夾心 ELISA 測(ce)定(ding)兩層抗(kang)體（捕獲(huo)抗(kang)體和檢(jian)測(ce)抗(kang)體）之間(jian)的抗(kang)原。目(mu)標抗(kang)原必(bi)須(xu)包(bao)含至少兩個能(neng)夠(gou)結(jie)合到抗(kang)體的抗(kang)原表(biao)位。單(dan)克(ke)隆或多克(ke)隆抗(kang)體均(jun)可(ke)在(zai)夾(jia)心 ELISA 系(xi)統中(zhong)用(yong)作(zuo)捕獲(huo)抗(kang)體和檢(jian)測(ce)抗(kang)體。單(dan)克(ke)隆抗(kang)體識別(bie)單(dan)壹(yi)表(biao)位，可對(dui)抗(kang)原中(zhong)微(wei)小(xiao)差(cha)別(bie)進行定量(liang)檢(jian)測(ce)。多克(ke)隆抗(kang)體通常(chang)用作捕獲(huo)抗(kang)體以沈(chen)降(jiang)盡可能(neng)多的抗(kang)原。

夾(jia)心 ELISA 省(sheng)去了分析之前的樣(yang)品純(chun)化步驟(zhou)，而(er)且提高了(le)分析靈敏度（靈敏度比直接(jie)或(huo)間(jian)接(jie) ELISA 高 2-5 倍）。

夾(jia)心 ELISA 程(cheng)序(xu)可(ke)能(neng)難(nan)以(yi)優(you)化，應使(shi)用已測(ce)試的匹配抗(kang)體對。這(zhe)樣(yang)可(ke)確保抗(kang)體檢(jian)測(ce)靶蛋白(bai)上的不(bu)同表(biao)位，而(er)不會(hui)幹擾(rao)其它(ta)抗(kang)體結合。我們(men)不能(neng)保證(zheng)我們(men)的抗(kang)體可用(yong)於夾(jia)心 ELISA，除非(fei)它(ta)們(men)已經(jing)過專門的測(ce)試。

雙(shuang)抗(kang)體夾心法是(shi)檢(jian)測(ce)抗(kang)原zui常(chang)用的方(fang)法，操(cao)作步驟(zhou)如下(xia)：

1、將特異性(xing)抗(kang)體與固(gu)相(xiang)載體連接(jie)，形成(cheng)固(gu)相(xiang)抗(kang)體：洗(xi)滌除去未(wei)結(jie)合的抗(kang)體及(ji)雜質(zhi)。

2、加(jia)受檢(jian)標(biao)本：使(shi)之與固相(xiang)抗(kang)體接(jie)觸反(fan)應壹(yi)段時(shi)間，讓(rang)標本中(zhong)的抗(kang)原與(yu)固相(xiang)載體上的抗(kang)體結合，形成(cheng)固(gu)相(xiang)抗(kang)原復(fu)合物。洗(xi)滌除去其他(ta)未(wei)結(jie)合的物質(zhi)。

3、加(jia)酶(mei)標抗(kang)體：使(shi)固相(xiang)免疫(yi)復(fu)合物上的抗(kang)原與(yu)酶(mei)標抗(kang)體結合。徹di洗(xi)滌未(wei)結(jie)合的酶(mei)標抗(kang)體。此(ci)時(shi)固相(xiang)載體上帶有的酶(mei)量(liang)與(yu)標(biao)本(ben)中(zhong)受(shou)檢(jian)物質(zhi)的量(liang)正相(xiang)關。

4、加(jia)底物：夾心式復(fu)合物中(zhong)的酶(mei)催化底物成(cheng)為(wei)有(you)色(se)產(chan)物。根據(ju)顏色(se)反(fan)應的程(cheng)度進(jin)行(xing)該(gai)抗(kang)原的定(ding)性或(huo)定(ding)量(liang)。

根(gen)據(ju)同樣(yang)原(yuan)理，將(jiang)大(da)分子(zi)抗(kang)原分別(bie)制備固相(xiang)抗(kang)原和酶(mei)標抗(kang)原結(jie)合物，即可用雙(shuang)抗(kang)原夾(jia)心法測(ce)定(ding)標本中(zhong)的抗(kang)體。