A2058人黑(hei)色(se)素(su)瘤(liu)細(xi)胞

公司產(chan)品(pin)僅供(gong)科研研究使用、不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷！

1、細(xi)胞傳代：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮變圓後(hou)加入 5ml 培(pei)養(yang)

液終止(zhi)消(xiao)化，再(zai)輕(qing)輕吹(chui)打細(xi)胞使之脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上清，沈澱細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比例(li)進(jin)行分(fen)瓶(ping)傳代，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞凍存：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮變圓後(hou)加入培(pei)養(yang)液終

止(zhi)消(xiao)化，輕輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使之脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量的凍存液(ye)（

FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍存管(guan)中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其(qi)移入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮中進(jin)行(xing)長期保(bao)存。使用程序

降溫(wen)盒(he)可直接(jie)放(fang)入-80℃。

3、細(xi)胞復(fu)蘇：

1）從(cong)液(ye)氮中取(qu)出細(xi)胞凍存管(guan)（註意：佩戴防爆(bao)管面具(ju)），快速(su)將其(qi)置(zhi)入 37℃水(shui)浴(yu)中解(jie)凍，直至(zhi)凍存管(guan)中(zhong)無結

晶(jing)，然(ran)後用 75%的酒精(jing)擦拭(shi)凍存管(guan)外壁；

2）將(jiang)凍存管(guan)中(zhong)的細(xi)胞移至(zhi)含(han) 6ml 培(pei)養(yang)基的 15ml 離(li)心管(guan)中， 1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上清，沈澱用 6ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，接(jie)種 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)，於(yu) 37℃，5%CO2細(xi)胞培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

收(shou)到細(xi)胞後如(ru)何(he)操(cao)作:

1、首(shou)先，觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是(shi)否(fou)有(you)漏液、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)。若(ruo)有(you)，請(qing)及時與我(wo)司技術支持聯系。

2、用75%酒精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表面，顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸問(wen)題，部(bu)分(fen)貼壁細(xi)胞會有(you)少(shao)量從(cong)瓶(ping)壁脫落(luo)，將細(xi)胞置(zhi)於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)箱內靜(jing)置(zhi)培(pei)養(yang)，隔天再(zai)取(qu)出進(jin)行觀(guan)察(cha)。

3、仔細(xi)閱讀細(xi)胞說明書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息，如(ru)細(xi)胞形態、所(suo)用培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比例(li)、所(suo)需(xu)細(xi)胞因(yin)子等(deng)。

4、可將培(pei)養(yang)瓶(ping)內多余(yu)的培(pei)養(yang)基轉移至(zhi)50ml無(wu)菌離(li)心管(guan)中，備(bei)用；細(xi)胞傳代時(shi)，可以將(jiang)該(gai)培(pei)養(yang)基按(an)照(zhao)壹(yi)定比例(li)和(he)客(ke)戶(hu)自(zi)備(bei)的(de)培(pei)養(yang)基混(hun)合使用，讓細(xi)胞逐漸適(shi)應培(pei)養(yang)條件。

5、確認(ren)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)後，應及時將(jiang)細(xi)胞凍存，再(zai)進(jin)行後(hou)續(xu)的實驗(yan)，避(bi)免後(hou)期實驗(yan)失(shi)誤(wu)可能發(fa)生(sheng)細(xi)胞汙(wu)染或(huo)死亡(wang)而導致(zhi)的(de)細(xi)胞丟(diu)失(shi)。

6、建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到細(xi)胞後前3天，100X、200X、400X各(ge)拍(pai)3-5張細(xi)胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和(he)我們(men)技術支持溝通(tong)交流(liu)。

