酶(mei)聯(lian)免(mian)疫吸附(fu)實(shi)驗（Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）是壹種廣泛(fan)應用(yong)於分子(zi)生(sheng)物學(xue)和(he)醫學(xue)領(ling)域的(de)檢測(ce)技(ji)術，常用(yong)於檢測(ce)蛋白質(zhi)或抗(kang)原(yuan)。酶(mei)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)就是壹種用(yong)於進(jin)行ELISA實驗的試(shi)劑盒(he)，包含了(le)所(suo)有(you)必(bi)要(yao)的(de)試劑和(he)材(cai)料(liao)以(yi)及(ji)詳(xiang)細(xi)的操作說(shuo)明書。
酶(mei)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)通常由固(gu)相(xiang)酶(mei)標(biao)板、酶(mei)標(biao)記(ji)抗(kang)體、基質(zhi)、加樣(yang)器、緩(huan)沖(chong)液(ye)等多(duo)種試(shi)劑組成。其(qi)中(zhong)，固(gu)相(xiang)酶(mei)標(biao)板表面(mian)被修(xiu)飾上(shang)特定(ding)的抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體，並在(zai)檢測(ce)過(guo)程中(zhong)將與待(dai)檢測(ce)物質(zhi)結合。酶(mei)標(biao)記(ji)抗(kang)體則(ze)是(shi)用(yong)於檢測(ce)固(gu)相(xiang)酶(mei)標(biao)板上(shang)結(jie)合的(de)待檢測(ce)物質(zhi)，其(qi)通過(guo)與特定(ding)的抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體結(jie)合來產生(sheng)色(se)素反應，從(cong)而顯示出待檢測(ce)物質(zhi)的存在量(liang)。
1、準(zhun)備工作：閱(yue)讀試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)說(shuo)明書，熟悉試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)組(zu)成、使(shi)用(yong)方(fang)法和(he)操作步(bu)驟。確保(bao)所(suo)有(you)所(suo)需(xu)的(de)試(shi)劑和(he)材(cai)料(liao)已準(zhun)備好，並按照(zhao)說明書的要(yao)求(qiu)進(jin)行預處(chu)理。
2、樣(yang)品(pin)處(chu)理：根(gen)據試(shi)劑盒(he)的(de)要(yao)求(qiu)，準(zhun)備樣(yang)品(pin)並進(jin)行必要(yao)的(de)處理。可能(neng)需(xu)要(yao)稀(xi)釋(shi)樣(yang)品(pin)以(yi)確保(bao)濃(nong)度(du)在(zai)試(shi)劑盒(he)的(de)檢測(ce)範(fan)圍內(nei)。對於某些(xie)試(shi)劑盒(he)，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)對樣(yang)品(pin)進(jin)行特殊的處(chu)理，如去除(chu)紅細(xi)胞或細胞(bao)碎片(pian)。
3、塗(tu)板塗(tu)覆(fu)：將塗(tu)板按照(zhao)試劑(ji)盒(he)的(de)要(yao)求(qiu)進(jin)行塗(tu)覆(fu)。通常，塗(tu)覆(fu)液(ye)中(zhong)含有(you)特定(ding)的抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體，用(yong)於捕(bu)獲待測(ce)分子(zi)。確保(bao)塗(tu)覆(fu)液(ye)均勻(yun)地覆蓋塗(tu)板孔(kong)，並避(bi)免(mian)氣(qi)泡的產生(sheng)。
4、樣(yang)品(pin)孔(kong)加樣(yang)：將處理好的(de)樣(yang)品(pin)加入塗(tu)板的(de)相(xiang)應孔(kong)中(zhong)。根(gen)據試(shi)劑盒(he)的(de)要(yao)求(qiu)，加入適當的體積，並確保(bao)將樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)分配(pei)到(dao)每個(ge)孔(kong)中(zhong)。同(tong)時(shi)，包括陰(yin)性對照(zhao)和(he)陽(yang)性對照(zhao)樣(yang)品(pin)，以(yi)便(bian)進(jin)行結果的解(jie)讀和(he)比(bi)較(jiao)。
5、反應和(he)洗(xi)滌：根(gen)據試(shi)劑盒(he)的(de)要(yao)求(qiu)，將試劑(ji)加入塗(tu)板的(de)每個(ge)孔(kong)中(zhong)，使(shi)待測分子(zi)與試劑(ji)發(fa)生(sheng)特異(yi)性的(de)反(fan)應。完成反(fan)應後，進(jin)行洗滌步驟以(yi)去除(chu)未結(jie)合的(de)物質(zhi)，通常使(shi)用(yong)洗滌緩(huan)沖(chong)液(ye)進(jin)行多(duo)次洗(xi)滌。
6、酶(mei)標(biao)記(ji)物添(tian)加：加入酶(mei)標(biao)記(ji)物（如酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)二(er)抗(kang)或底(di)物）到(dao)每個(ge)孔(kong)中(zhong)，使(shi)其(qi)與(yu)已捕(bu)獲的待(dai)測(ce)分子(zi)發(fa)生(sheng)反(fan)應。確保(bao)酶(mei)標(biao)記(ji)物均(jun)勻(yun)地(di)分配(pei)到(dao)每個(ge)孔(kong)中(zhong)，並根(gen)據試(shi)劑盒(he)的(de)要(yao)求(qiu)進(jin)行適當的孵育時(shi)間(jian)和(he)溫(wen)度。
7、反應停止：加入反應停止溶(rong)液(ye)，停止酶(mei)標(biao)記(ji)物的(de)反(fan)應。通常，反應停止溶(rong)液(ye)改變(bian)溶(rong)液(ye)的pH值(zhi)，使(shi)酶(mei)標(biao)記(ji)物的(de)反(fan)應停止並保(bao)持測(ce)量信號(hao)的穩(wen)定。
8、信號(hao)測量(liang)：使(shi)用(yong)酶(mei)標(biao)儀(yi)或讀板器測量每個(ge)孔(kong)中(zhong)的(de)光(guang)密度或熒(ying)光(guang)強度。根(gen)據試(shi)劑盒(he)的(de)要(yao)求(qiu)，選(xuan)擇適當的波長和(he)測(ce)量模(mo)式(shi)，並記(ji)錄測量結果。
