3D4/21豬肺泡(pao)巨噬(shi)細胞

公(gong)司產(chan)品僅(jin)供科研研究(jiu)使(shi)用、不(bu)得(de)用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹次；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞回縮變(bian)圓(yuan)後加入 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消化(hua)，再輕輕吹(chui)打細胞使之脫落，然後將懸(xuan)液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞用 1-2ml 培養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然後按(an) 1:2 比(bi)例進行分瓶(ping)傳代，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱中培養(yang)；

2、細胞凍存：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹次；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞回縮變(bian)圓(yuan)後加入培(pei)養(yang)液終

止消化(hua)，輕輕吹(chui)打細胞使之脫落，然後將懸(xuan)液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適量的凍存液(ye)（

FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並放(fang)置於(yu)凍存(cun)管中；

4）先將細胞凍存管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後將其移入-80℃過夜，24h 後轉入液(ye)氮(dan)中進(jin)行(xing)長(chang)期(qi)保存(cun)。使用程序(xu)

降溫(wen)盒(he)可直接(jie)放(fang)入-80℃。

3、細胞復(fu)蘇：

1）從液(ye)氮(dan)中取(qu)出(chu)細胞凍存管（註意(yi)：佩戴(dai)防(fang)爆(bao)管面(mian)具(ju)），快(kuai)速(su)將其置入 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)解(jie)凍(dong)，直(zhi)至(zhi)凍存管中無結

晶(jing)，然後用 75%的酒精擦(ca)拭凍存(cun)管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至(zhi)含 6ml 培(pei)養(yang)基的 15ml 離(li)心管中， 1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上清(qing)，沈(chen)澱(dian)用 6ml 培養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，接種(zhong) 25cm2培養(yang)瓶(ping)，於(yu) 37℃，5%CO2細胞培養(yang)箱中培養(yang)；

收到細胞後如何操(cao)作:

1、首(shou)先，觀察細胞瓶(ping)是否完好，培(pei)養(yang)液是否有(you)漏液(ye)、渾濁等現象。若有，請及(ji)時與(yu)我司技(ji)術支(zhi)持聯系(xi)。

2、用75%酒精(jing)擦(ca)拭細胞瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下(xia)觀察細胞狀態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題，部(bu)分貼(tie)壁(bi)細胞會有少量從瓶(ping)壁脫落，將細胞置於(yu)細胞培養(yang)箱內靜(jing)置培養(yang)，隔(ge)天(tian)再取(qu)出(chu)進(jin)行觀察。

3、仔(zai)細閱讀細胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了解(jie)細胞相關信(xin)息，如細胞形態(tai)、所用培養(yang)基、血清(qing)比(bi)例、所需(xu)細胞因(yin)子(zi)等(deng)。

4、可將培養(yang)瓶(ping)內多余的培養(yang)基轉移至(zhi)50ml無菌離(li)心管中，備(bei)用；細胞傳代時，可以將該(gai)培養(yang)基按(an)照壹定比(bi)例和客戶自(zi)備(bei)的培養(yang)基混合(he)使(shi)用，讓細胞逐(zhu)漸(jian)適應培養(yang)條件。

5、確認細胞狀態(tai)良好(hao)後，應及(ji)時將細胞凍存，再進(jin)行(xing)後續的實驗，避免後期實驗失(shi)誤可能發生細胞汙染或(huo)死亡(wang)而(er)導(dao)致(zhi)的細胞丟失(shi)。

6、建議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到細胞後前3天，100X、200X、400X各拍3-5張(zhang)細胞照片，記錄(lu)細胞狀態(tai)，便於(yu)和我們技術支(zhi)持溝(gou)通(tong)交(jiao)流。