細(xi)胞培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇細(xi)胞：以下細(xi)胞培(pei)養(yang)凍存處(chu)理僅供(gong)參(can)考(kao)，具體(ti)操(cao)作步(bu)驟以隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明書為(wei)主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍存管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中迅速(su)搖(yao)晃解(jie)凍，加4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下離(li)心3 min，棄去(qu)上清液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所有(you)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入含(han)適(shi)量培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第(di)二(er)天換(huan)液(ye)並(bing)檢查(zha)細(xi)胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳代：如(ru)果(guo)細(xi)胞密(mi)度達 80%-90%，即可進行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

    a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上清，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗細(xi)胞1-2次。        

    b、加1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使消(xiao)化液浸(jin)潤所有(you)細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況(kuang)而定(ding)），然(ran)後在顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞消(xiao)化情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫落(luo)，迅速(su)拿回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化。輕輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm離(li)心5 min，棄去(qu)上清液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。        

     c、將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例(li)分(fen)到新的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的新皿(min)中或(huo)者瓶(ping)中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍存：待(dai)細(xi)胞生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時，可進行(xing)細(xi)胞凍存。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞及細(xi)胞培(pei)養(yang)液，裝入無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm條件下離(li)心4 min，棄去(qu)上清液，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計數。

     b、根據(ju)細(xi)胞數量(liang)加入無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞凍存液(ye)，使細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻(yun)，每(mei)支凍存管(guan)凍存1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註意凍存管(guan)做(zuo)好(hao)標識。將凍存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存。記錄凍存管(guan)位(wei)置(zhi)以便下次拿(na)取(qu)。  

三(san)、培(pei)養(yang)註意事項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞後首先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是(shi)否(fou)有(you)漏液、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有(you)上述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及時和(he)我們(men)聯系。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞說明書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息，如(ru)細(xi)胞形態、所(suo)用培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因(yin)子等(deng)，確保(bao)細(xi)胞培(pei)養(yang)條件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條件不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞出現問(wen)題，責(ze)任(ren)由 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表面，顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸問(wen)題，部(bu)分(fen)細(xi)胞由於(yu)溫(wen)度 變化及劇(ju)烈碰亡(wang)破碎(sui)形(xing)成碎(sui)片(pian)，是(shi)正常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可以消(xiao)化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮的培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細(xi)胞，並接(jie)種到(dao)新的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或培(pei)養(yang)皿中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱中進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相(xiang)同(tong)條件的培(pei)養(yang)基用於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到細(xi)胞後前 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和(he)我司技術部(bu)溝通(tong) 交流(liu)。由於(yu)運(yun)輸的(de)原因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞會出現(xian)不(bu)穩定的情況(kuang)，請(qing)及時和(he)我們(men)聯系，告知細(xi)胞 的具體(ti)情況(kuang)，以便我們(men)的(de)技(ji)術人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供(gong)科研使用。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用的培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養(yang)基) 不(bu)能(neng)再(zai)用來培(pei)養(yang)細(xi)胞，請(qing)換(huan)用按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞培(pei) 養(yang)條件新配制的培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細(xi)胞。     收(shou)到細(xi)胞後第壹(yi)次傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公司正在出(chu)售的(de)產(chan)品(pin)：

Phospho-LAT (Tyr161)： 0酸(suan)化T細(xi)胞活(huo)化連接(jie)蛋(dan)白(bai)抗體(ti) MiaPaCa-2, 人胰腺(xian)癌細(xi)胞 非雄(xiong)激(ji)素依(yi)賴(lai)型前(qian)列腺(xian)癌,Tsu-Pr1細(xi)胞 ZR-75-1(癌細(xi)胞)

HA Others H10N9 甲(jia)型流(liu)感(gan) H10N9 (A/duck/HongKong/562/1979) 血(xue)凝素(su) (Hemagglutinin / HA) 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠(shu)重肽(tai)神經(jing)絲蛋(dan)白(bai)(NEFH)ELISA試劑盒 Monkey IgG/Cy3 熒光(guang)素(su)Cy3標(biao)記猴IgG 0.1ml

Phospho-LAT (Tyr200)： 0酸(suan)化T細(xi)胞活(huo)化連接(jie)蛋(dan)白(bai)抗體(ti) 豚鼠皮膚細(xi)胞;GP-S3

