A2780+GFP人卵巢癌(ai)細(xi)胞+GFP

公司(si)產品(pin)僅供(gong)科研研究使(shi)用、不得(de)用(yong)於(yu)臨床診(zhen)斷！

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微鏡下觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止消化(hua)，再(zai)輕輕吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫落(luo)，然後將懸液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然後按 1:2 比例進行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後放入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微鏡下觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止消化(hua)，輕輕吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫落(luo)，然後將懸液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量的(de)凍(dong)存(cun)液（

FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放置於(yu)凍(dong)存(cun)管中；

4）先將細(xi)胞凍(dong)存(cun)管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後將其移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉入液氮中進行長期保(bao)存(cun)。使(shi)用程序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒(he)可直(zhi)接(jie)放入(ru)-80℃。

3、細(xi)胞復蘇：

1）從(cong)液氮中取出(chu)細(xi)胞凍(dong)存(cun)管（註意(yi)：佩(pei)戴防(fang)爆管面(mian)具(ju)），快速將其置入 37℃水浴(yu)中解(jie)凍(dong)，直(zhi)至(zhi)凍(dong)存(cun)管中無結(jie)

晶(jing)，然後用 75%的(de)酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)凍(dong)存(cun)管外(wai)壁；

2）將凍(dong)存(cun)管中的(de)細(xi)胞移至(zhi)含(han) 6ml 培(pei)養(yang)基的(de) 15ml 離(li)心(xin)管中， 1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)用 6ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，接(jie)種(zhong) 25cm2培(pei)養(yang)瓶，於(yu) 37℃，5%CO2細(xi)胞培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

收到細(xi)胞後如何(he)操作(zuo):

1、首(shou)先，觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)。若有，請及(ji)時與我司(si)技術(shu)支(zhi)持聯系。

2、用(yong)75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡下觀察細(xi)胞狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸問(wen)題，部分(fen)貼(tie)壁細(xi)胞會有(you)少量從(cong)瓶壁脫落(luo)，將細(xi)胞置於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)箱內靜置培(pei)養(yang)，隔天(tian)再取出進行觀(guan)察(cha)。

3、仔細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞說(shuo)明(ming)書，了解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息，如細(xi)胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu)細(xi)胞因(yin)子等(deng)。

4、可將培(pei)養(yang)瓶內多余的(de)培(pei)養(yang)基轉(zhuan)移至(zhi)50ml無(wu)菌離心(xin)管中，備用；細(xi)胞傳(chuan)代時，可(ke)以(yi)將該培(pei)養(yang)基按(an)照壹定(ding)比例(li)和(he)客戶自(zi)備的(de)培(pei)養(yang)基混合(he)使(shi)用，讓細(xi)胞逐漸(jian)適應培(pei)養(yang)條件。

5、確(que)認細(xi)胞狀(zhuang)態良(liang)好(hao)後，應及時將細(xi)胞凍(dong)存(cun)，再進行後續的(de)實(shi)驗，避(bi)免(mian)後期實驗失(shi)誤可(ke)能(neng)發生細(xi)胞汙染或(huo)死(si)亡而導(dao)致(zhi)的(de)細(xi)胞丟(diu)失(shi)。

6、建(jian)議客戶收(shou)到(dao)細(xi)胞後前(qian)3天(tian)，100X、200X、400X各(ge)拍3-5張(zhang)細(xi)胞照片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和(he)我們(men)技術(shu)支(zhi)持溝通交(jiao)流。

細(xi)胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理僅供(gong)參考(kao)，具(ju)體(ti)操作(zuo)步驟以(yi)隨貨產品說(shuo)明(ming)書為主。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹(chui)勻。然後將所有(you)細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)含(han)適量培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜（或(huo)將細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜）。第(di)二天(tian)換液並檢查細(xi)胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如果(guo)細(xi)胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

    a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上清，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離子(zi)的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。        

    b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消化(hua)液浸潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況(kuang)而定(ding)），然後在顯(xian)微鏡下觀察細(xi)胞消化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞大(da)部分(fen)變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止消化(hua)。輕輕打勻後裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻。        

     c、將細(xi)胞懸(xuan)液按1:2比例分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中或(huo)者瓶(ping)中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞生(sheng)長狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時，可(ke)進行細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養(yang)液，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，用PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行細(xi)胞計數。

     b、根據細(xi)胞數量加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管做好(hao)標識。將凍(dong)存(cun)管放入-80℃冰箱，24 h後轉入液氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管位(wei)置以(yi)便(bian)下次拿(na)取(qu)。  

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事項 

1. 收到細(xi)胞後首(shou)先觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若有上述現象 發生(sheng)請及(ji)時和(he)我們(men)聯系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞說(shuo)明(ming)書，了解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息，如細(xi)胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因(yin)子等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞培(pei)養(yang)條件壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條件不壹致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞出(chu)現問(wen)題，責任(ren)由(you) 客戶自(zi)行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡下觀察細(xi)胞狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸問(wen)題，部分(fen)細(xi)胞由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變化(hua)及劇(ju)烈碰亡破(po)碎形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀察好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精消毒瓶壁將 T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可(ke)以(yi)消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接(jie)混勻收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並(bing)接種(zhong)到新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中進行培(pei)養(yang)。