細胞培養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇細胞：以下(xia)細胞培養(yang)凍存處理僅(jin)供參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作步(bu)驟以隨(sui)貨(huo)產品說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主。將含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液的凍存管在 37℃水浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃解(jie)凍，加4 mL培(pei)養(yang)基混合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條件下(xia)離(li)心3 min，棄去上清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹(chui)勻(yun)。然後將所有(you)細胞懸(xuan)液加入含適量培(pei)養(yang)基的培養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過夜（或將細胞懸(xuan)液加入10 cm皿(min)中，加入約(yue)8 mL培養(yang)基，培養(yang)過夜）。第二(er)天換液並(bing)檢查(zha)細胞密(mi)度。

2) 細胞傳代：如果(guo)細胞密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳代培養(yang)。

    a、棄去培養(yang)上清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤洗細胞1-2次。        

    b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液浸潤所有(you)細胞，將培養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培養(yang)箱中消化(hua)1-2 min（視細胞情況而(er)定(ding)），然後在顯微鏡下(xia)觀察細胞消化(hua)情況，若細胞大部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落，迅(xun)速(su)拿回操(cao)作臺，輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養(yang)基終止消化(hua)。輕輕打勻後裝(zhuang)入無(wu)菌離(li)心管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄去上清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。        

     c、將細胞懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例分到新(xin)的含8 mL培(pei)養(yang)基的新皿(min)中或(huo)者瓶(ping)中，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱中培養(yang)。 3) 細胞凍存：待(dai)細胞生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時，可進行(xing)細胞凍存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收集(ji)細胞及(ji)細胞培養(yang)液，裝(zhuang)入無(wu)菌離(li)心管中，1000 rpm條件下(xia)離(li)心4 min，棄去上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄(qi)盡PBS，進行細胞計(ji)數(shu)。

     b、根據細胞數量加入無(wu)血清(qing)細胞凍存液(ye)，使細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管凍存1mL細胞懸(xuan)液，註意(yi)凍存(cun)管做好標識。將凍存管放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存。記錄(lu)凍存(cun)管位(wei)置(zhi)以便(bian)下(xia)次拿取。  

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事項(xiang) 

1. 收到細胞後首(shou)先觀察細胞瓶(ping)是否完好，培(pei)養(yang)液是否有(you)漏液(ye)、渾濁等現象，若有上述現象 發生請(qing)及(ji)時和我們聯系。

2. 仔(zai)細閱讀細胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了解(jie)細胞相關信(xin)息，如細胞形態(tai)、所用培養(yang)基、血清(qing)比(bi)例、所需(xu) 細胞因(yin)子(zi)等(deng)，確保細胞培養(yang)條件壹致，若由於(yu)培養(yang)條件不(bu)壹致而(er)導(dao)致(zhi)細胞出(chu)現問題，責任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭細胞瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下(xia)觀察細胞狀態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題，部(bu)分細胞由於(yu)溫(wen)度 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎形成(cheng)碎片，是正常現象。觀察好(hao)細胞狀態(tai)後，75%酒精消毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可以消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細胞直接混(hun)勻收(shou)集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新鮮(xian)的培養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細胞，並接種(zhong)到新(xin)的培養(yang)瓶(ping)或培(pei)養(yang)皿(min)中，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱中進行培(pei)養(yang)。

5. 請客戶用相同條件(jian)的培養(yang)基用於(yu)細胞培養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到細胞後前 3 天各拍幾(ji)張(zhang)細胞照片，記錄(lu)細胞狀態(tai)，便於(yu)和我司技(ji)術部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由(you)於(yu)運輸(shu)的原因(yin)，個(ge)別(bie)敏感(gan)細胞會出(chu)現不(bu)穩(wen)定的情況，請(qing)及(ji)時和我們聯系，告(gao)知細胞 的具(ju)體(ti)情(qing)況，以便(bian)我們的技術人(ren)員跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直至(zhi)問題解(jie)決。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供科研使(shi)用。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用的培養(yang)基 (灌液培養(yang)基) 不(bu)能再用來培(pei)養(yang)細胞，請換用按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)細胞培 養(yang)條件新配(pei)制的培養(yang)基來培養(yang)細胞。     收到細胞後第壹次傳代建議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿(min)。