Raji人Butt's淋巴瘤(liu)細(xi)胞 Raji human Butt's lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠腫(zhong)瘤(liu)轉移抑(yi)制基因(yin)KISS1蛋(dan)白(bai)(KISS1/Kisspeptin 1)ELISA試劑盒 Monkey IgM/Cy3 熒光(guang)素(su)Cy3標(biao)記猴IgM 0.1ml

LRP1/CD91： 低密(mi)度脂(zhi)蛋(dan)白(bai)受體(ti)相(xiang)關(guan)蛋(dan)白(bai)1抗體(ti) SERPINA7 Others Human 人 SerpinA7 / TBG 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

GPR85： G蛋(dan)白(bai)偶聯(lian)受(shou)體(ti)GPR85蛋(dan)白(bai)抗體(ti) 家貓(mao)腎細(xi)胞;CATK1 肝(gan)細(xi)胞，HL-7702細(xi)胞 MMQ細(xi)胞，大鼠垂體(ti)瘤(liu)細(xi)胞

IGFBP4 Others Cynomolgus 食(shi)蟹猴(hou) IGFBP4 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 人狂犬(quan)病(bing)抗體(ti)(RV-Ab)ELISA試劑盒 Caspase-3 (CPP32) 半胱胺酸(suan)蛋(dan)白(bai)酶蛋(dan)白(bai)-3(抗原(yuan)) 0.5mg

Gentamicin： 抗體(ti) 神經(jing)少(shao)突(tu)起(qi)前質膠(jiao)質細(xi)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(fang)(1ml)

Hat-78細(xi)胞，人T細(xi)胞淋巴瘤(liu) 小鼠(shu)腎癌細(xi)胞,Ranca細(xi)胞 人食(shi)道平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞cDNAHESMC cDNA 人狂犬(quan)病(bing)毒(du)抗原(yuan)ELISA試劑盒 Caspase-6 (CT) 半胱胺酸(suan)蛋(dan)白(bai)酶蛋(dan)白(bai)-6(抗原(yuan)) 0.5mg

Galectin 9： 半乳糖凝集(ji)素(su)9抗體(ti) RBP4 Others Mouse 小鼠 RBP4 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

A2058人黑(hei)色(se)素(su)瘤(liu)細(xi)胞人導管(guan)癌細(xi)胞;ZR-75-1 大鼠精(jing)酸(suan)加壓(ya)素(AVP)ELISA試劑盒 MHC III /AgB III /H-1 III  大鼠(shu)主(zhu)要(yao)組(zu)織相(xiang)容性復(fu)合體(ti)Ⅲ類 96T

phospho-PIK3 gamma (Thr1024)： 0酸(suan)化0脂(zhi)酰肌(ji)醇激(ji)酶PIK3-γ抗體(ti) 貓(mao)星(xing)形(xing)腦(nao)膠(jiao)質細(xi)胞;PG-4(S+L-)

人小梁網細(xi)胞(HTMC)(5×105) 3T3-L1, 小鼠前(qian)脂(zhi)肪細(xi)胞 Mouse 大鼠精(jing)酸(suan)(Arg)ELISA試劑盒 MHC II /AgB II /H-1 II  大鼠(shu)主(zhu)要(yao)組(zu)織相(xiang)容性復(fu)合體(ti)Ⅱ類 96T

PBX1： B淋(lin)巴細(xi)胞白(bai)血(xue)病(bing)前體(ti)蛋(dan)白(bai)轉錄(lu)因(yin)子1抗體(ti) 人臍靜(jing)脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞總RNAHUVEC NA

CD40LG Protein Rat 重組(zu)大(da)鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋(dan)白(bai) (Fc 標簽(qian)) 大(da)鼠精(jing)胺脲(niao)水(shui)解(jie)酶(mei)(AGMAT)ELISA試劑盒 pANCA(Mouse Perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibody)  小鼠(shu)抗中(zhong)性(xing)粒(li)細(xi)胞核(he)周(zhou)抗體(ti) ACBD6 Others Human 人 ACBD6 桿狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆蟲細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))