防風(feng)探(tan)針法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒(he)保(bao)存(cun)

特(te)點：
1. 即開(kai)即(ji)用，用戶(hu)只(zhi)需(xu)要提(ti)供(gong)病(bing)毒樣(yang)品(pin)。
2. 根據(ju)地黃(huang)保(bao)守序列(lie)設(she)計(ji)的(de)專壹性(xing)引物(wu)，與相(xiang)關病(bing)毒無(wu)交叉(cha)反(fan)應(ying)。
3. 靈(ling)敏(min)度(du)可(ke)以(yi)達(da)到(dao)幾(ji)百(bai)拷(kao)貝(bei)/反(fan)應(ying)。
4. 壹管(guan)式(shi)熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR 檢測(ce)，避(bi)免(mian)後(hou)續汙染(ran)。
5. 本試(shi)劑盒(he)足夠(gou) 50 次 20μL 反(fan)應(ying)體系的(de)熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產(chan)品(pin)只(zhi)適(shi)用於科研，不(bu)能(neng)用於臨(lin)床診(zhen)斷。

使用方法：
壹、樣(yang)品(pin)采集：
1、食品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的(de)采集與預(yu)培(pei)養按(an)照樣品(pin)的(de)采集與預(yu)培(pei)養按(an)照《食品(pin)衛(wei)生(sheng)微生(sheng)物(wu)學檢驗(yan)阪(ban)崎腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢驗(yan)要求(qiu)進(jin)行(xing)。
2、血液樣品(pin)：用無(wu)菌註(zhu)射器(qi)抽(chou)取受檢者(zhe)靜脈(mai)血2mL，註入(ru)無(wu)菌EDTA2Na(或(huo)檸檬(meng)酸(suan)鈉)抗凝(ning)管(guan)，立(li)即混勻(yun)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：取(qu)糞(fen)便(bian)置(zhi)於(yu)滅(mie)菌(jun)的收(shou)集管(guan)中送(song)檢。
4、病(bing)竈(zao)部(bu)位樣(yang)品(pin)：取(qu)發(fa)病(bing)部(bu)位新(xin)鮮(xian)滲出物(wu)、粘液膿(nong)血(xue)送檢。
壹、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性(xing)對(dui)照（以 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個 10 倍(bei)稀釋度(du)為例(li)）
1. 註意：由於標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非(fei)常高(gao)，因此下(xia)列(lie)稀(xi)釋(shi)操作壹定(ding)要(yao)在(zai)獨(du)立(li)的區域進(jin)行(xing)，千萬(wan)不(bu)能(neng)汙(wu)染(ran)樣(yang)品(pin)或(huo)本試(shi)劑盒(he)的其他成(cheng)分）。為增加(jia)產(chan)品(pin)穩(wen)定(ding)性(xing)和避(bi)免(mian)擴散傳染性(xing)病(bing)原(yuan)，本產(chan)品(pin)不(bu)提(ti)供(gong)活(huo)體樣品(pin)做(zuo)陽(yang)性(xing)對(dui)照，只(zhi)提(ti)供(gong)可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)使用的 DNA段(duan)作為陽性(xing)對(dui)照。
2. 標記(ji) 6 個離(li)心(xin)管(guan)，分別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭(tou)分別(bie)加入(ru) 45 μL 熒(ying)光 PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋液（用帶芯槍頭(tou)，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照。放冰上待用。
5. 換槍頭(tou)，在(zai) 6 號管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(上步(bu)稀(xi)釋所得(de))，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照。放冰上待用。
6. 換槍頭(tou)，在(zai) 5 號管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照到 5 號管(guan)中，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照。放冰上待用。
7. 重復(fu)上(shang)面的操(cao)作直(zhi)到(dao)得(de)到(dao) 6 個稀(xi)釋(shi)度的陽(yang)性(xing)對(dui)照。放冰上待用。
註：上(shang)述樣品(pin)建(jian)議經過(guo)增菌(jun)後(hou)，收(shou)集培(pei)養物(wu)用於檢測(ce)。 
二、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采用PCR試劑盒(he)配備(bei)的DNA抽(chou)提(ti)液，按(an)以下(xia)說(shuo)明(ming)進(jin)行(xing)DNA核(he)酸(suan)的(de)粗(cu)提(ti)。也(ye)可(ke)采購(gou)上(shang)海(hai)澤葉生(sheng)物(wu)科技(ji)有限(xian)公(gong)司生(sheng)產(chan)的DNA提(ti)取(qu)試劑盒(he)(過(guo)柱法-熒(ying)光配(pei)套(tao))或(huo)其他合適(shi)的(de)商(shang)業化產(chan)品(pin)，並(bing)按(an)照相(xiang)應試劑盒(he)說明(ming)進(jin)行(xing)操作。
1、液體培(pei)養物(wu)：取液體培(pei)養物(wu)100μL加到(dao)1.5mL無(wu)菌離(li)心管(guan)中，8000rpm離心(xin)3min，盡量吸棄(qi)上清，加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
2、固體培(pei)養物(wu)：挑取(qu)單克(ke)隆菌(jun)落(luo)與50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取(qu)米(mi)粒(li)大(da)小糞(fen)便(bian)於(yu)滅(mie)菌(jun)離(li)心管(guan)中，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理鹽水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離心(xin)3分鐘(zhong)，棄(qi)上清，沈(chen)澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
