ELISA酶(mei)聯免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)實(shi)驗(yan)原理(li)：免(mian)疫(yi)分(fen)析是(shi)壹種利用特(te)定(ding)抗(kang)體與抗(kang)原或(huo)半抗(kang)原發(fa)生的高選(xuan)擇性(xing)高特(te)異(yi)性(xing)識別和結(jie)合原理(li)，對待(dai)測抗(kang)體或者(zhe)抗(kang)原進行(xing)分(fen)析測定(ding)的方法(fa)，酶(mei)聯免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)分(fen)析(下(xia)稱ELISA)是免(mian)疫(yi)分(fen)析的壹(yi)種(zhong)，分(fen)三個(ge)部分(fen)組成(cheng)：免(mian)疫(yi)識別，信號輸出(chu)和數(shu)據(ju)處理(li)。
 

　　包(bao)被的方式:
 

　　將(jiang)抗(kang)原或(huo)抗(kang)體固定(ding)在過(guo)程(cheng)稱(cheng)為包(bao)被(coating)。換(huan)言之(zhi)，包(bao)被即是(shi)抗(kang)原或(huo)抗(kang)體結(jie)合到固(gu)相(xiang)載體(ti)表面(mian)的過(guo)程(cheng)。蛋(dan)白質(zhi)與(yu)(C8H8)n固(gu)相(xiang)載體(ti)是通過(guo)物(wu)理(li)吸(xi)附(fu)結(jie)合 的，靠(kao)的是(shi)蛋(dan)白質(zhi)分(fen)子結(jie)構(gou)上的疏(shu)水基(ji)團(tuan)與固(gu)相載體(ti)表面(mian)的疏(shu)水基(ji)團(tuan)間的作(zuo)用力。這(zhe)種物(wu)理(li)吸(xi)附(fu)是(shi)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)的，受(shou)蛋(dan)白質(zhi)的分(fen)子量(liang)、等電點(dian)、濃(nong)度等的影(ying)響(xiang)。載體(ti)對 不(bu)同蛋(dan)白質(zhi)的吸(xi)附(fu)能(neng)力是不(bu)相同(tong)的，大(da)分(fen)子蛋(dan)白質(zhi)較(jiao)小分(fen)子蛋(dan)白質(zhi)通常(chang)含(han)有(you)更多的疏(shu)水基(ji)團(tuan)，故(gu)更易吸(xi)附(fu)到固(gu)相(xiang)載體(ti)表面(mian)。IgG對聚(ju)苯C2H4等固相(xiang)具(ju)有(you)較(jiao)強的吸(xi)附(fu) 力，其聯結(jie)多發(fa)生在Fc段上，抗(kang)體結(jie)合點(dian)暴露(lu)於外(wai)，因(yin)此(ci)抗(kang)體的包(bao)被壹般(ban)均(jun)采用(yong)直接(jie)吸(xi)附(fu)法(fa)。蛋(dan)白質(zhi)抗(kang)原大(da)多也(ye)可(ke)采用(yong)與抗(kang)體相似(si)的方法(fa)包(bao)被。當抗(kang)原決定簇存在 於或(huo)鄰(lin)近於疏(shu)水區(qu)域(yu)時(shi)，抗(kang)原與(yu)固相(xiang)載體(ti)的直(zhi)接(jie)吸(xi)附(fu)可(ke)使抗(kang)原決定簇不(bu)能充(chong)分(fen)暴露(lu)，在這(zhe)種情況下(xia)，直接(jie)包(bao)被效(xiao)果(guo)不(bu)佳(jia)，可(ke)以采(cai)用間(jian)接(jie)的捕(bu)獲(huo)包(bao)被法(fa)，即先將(jiang)針(zhen)對該 抗(kang)原的特(te)異(yi)抗(kang)體作(zuo)預包(bao)被，其後(hou)通過(guo)抗(kang)原抗(kang)體反(fan)應(ying)使抗(kang)原固(gu)相化。此間接(jie)結(jie)合在(zai)固相上的抗(kang)原遠離載體(ti)表面(mian)，其抗(kang)原決定簇也(ye)得(de)以充(chong)分(fen)暴露(lu)。間接(jie)包(bao)被的抗(kang)原經(jing)固相(xiang) 抗(kang)體的親和(he)層析(xi)作(zuo)用，包(bao)被在固(gu)相上的抗(kang)原純(chun)度大(da)大(da)提(ti)高，因(yin)此(ci)含(han)雜質(zhi)較(jiao)多(duo)的抗(kang)原也(ye)可(ke)采用(yong)捕(bu)獲(huo)包(bao)被法(fa)，試(shi)驗的特(te)異(yi)性(xing)、敏感(gan)性(xing)均(jun)由(you)此(ci)得(de)以改(gai)善，重(zhong)復性(xing)亦佳(jia)。間(jian)接(jie) 包(bao)被的另(ling)壹(yi)優(you)點是抗(kang)原用(yong)量(liang)少(shao)，僅為直接(jie)包(bao)被的1/10乃至於/100。不(bu)易吸(xi)附(fu)在(zai)(C8H8)n載體(ti)上的非(fei)蛋(dan)白質(zhi)抗(kang)原可(ke)采用(yong)特(te)殊(shu)的包(bao)被方式。例(li)如，在檢測抗(kang) DNA抗(kang)體時(shi)，需用DNA作(zuo)為包(bao)被抗(kang)原，而(er)普遍(bian)的固(gu)相(xiang)載體(ti)壹般(ban)不(bu)能直(zhi)接(jie)與(yu)核(he)酸(suan)結(jie)合。可(ke)將(jiang)(C8H8)n板(ban)先經(jing)紫(zi)外線照射(she)(例(li)如30W紫(zi)外燈(deng)，75cm照射(she)12小 時(shi))，以增加其(qi)吸(xi)附(fu)性(xing)能(neng)。固(gu)相載體(ti)先用堿性(xing)蛋(dan)白質(zhi)，如聚(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)作(zuo)預包(bao)被，也可(ke)提(ti)高核(he)酸(suan)的結(jie)合力。也可(ke)用親和(he)素生物su系(xi)統(tong)作(zuo)間接(jie)包(bao)被，即用(yong)親和(he)素先包(bao)被載體(ti)，然後加入(ru)生物su化的DNA，這(zhe)種包(bao)被方法(fa)均(jun)勻、牢固，已擴(kuo)大(da)應(ying)用(yong)於各(ge)種(zhong)抗(kang)原物(wu)質(zhi)的定(ding)量(liang)測定(ding)。
 

　　脂類物(wu)質(zhi)無(wu)法(fa)與(yu)固相載體(ti)結(jie)合，可(ke)將(jiang)其(qi)在有(you)機溶劑(ji)(例(li)如乙醇(chun))中(zhong)溶(rong)解(jie)後(hou)加入(ru)ELISA板(ban)孔中(zhong)，開(kai)蓋置冰箱過(guo)夜(ye)或(huo)冷風(feng)吹幹，待酒精(jing)揮(hui)發(fa)後(hou)，讓脂質(zhi)自(zi)然幹固在固(gu)相(xiang)表(biao)面(mian)。抗(kang)心磷脂抗(kang)體的ELISA試(shi)劑(ji)壹般(ban)采(cai)用(yong)這(zhe)種包(bao)被方式。