng)，應(ying)再次離(li)心。胸腹(fu)水(shui)、腦(nao)脊液參(can)照實行(xing)。

4. 細胞(bao)培養上清：檢(jian)測(ce)分(fen)泌性的成(cheng)份(fen)時(shi)，用無菌管收(shou)集(ji)。離(li)心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細收(shou)集(ji)上清。檢(jian)測(ce)細(xi)胞內(nei)的(de)成(cheng)份(fen)時(shi)，用PBS（PH7.2-7.4）稀(xi)釋(shi)細胞(bao)懸液，細(xi)胞(bao)濃(nong)度(du)達到100萬/ml左(zuo)右。通(tong)過反復凍(dong)融，以(yi)使細(xi)胞破壞並(bing)放出(chu)細(xi)胞(bao)內(nei)成(cheng)份(fen)。離(li)心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細收(shou)集(ji)上清。保存(cun)過(guo)程(cheng)中如(ru)有沈澱形(xing)成(cheng)，應(ying)再次離(li)心。

5. 組織(zhi)標本：切割標本後，稱取(qu)重(zhong)量(liang)。加入(ru)壹定量(liang)的PBS，PH7.4。用液氮(dan)迅速(su)冷(leng)凍保存(cun)備(bei)用。標本融(rong)化(hua)後仍(reng)然(ran)保持(chi)2-8℃的溫(wen)度(du)。加入(ru)壹定量(liang)的PBS（PH7.4），用手(shou)工或(huo)勻(yun)漿器將(jiang)標本勻(yun)漿充(chong)分(fen)。離(li)心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細收(shou)集(ji)上清。分(fen)裝後壹(yi)份(fen)待檢測，其余(yu)冷(leng)凍備用。

6. 標本采集(ji)後盡(jin)早(zao)進(jin)行(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相關文獻進行(xing)，提(ti)取(qu)後應(ying)盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)實驗。若(ruo)不能(neng)馬上進(jin)行(xing)試驗，可將標本放(fang)於(yu)-20℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避免(mian)反復凍(dong)融.

7. 不(bu)能檢(jian)測含NaN3的樣品(pin)，因NaN3抑制辣根(gen)過(guo)氧化物(wu)酶的（HRP）活(huo)性。