5. 請客戶用(yong)相(xiang)同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基用(yong)於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客戶收(shou)到(dao)細(xi)胞後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和(he)我司(si)技術(shu)部溝通 交(jiao)流。由(you)於(yu)運(yun)輸的(de)原(yuan)因(yin)，個別敏感細(xi)胞會出(chu)現不穩定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請及(ji)時和(he)我們(men)聯系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我們的(de)技術(shu)人員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供(gong)科研使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸用(yong)的(de)培(pei)養(yang)基 (灌液培(pei)養(yang)基) 不(bu)能(neng)再用來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞，請換用按(an)照說(shuo)明(ming)書細(xi)胞培(pei) 養(yang)條件新(xin)配(pei)制的(de)培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞。     收(shou)到細(xi)胞後第(di)壹次(ci)傳(chuan)代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司(si)正(zheng)在出售的(de)產(chan)品：

LRRFIP1： 巨噬(shi)細(xi)胞調(tiao)控(kong)相(xiang)關(guan)蛋(dan)白(bai)LRRFIP1抗(kang)體 MAPKAPK5 Others Human 人 MAPKAPK5 桿狀(zhuang)病毒-昆(kun)蟲細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照)

大(da)鼠(shu)小(xiao)腸隱(yin)窩上皮(pi)細(xi)胞培(pei)養(yang)基 100mL 大(da)鼠(shu)腫(zhong)瘤壞(huai)死(si)因(yin)子(zi)誘(you)導(dao)蛋(dan)白(bai)6(TSG-6)ELISA試劑(ji)盒(he) Rabbit IgM/Cy3 熒光素Cy3標記(ji)兔IgM 0.1ml

LH beta： 促黃(huang)體(ti)生(sheng)成(cheng)素抗(kang)體 KM3, 人多發性(xing)骨髓瘤細(xi)胞 肝癌細(xi)胞,HCC-9204細(xi)胞 NCI-H292(肺(fei)癌細(xi)胞(淋(lin)巴結(jie)轉(zhuan)移))

AGER Others Human 人 AGER / RAGE 人細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照) 大(da)鼠(shu)腫(zhong)瘤壞(huai)死(si)因(yin)子(zi)相(xiang)關(guan)弱(ruo)雕亡誘(you)導(dao)因(yin)子(zi)(TWEAK)ELISA試劑(ji)盒(he) Rat IgM/Cy3 熒光素Cy3標記(ji)大(da)鼠(shu)IgM 0.1ml

LIMS1： 整合(he)素(su)和(he)生長因子樣(yang)蛋(dan)白1抗(kang)體 敘(xu)利亞倉鼠(shu)肌(ji)肉細(xi)胞;GH-M1

GGT2 light chain： γ谷(gu)酰轉(zhuan)肽酶2輕鏈抗(kang)體 SEMA4D Others Cynomolgus 食(shi)蟹猴(hou) Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 人細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照)

肝動(dong)脈(mai)內(nei)皮(pi)細(xi)胞Many types of cells包裝：5 × 105次(ci)方(1ml) 人可替(ti)丁(Cotinine)ELISA試劑(ji)盒(he) Caspase-13 半胱胺酸蛋白(bai)酶蛋白-13(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

GGT5 light chain： γ-谷(gu)酰轉(zhuan)肽酶5輕鏈抗(kang)體 家(jia)貓肺(fei)細(xi)胞;FCA-L1 羊(yang)膜細(xi)胞，Ha Fe細(xi)胞 BaF3細(xi)胞，小(xiao)鼠(shu)原(yuan)B細(xi)胞株(zhu)

ACVR1 Others Cynomolgus 食蟹(xie)猴(hou) ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照) 人可提(ti)取核(he)抗(kang)原(yuan)(ENA)ELISA 試劑(ji)盒(he) CD19(B-lymphocyte antigen CD19) CD19 0.5mg

GGT7 light chain： γ-谷(gu)酰轉(zhuan)肽酶7輕鏈抗(kang)體 原(yuan)代(dai)神經(jing)元細(xi)胞特(te)制基礎無血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)基Many types of cells包裝：500/100ml

A2780+GFP人卵巢癌(ai)細(xi)胞+GFPPBX3： B淋(lin)巴細(xi)胞白(bai)血(xue)病前(qian)體蛋白轉錄(lu)因子3抗(kang)體 貓(mao)腎(shen)細(xi)胞;F81

人羊(yang)膜上(shang)皮(pi)細(xi)胞(HAEpic)( 5×105 ) C2C12, 小(xiao)鼠(shu)肌(ji)原(yuan)細(xi)胞 Mouse 大(da)鼠(shu)金屬硫(liu)蛋白(bai)2(MT-2)ELISA試劑(ji)盒(he) AFA/snoRNP/U3RNP(Human anti-fibrillarin antibody)  人抗(kang)核(he)仁纖(xian)維蛋白抗(kang)體 人前(qian)脂肪(fang)細(xi)胞-皮(pi)下總(zong)RNAHPA-s NA

TNFSF8 Protein Rat 重(zhong)組大(da)鼠(shu) CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋(dan)白 (Fc 標簽(qian)) 大(da)鼠(shu)金屬硫(liu)蛋白(bai)1(MT1)ELISA試劑(ji)盒(he) 15-LO/LOX(Mouse 15-lipoxygenase)  小(xiao)鼠(shu)15脂加(jia)氧(yang)酶 96T

P4HB： 蛋白(bai)二(er)硫(liu)鍵異構酶P4HB抗(kang)體 METAP1D Others Human 人 MAP1D / Methionine Aminopeptidase 1D 桿狀(zhuang)病毒-昆(kun)蟲細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照)

EC9706 食管癌 大(da)鼠(shu)金屬硫(liu)蛋白(bai)(MT)ELISA試劑(ji)盒(he) HA  大(da)鼠(shu)透明(ming)質酸 96T