在做(zuo)ELISA實驗(yan)的(de)時(shi)候,所(suo)采(cai)集(ji)的(de)標(biao)本(ben)大(da)多都(dou)需(xu)要溶解稀(xi)釋後(hou)才能(neng)用來(lai)做(zuo)實驗(yan)。有(you)的(de)ELISA試劑盒裏(li)說明書上有(you)寫(xie)標(biao)本(ben)的(de)溶解及稀(xi)釋比(bi)例,這(zhe)樣您(nin)就(jiu)可以直(zhi)接(jie)通(tong)過(guo)比(bi)例進(jin)行稀(xi)釋,但是有的(de)說明(ming)書上並(bing)沒(mei)有寫(xie)稀(xi)釋比(bi)例,那(na)樣您(nin)就(jiu)只有自(zi)己(ji)去(qu)摸(mo)索(suo)找尋(xun)較(jiao)為(wei)合(he)適(shi)的(de)溶解及稀(xi)釋比(bi)例!
壹(yi)、ELISA試劑盒溶解
(1)粉(fen)末規範(fan)品時(shi)間短離(li)心(xin),讓(rang)因(yin)運送沾到管蓋、管(guan)壁的(de)規範(fan)品沈(chen)到(dao)管底。
(2)依據(ju)瓶標(biao)簽參(can)加必定(ding)體積(ji)的(de)蒸餾(liu)水,加水後(hou)輕(qing)柔(rou)渦旋(xuan)震動,室(shi)溫(wen)靜置(zhi)溶解10-30分鐘(zhong),讓(rang)粉(fen)末*溶解。
留(liu)意(yi):加水後(hou)暫(zan)不必(bi)移液(ye)槍吹(chui)吸,防(fang)止蛋白(bai)未溶解,槍(qiang)頭帶(dai)出(chu)部(bu)分蛋白(bai),待(dai)*溶解後(hou)可吹吸或(huo)渦旋(xuan)振動(dong)混勻。
二(er)、ELISA試劑盒規範(fan)品梯度稀(xi)釋:
(1)耗(hao)材(cai)預(yu)備(bei):預(yu)備(bei)8個(ge)1.5Ml離(li)心(xin)管,寫(xie)上S1-S7、空白(bai)。
(2)規範(fan)品稀(xi)釋液(ye)的(de)挑選(xuan):若(ruo)血(xue)清、血漿(jiang)、安(an)排(pai)勻漿(jiang)樣本(ben),用(yong)試劑盒中(zhong)的(de)規範(fan)品稀(xi)釋液(ye),梯度稀(xi)釋規範(fan)品。若(ruo)細(xi)胞上清樣本(ben),主張用細(xi)胞培養(yang)基(ji)梯度稀(xi)釋規範(fan)品。
(3)梯度稀(xi)釋:依據(ju)說明書,每(mei)管(guan)參加等(deng)體積(ji)的(de)規範(fan)品稀(xi)釋液(ye)(培養(yang)基(ji))。汲(ji)取(qu)同(tong)體積(ji)溶解好的(de)規範(fan)品到(dao)S1管中(zhong),吹打(da)10次(ci)混勻,渦旋(xuan)5S。從S1管(guan)中(zhong)汲(ji)取(qu)同(tong)體積(ji)溶液(ye)到S2管(guan),吹打(da)10次(ci)混勻,渦旋(xuan)5s。同(tong)法(fa)稀(xi)釋S3-S7濃(nong)度(du)。
(4)空白(bai): ELISA試(shi)劑盒規範(fan)品稀(xi)釋液(ye)(培養(yang)基(ji))作(zuo)為(wei)空白(bai)即(ji)零(ling)濃度(du)。
留(liu)意(yi):梯度稀(xi)釋規範(fan)品時(shi),渦旋(xuan)震動混勻後(hou)可時(shi)間短離(li)心(xin),讓(rang)到(dao)蓋子、壁上的(de)液(ye)體到(dao)管底,再(zai)開(kai)始(shi)稀(xi)釋下(xia)個(ge)濃(nong)度。規範(fan)品溶解、梯度稀(xi)釋是ELISA試驗要害點(dian),按(an)以上辦(ban)法梯度稀(xi)釋就(jiu)可!