1.標(biao)準(zhun)品的(de)稀(xi)釋與加(jia)樣：在(zai)酶標包被(bei)板(ban)上(shang)設標準品(pin)孔(kong)10孔，在(zai)*、第(di)二孔中(zhong)分別(bie)加(jia)標準品100μl，然後(hou)在(zai)壹(yi)、二孔中(zhong)加標準(zhun)品稀(xi)釋液50μl，混(hun)勻；然後從(cong)壹(yi)孔、二孔中(zhong)各取100μl分別(bie)加(jia)到第(di)三(san)孔和(he)第(di)四孔，再在(zai)第(di)三(san)、第(di)四孔分別(bie)加(jia)標準品稀(xi)釋液50μl，混(hun)勻；然後在(zai)第(di)三(san)孔和(he)第(di)四孔中先各取50μl棄掉(diao)，再各(ge)取50μl分別(bie)加(jia)到第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔中(zhong)，再(zai)在(zai)第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔中(zhong)分別(bie)加(jia)標準品稀(xi)釋液50ul，混(hun)勻；混勻後從第(di)五(wu)、第(di)六(liu)孔中(zhong)各(ge)取50μl分別(bie)加(jia)到第(di)七(qi)、第(di)八(ba)孔中，再(zai)在(zai)第(di)七(qi)、第(di)八(ba)孔中分別(bie)加(jia)標準品稀(xi)釋液50μl，混(hun)勻後從第(di)七(qi)、第(di)八(ba)孔中分別(bie)取50μl加到第(di)九(jiu)、第(di)十(shi)孔中，再(zai)在(zai)第(di)九(jiu)第(di)十(shi)孔分別(bie)加(jia)標準品稀(xi)釋液50μl，混(hun)勻後從第(di)九(jiu)第(di)十(shi)孔中各(ge)取50μl棄掉(diao)。（稀(xi)釋後各(ge)孔(kong)加(jia)樣量(liang)都(dou)為(wei)50μl，濃度分別(bie)為(wei)120U/L，80U/L，40U/L，20U/L，10U/L）。

    2.加樣：分別(bie)設(she)空(kong)白孔（空(kong)白對(dui)照孔(kong)不(bu)加樣品(pin)及(ji)酶標試劑(ji)，其余各步(bu)操(cao)作(zuo)相同）、待(dai)測樣品(pin)孔(kong)。在(zai)酶標包被(bei)板(ban)上(shang)待(dai)測樣品(pin)孔(kong)中先加樣品(pin)稀(xi)釋液40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加待(dai)測樣品(pin)10μl（樣品(pin)zui終(zhong)稀(xi)釋度為(wei)5倍(bei)）。加樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)於酶標板(ban)孔(kong)底部(bu)，盡(jin)量(liang)不(bu)觸(chu)及孔壁(bi)，輕(qing)輕晃(huang)動混(hun)勻。

    3.溫育：用封(feng)板(ban)膜封板(ban)後置37℃溫育30分鐘。

    4.配(pei)液(ye)：將(jiang)30（48T的(de)20倍）倍(bei)濃縮洗(xi)滌液(ye)用蒸餾水(shui)30（48T的(de)20倍）倍(bei)稀(xi)釋後備(bei)用(yong)。

    5.洗(xi)滌(di)：小心揭(jie)掉(diao)封板(ban)膜(mo)，棄去(qu)液體，甩幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌液，靜置30秒後(hou)棄去(qu)，如(ru)此(ci)重復(fu)5次(ci)，拍幹。

    6.加酶：每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)酶標試劑(ji)50μl，空(kong)白孔除外(wai)。

    7.溫育：操作(zuo)同3。

    8.洗(xi)滌：操(cao)作(zuo)同5。

    9.顯(xian)色：每(mei)孔(kong)先加入(ru)顯色劑A50μl，再(zai)加入(ru)顯色劑B50μl，輕(qing)輕震(zhen)蕩混(hun)勻，37℃避光顯(xian)色15分鐘.

    10.終(zhong)止(zhi)：每(mei)孔(kong)加(jia)終(zhong)止液50μl，終止反應(ying)（此(ci)時(shi)藍(lan)色立轉黃(huang)色）。

    11.測定：以空(kong)白空(kong)調零(ling)，450nm波(bo)長依(yi)序(xu)測(ce)量(liang)各(ge)孔(kong)的(de)吸(xi)光度（OD值(zhi)）。測(ce)定應(ying)在(zai)加終止(zhi)液後15分鐘以(yi)內(nei)進(jin)行。
 

    小鼠elisa試劑(ji)盒(he)使用(yong)建議(yi)：

    1． 試劑(ji)盒(he)從(cong)冷藏(zang)環(huan)境(jing)中取出應(ying)在(zai)室溫平(ping)衡15-30分鐘後(hou)方(fang)可使用(yong)，酶標包被(bei)板(ban)開(kai)封(feng)後如(ru)未(wei)用(yong)完，板條應(ying)裝(zhuang)入(ru)密封(feng)袋(dai)中保存(cun)。

    2． 濃洗(xi)滌(di)液可能(neng)會(hui)有(you)結(jie)晶析出，稀(xi)釋時可在(zai)水浴(yu)中加溫(wen)助溶，洗(xi)滌(di)時(shi)不(bu)影(ying)響(xiang)結(jie)果(guo)。

    3． 各步加樣均(jun)應(ying)使用(yong)加(jia)樣器(qi)，並經(jing)常(chang)校對(dui)其準(zhun)確(que)性(xing)，以(yi)避(bi)免(mian)試驗(yan)誤差(cha)。壹(yi)次(ci)加樣時(shi)間(jian)控制(zhi)在(zai)5分鐘內(nei)，如(ru)標(biao)本數(shu)量(liang)多(duo)，使用(yong)排槍加樣。

    4． 請(qing)每(mei)次(ci)測定的(de)同時(shi)做標(biao)準曲線(xian)，做復(fu)孔(kong)。如(ru)標(biao)本中(zhong)待(dai)測物質(zhi)含(han)量(liang)過(guo)高(gao)(樣本(ben)OD值(zhi)大於(yu)標準品孔*孔(kong)的(de)OD值)，請(qing)先用樣品(pin)稀(xi)釋液稀(xi)釋壹(yi)定倍數(shu)(n倍(bei))後(hou)再測定，計算(suan)時(shi)請(qing)zui後乘以總(zong)稀(xi)釋倍數(shu)(×n×5)。

    5． 封(feng)板(ban)膜只(zhi)限(xian)壹(yi)次(ci)性(xing)使用(yong)，以(yi)避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙染。

    6． 底物(wu)請(qing)避(bi)光(guang)保存(cun)。

    7． 嚴(yan)格按照說(shuo)明書的(de)操作(zuo)進(jin)行，試驗(yan)結(jie)果(guo)判定必須以酶標儀讀數為(wei)準.

    8． 所有(you)樣品(pin)，洗(xi)滌液(ye)和(he)各(ge)種(zhong)廢(fei)棄物(wu)都(dou)應(ying)按(an)傳(chuan)染物處(chu)理(li)。

    9． 本(ben)試劑(ji)不(bu)同批(pi)號(hao)組分不(bu)得混(hun)用(yong)。