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的產品：

NeuroD1： 神經(jing)細胞分化(hua)因(yin)子(zi)1抗(kang)體 RELT Others Human 人(ren) RELT / TNFRSF19L 人細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照)

非洲(zhou)綠(lv)猴腎細胞系/HCV-NS5B;Vero-HCV-NS5B 大鼠(shu)尿苷(gan)二(er)0酸葡萄糖(tang)酸轉(zhuan)移酶(mei)2(UGT2)ELISA試劑(ji)盒(he) E(Mouse estrogen)  小鼠雌激素 96T

NFAT2： 活化(hua)T細胞核因(yin)子(zi)1蛋白抗體 敘(xu)利(li)亞(ya)倉鼠(shu)腎細胞;BHK-21

人毛發(fa)基(ji)質細胞(HHZMC)( 5×105 ) mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞 Mouse 大鼠尿(niao)苷二(er)0酸葡萄糖(tang)酸轉(zhuan)移酶(mei)2(UGT2) ELISA試劑(ji)盒(he) Ang- I  大(da)鼠(shu)血管緊張(zhang)素Ⅰ 96T

NMDAR1： 谷(gu)酸(suan)受體(ti)1抗體(ti) 小鼠骨(gu)髓(sui)瘤細胞;P3/NSI/1-Ag4-1

KDM1： 組(zu)蛋白賴酸特異(yi)性(xing)脫甲基酶(mei)1抗(kang)體(ti) C2C12, 小鼠肌(ji)原(yuan)細胞

EFNB1 Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽(qian)) 牛(niu)檢(jian)測(e)ELISA 試劑(ji)盒(he) Agrin peptide 聚集(ji)蛋白抗原 0.5mg

KIF11： 驅動(dong)蛋白樣蛋白1抗體 ENPEP Others Rat 大鼠(shu) ENPEP / Aminopeptidase A (aa 41-945) 桿(gan)狀(zhuang)病毒(du)-昆蟲細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照)

人腦(nao)動(dong)脈血管內皮細胞培養(yang)基 100mL 牛呼腸孤(gu)病毒(du)B-19株(RV-B19)ELISA試劑(ji)盒(he) ATP citrate lyase/ACLY 三(san)0酸(suan)腺(xian)檸(ning)檬酸(suan)裂解(jie)酶 0.5mg

KMT3B： 組(zu)蛋白甲基化(hua)KMT3B抗體(ti) RSC, 大(da)鼠(shu)雪旺(wang)細胞 NCYC 234[IPAZSC 148]細胞 COS-7(SV40 轉化(hua)的非洲(zhou)綠(lv)猴腎細胞)

3D4/21豬肺泡(pao)巨噬(shi)細胞Semaphorin 3D： 跨膜蛋白SEMA3D抗體 牛腎細胞;MDBK(NBL-1)

CM-R059大鼠(shu)膀胱(guang)平滑(hua)肌(ji)細胞培養(yang)基100mL 大鼠S100鈣結(jie)合(he)蛋白A8(S100A8)ELISA試劑(ji)盒(he) NHE3(Human Na+/H+ exchanger 3)  人(ren)Na+/H+交(jiao)換體3 96T

Septin 11： 細胞分化(hua)蛋白SEPT11抗體 HA Others H5N1 甲型流感(gan) H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照)

大鼠(shu)少突膠(jiao)質前體細胞ROPC 大鼠S100鈣(gai)結合(he)蛋白A6(S100A6)ELISA試劑(ji)盒(he) OFQ/N(Human orphanin FQ/nociceptin)  人(ren)孤(gu)腓肽 96T

Six3： 晶(jing)狀體(ti)發育(yu)相(xiang)關蛋白Six3抗體 AGS(人胃(wei)腺(xian)癌(ai)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2