夾心(xin)ELISA測(ce)定兩層抗(kang)體(ti)（捕獲抗(kang)體(ti)和檢(jian)測(ce)抗(kang)體(ti)）之間(jian)的抗(kang)原(yuan)。目(mu)標抗原(yuan)必(bi)須包含至(zhi)少(shao)兩個能(neng)夠(gou)結合到(dao)抗(kang)體(ti)的抗(kang)原(yuan)表(biao)位。單(dan)克(ke)隆(long)或多克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)均可在(zai)夾(jia)心(xin) ELISA 系(xi)統(tong)中(zhong)用作捕獲抗(kang)體(ti)和檢(jian)測(ce)抗(kang)體(ti)。單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)識別(bie)單(dan)壹(yi)表(biao)位，可對抗原(yuan)中微小(xiao)差(cha)別(bie)進(jin)行(xing)定量檢測(ce)。多克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)通常用作(zuo)捕獲抗(kang)體(ti)以(yi)沈(chen)降盡可能(neng)多的抗(kang)原(yuan)。

    夾心(xin) ELISA 省(sheng)去(qu)了(le)分析(xi)之前的樣(yang)品(pin)純化步驟(zhou)，而且提高(gao)了(le)分析(xi)靈(ling)敏度(du)（靈敏(min)度(du)比直(zhi)接(jie)或間接(jie) ELISA 高(gao) 2-5 倍）。

 夾心(xin) ELISA 程(cheng)序可能(neng)難(nan)以(yi)優(you)化(hua)，應使(shi)用(yong)已測(ce)試(shi)的匹(pi)配抗(kang)體(ti)對。這樣(yang)可確(que)保(bao)抗(kang)體(ti)檢測(ce)靶(ba)蛋(dan)白(bai)上(shang)的不(bu)同(tong)表(biao)位，而(er)不(bu)會(hui)幹擾其它(ta)抗體(ti)結合。我(wo)們(men)不能(neng)保證(zheng)我(wo)們(men)的抗(kang)體(ti)可用(yong)於(yu)夾(jia)心(xin) ELISA，除(chu)非它(ta)們(men)已經過專門(men)的測(ce)試(shi)。

雙抗體(ti)夾心(xin)法(fa)是檢(jian)測(ce)抗(kang)原常用的方(fang)法，操(cao)作過(guo)程(cheng)如(ru)下： 

1、將(jiang)特異(yi)性抗體(ti)與(yu)固相載體(ti)連接(jie)，形成固相(xiang)抗(kang)體(ti)：洗滌(di)除(chu)去(qu)未結合的抗(kang)體(ti)及雜(za)質(zhi)。

2、加受(shou)檢(jian)標本：使之與(yu)固相抗體(ti)接(jie)觸反應壹(yi)段(duan)時(shi)間，讓(rang)標本中的抗(kang)原(yuan)與(yu)固相載體(ti)上(shang)的抗(kang)體(ti)結合，形成固相(xiang)抗(kang)原(yuan)復合物(wu)。洗滌(di)除(chu)去(qu)其他(ta)未結合的物(wu)質(zhi)。

3、加酶(mei)標抗體(ti)：使固(gu)相(xiang)免(mian)疫(yi)復合物(wu)上(shang)的抗(kang)原(yuan)與(yu)酶標抗體(ti)結合。*洗滌(di)未(wei)結合的酶(mei)標抗體(ti)。此(ci)時固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)上(shang)帶(dai)有(you)的酶(mei)量與(yu)標本中受(shou)檢(jian)物(wu)質(zhi)的量正相(xiang)關。

4、加底(di)物(wu)：夾心(xin)式復合物(wu)中的酶(mei)催化底物(wu)成為(wei)有(you)色(se)產(chan)物(wu)。根據顏(yan)色(se)反應的程(cheng)度(du)進(jin)行(xing)該抗原(yuan)的定性或定量。

根據(ju)同(tong)樣(yang)原(yuan)理(li)，將(jiang)大(da)分子(zi)抗原(yuan)分別(bie)制備固相抗(kang)原和(he)酶標抗原(yuan)結合物(wu)，即可用(yong)雙抗原夾心(xin)法(fa)測定標本中的抗(kang)體(ti)。