5-8F人高(gao)轉移(yi)鼻咽癌細(xi)胞(bao)系

公(gong)司(si)產品(pin)僅(jin)供科(ke)研研究(jiu)使(shi)用、不(bu)得用(yong)於臨床診斷！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯微鏡(jing)下觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回縮變圓後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止消(xiao)化，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯微鏡(jing)下觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回縮變圓後(hou)加入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止消(xiao)化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的凍存(cun)液（

FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並放置於凍存(cun)管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞(bao)凍存(cun)管放置於-20℃ 1.5h，然後將其移入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉入(ru)液氮(dan)中(zhong)進(jin)行長(chang)期保存(cun)。使(shi)用程(cheng)序

降(jiang)溫(wen)盒可直接放入(ru)-80℃。

3、細(xi)胞(bao)復(fu)蘇(su)：

1）從(cong)液氮(dan)中(zhong)取(qu)出細(xi)胞(bao)凍存(cun)管（註(zhu)意：佩(pei)戴(dai)防爆(bao)管面(mian)具(ju)），快(kuai)速(su)將其置入 37℃水(shui)浴中(zhong)解(jie)凍，直(zhi)至凍存(cun)管中(zhong)無(wu)結

晶(jing)，然後用 75%的酒精(jing)擦(ca)拭(shi)凍存(cun)管外(wai)壁(bi)；

2）將凍存(cun)管中(zhong)的細(xi)胞(bao)移至含 6ml 培(pei)養(yang)基(ji)的 15ml 離心(xin)管中(zhong)， 1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱用 6ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸，接種(zhong) 25cm2培(pei)養(yang)瓶，於 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)；

收到(dao)細(xi)胞(bao)後如何(he)操(cao)作(zuo):

1、首先，觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象。若(ruo)有(you)，請(qing)及時與我司(si)技術支(zhi)持(chi)聯(lian)系。

2、用75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表面(mian)，顯微鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)會有(you)少(shao)量(liang)從(cong)瓶壁(bi)脫(tuo)落，將細(xi)胞(bao)置於細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)箱內(nei)靜置培(pei)養(yang)，隔天(tian)再取出(chu)進(jin)行觀(guan)察(cha)。

3、仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相關(guan)信(xin)息，如細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等。

4、可將培(pei)養(yang)瓶內多(duo)余(yu)的培(pei)養(yang)基(ji)轉移(yi)至50ml無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，備用(yong)；細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)時(shi)，可以將該(gai)培(pei)養(yang)基(ji)按(an)照壹定比(bi)例(li)和客戶(hu)自備的培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合使(shi)用，讓(rang)細(xi)胞(bao)逐漸適(shi)應(ying)培(pei)養(yang)條件。

5、確認(ren)細(xi)胞(bao)狀態(tai)良好(hao)後，應(ying)及時將細(xi)胞(bao)凍存(cun)，再進(jin)行後(hou)續(xu)的實驗，避(bi)免後(hou)期實(shi)驗失(shi)誤(wu)可能(neng)發(fa)生(sheng)細(xi)胞(bao)汙染(ran)或(huo)死(si)亡而(er)導致的細(xi)胞(bao)丟(diu)失(shi)。

6、建(jian)議客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後前(qian)3天(tian)，100X、200X、400X各拍3-5張細(xi)胞(bao)照片，記錄細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便於(yu)和我(wo)們技術支(zhi)持(chi)溝(gou)通交流。

細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍存(cun)處理(li)僅(jin)供參(can)考，具體操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以隨(sui)貨產品(pin)說(shuo)明(ming)書為(wei)主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的凍存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速搖晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件下離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻(yun)。然後將所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入含適(shi)量培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如果(guo)細(xi)胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

    a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂離子(zi)的PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次。        

    b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消化液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶置於37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況(kuang)而(er)定），然後在(zai)顯微鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)消化情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫落，迅速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。        

     c、將細(xi)胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分到(dao)新的含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的新皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置於培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態(tai)良好(hao)時，可進(jin)行細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶為例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件下離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄盡PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

     b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)液，使(shi)細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註意凍存(cun)管做(zuo)好標(biao)識(shi)。將凍存(cun)管放入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉入(ru)液氮(dan)灌儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管位(wei)置以便(bian)下次拿(na)取。  

三(san)、培(pei)養(yang)註意事項 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後首(shou)先觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象，若(ruo)有(you)上(shang)述現(xian)象 發(fa)生(sheng)請(qing)及時和我(wo)們聯系。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相關(guan)信(xin)息，如細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等，確(que)保細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條件壹致，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條件不(bu)壹致而(er)導致細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，責任由(you) 客戶(hu)自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表面(mian)，顯微鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變化及劇烈碰亡破碎(sui)形成碎片(pian)，是正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀察好(hao)細(xi)胞(bao)狀態(tai)後，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置於 37℃培(pei)養(yang)箱放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可以消(xiao)化，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直接(jie)混勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到(dao)新的培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿中(zhong)，置於培(pei)養(yang)箱中(zhong)進(jin)行培(pei)養(yang)。

5. 請客戶(hu)用相同(tong)條件的培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各拍幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片，記錄細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便於(yu)和我(wo)司(si)技術部(bu)溝(gou)通 交流。由(you)於(yu)運輸(shu)的原因(yin)，個(ge)別敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩定(ding)的情況(kuang)，請及時和我(wo)們聯系，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具體情況(kuang)，以便(bian)我們的技術人(ren)員跟(gen)蹤回訪直至問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供科(ke)研使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用的培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請換(huan)用按(an)照說(shuo)明(ming)書細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條件新配(pei)制的培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細(xi)胞(bao)後第(di)壹次傳(chuan)代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的產品(pin)：

phospho-LATS2 (Ser83)： 0酸化抑(yi)制基(ji)因(yin)LATS2抗(kang)體 家貓皮膚細(xi)胞(bao);FCA-S1

NAMALWA人Butt's淋(lin)巴(ba)瘤細(xi)胞(bao) NAMALWA human Butt's lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大(da)鼠周期素依賴(lai)性(xing)激(ji)酶(mei)抑(yi)制因(yin)子(zi)2A(CDKN2A)ELISA試(shi)劑盒 Horse IgG/Cy3 熒光素Cy3標(biao)記馬(ma)IgG 0.1ml

phospho-LSP1 (Ser252)： 0酸化白(bai)細(xi)胞(bao)F肌動(dong)蛋白(bai)結合蛋白(bai)抗(kang)體 PLAUR Others Mouse 小(xiao)鼠 uPAR / PLAUR / CD87 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

人膀胱基(ji)質成纖維(wei)細(xi)胞(bao)HBdSF 大(da)鼠周期素依賴(lai)性(xing)激(ji)酶(mei)抑(yi)制因(yin)子(zi)1A(CDKN1A)ELISA試(shi)劑盒 Horse IgM/Cy3 熒光素Cy3標(biao)記馬(ma)IgM 0.1ml

LSP1： 白細(xi)胞(bao)F肌動(dong)蛋白(bai)結合蛋白(bai)抗(kang)體 小(xiao)鼠骨髓細(xi)胞(bao);FDC-P1

MOLT-4細(xi)胞(bao)，人急性(xing)T淋(lin)巴(ba)母細(xi)胞(bao)白血病細(xi)胞(bao) 大(da)鼠卵(luan)巢癌(ai)細(xi)胞(bao)株,NUTU-19細(xi)胞(bao) 人外(wai)根(gen)殼細(xi)胞(bao)cDNAHHORSC cDNA 人雷帕(pa)黴素靶(ba)蛋白(bai)(mTOR)ELISA 試(shi)劑盒 CAD(Caspase-Activated Deoxyribonuclease) Caspase 激活的脫氧(yang)核糖(tang)核酸酶(mei)(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

GNMT： 甘酸-N-甲基(ji)轉移(yi)酶(mei) 0.2ml

Rhesus antibody Rh BDKRB1 緩(huan)激肽B1受(shou)體抗(kang)體 CD244 Others Human 人 2B4 / SLAMF / CD244 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

人APP基(ji)因(yin)轉染(ran)CHO細(xi)胞(bao)株;7WD10 人(ren)酪酸羥化酶(mei)(TH)ELISA 試(shi)劑盒 MYOG 肌紅蛋白(bai)抗(kang)原(yuan) 0.5mg

GRP75： G蛋白(bai)偶聯受(shou)體75抗(kang)體 人臍靜(jing)脈內(nei)皮細(xi)胞(bao);HUV-EC-C

5-8F人高(gao)轉移(yi)鼻咽癌細(xi)胞(bao)系LoVo人結腸癌(ai)細(xi)胞(bao) LoVo human colon cancer cells DMEM/F12(1:1)+10% FBS 大(da)鼠巨(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)集落刺激(ji)因(yin)子(zi)(MCSF)ELISA試(shi)劑盒 LFA-3/CD58  大(da)鼠淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)功能(neng)相關(guan)抗(kang)原(yuan)3 96T

PRPS1L1： 蛋白(bai)酶(mei)體復(fu)合物C5抗(kang)體 BMPR1A Others Mouse 小(xiao)鼠 ALK-3 / BMPR1A 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

人結直(zhi)腸腺癌細(xi)胞(bao);HT-29 大(da)鼠巨(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)集落刺激(ji)因(yin)子(zi)(M-CSF)ELISA 試(shi)劑盒 SRP(Human signal recognization particle antibody)  人抗(kang)信(xin)號識(shi)別(bie)顆(ke)粒(li)抗(kang)體 貓腎細(xi)胞(bao);CRFK

人非(fei)色(se)素睫狀上(shang)皮細(xi)胞(bao) (HNPCEpiC)( 5×105 ) LX-2, 人肝(gan)星形(xing)細(xi)胞(bao)株 Human 大(da)鼠巨(ju)嗜(shi)細(xi)胞(bao)趨化蛋白(bai)1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試(shi)劑盒 BA(Human Blocking antibody)  人封(feng)閉(bi)抗(kang)體 人脈絡叢(cong)上(shang)皮細(xi)胞(bao)RNAHCPEpiC miRNA5 μg

TNFSF12 Protein Rat 重組(zu)大(da)鼠 TNFSF12 蛋白(bai) (Fc 標(biao)簽) 大(da)鼠巨(ju)嗜(shi)細(xi)胞(bao)趨化蛋白(bai)1(MCP-1/CCL2)ELISA試(shi)劑盒 UU-Ab(Mouse Ureaplasma urealyticum antibody)  小(xiao)鼠解(jie)脲脲原體抗(kang)體 CFR Others Human 人 CFR / CFR-alpha 桿狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照)