4、其他液體標本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄(qi)上清，沈(chen)澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
註：陽(yang)性(xing)對(dui)照和陰(yin)性(xing)對(dui)照為已(yi)經抽(chou)提(ti)好(hao)的核(he)酸(suan)(無(wu)需提(ti)取(qu))，直(zhi)接(jie)取5μL加入(ru)到(dao)反(fan)應(ying)體系中即(ji)可(ke)。由(you)於(yu)陽(yang)性(xing)對(dui)照濃度(du)較(jiao)高，建(jian)議在(zai)樣(yang)品(pin)制備(bei)區域加入(ru)陽(yang)性(xing)對(dui)照。 
實驗(yan)流(liu)程(cheng)：
1. 整(zheng)個(ge)檢測(ce)過(guo)程(cheng)應(ying)嚴(yan)格按(an)照本說(shuo)明(ming)書要求(qiu)分別(bie)在(zai)試(shi)劑準(zhun)備(bei)區、樣本處(chu)理區和PCR擴增區進(jin)行(xing)操作，各(ge)區實驗(yan)服、儀(yi)器(qi) 、耗材(cai)應獨(du)立(li)使用，不(bu)能(neng)混(hun)用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本處(chu)理區應配(pei)有生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃，樣(yang)本處(chu)理在(zai)生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃中進(jin)行(xing)操作；三個(ge)區應該配有紫(zi)外(wai)線(xian)殺菌裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降解(jie)，樣本處(chu)理過(guo)程(cheng)應(ying)在(zai)0-4℃條件(jian)下(xia)操(cao)作，且完(wan)成(cheng)實驗(yan)後(hou)立(li)即(ji)上(shang)機檢測(ce)；樣(yang)本處(chu)理過(guo)程(cheng)中使(shi)用的器(qi)具(ju)耗(hao)材(cai)應經過(guo)無(wu)核(he)酶(mei)處(chu)理。
3. 每次實驗(yan)應該設(she)置(zhi)陰(yin)、陽(yang)性(xing)對(dui)照。
4. 試劑盒(he)所有(you)試劑在(zai)使(shi)用前應(ying)該在(zai)常(chang)溫(wen)下(xia)充(chong)分融(rong)化混勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬(shun)時離(li)心(xin)。
5. 試劑盒(he)內所(suo)配陰(yin)性(xing)和陽性(xing)對(dui)照在(zai)壹(yi)次使用前應(ying)全部(bu)轉(zhuan)移(yi)至(zhi)標本準(zhun)備(bei)區，並(bing)單獨(du)存(cun)放(fang)。
6. 為防止(zhi)熒(ying)光幹(gan)擾(rao)，應(ying)避(bi)免(mian)裸(luo)手(shou)直(zhi)接(jie)接觸PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避(bi)免(mian)在(zai)PCR反(fan)應(ying)管(guan)上(shang)進(jin)行(xing)任(ren)何(he)標(biao)記(ji)。
7. 儀(yi)器(qi) 擴增相(xiang)關參數應(ying)按(an)照本說(shuo)明(ming)書相(xiang)關要求(qiu)進(jin)行(xing)設(she)置(zhi)；不(bu)同(tong)批號(hao)試(shi)劑不(bu)能(neng)混(hun)用。
8. ABI系列(lie)熒(ying)光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)參數設(she)置(zhi)中不(bu)選(xuan)ROX校正(zheng)，淬滅基(ji)因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗(yan)過(guo)程(cheng)中產(chan)品(pin)的(de)廢(fei)棄(qi)物(wu)應該進(jin)行(xing)無(wu)害化處(chu)理後(hou)方(fang)可(ke)丟(diu)棄(qi)。
儲(chu)存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣品(pin)收(shou)集、處(chu)理及保(bao)存(cun)方(fang)法(fa)
1. 血清(qing)：使(shi)用不(bu)含熱(re)原(yuan)和內毒素(su)的(de)試(shi)管(guan)，操(cao)作過(guo)程(cheng)中避(bi)免(mian)任(ren)何(he)細(xi)胞(bao)刺(ci)激(ji)，收(shou)集血液後(hou)，3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分鐘(zhong)將(jiang)血清和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速(su)小心地分離(li)。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或(huo)肝(gan)素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)30 分鐘(zhong)取(qu)上清。
3. 細(xi)胞(bao)上清(qing)液：3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分鐘(zhong)去(qu)除顆粒和聚合物(wu)。
4. 組織勻(yun)漿(jiang)：將組織加入(ru)適量(liang)生(sheng)理鹽水(shui)搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分鐘(zhong)取(qu)上清。
5. 保(bao)存(cun)：如(ru)果樣本收(shou)集後(hou)不(bu)及時(shi)檢測(ce)，請按(an)壹次用量分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍並(bing)確(que)保(bao)樣品(pin)均(jun)勻(yun)地充(chong)分解(jie)凍。
成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基(ji) 100mL鄰苯二(er)甲(jia)腈(jing)(>99.0%(GC))Phthalonitrile質量(liang)規格(ge)：>99.0%(GC)

WB-F344細(xi)胞(bao)，大(da)鼠肝(gan)上(shang)皮(pi)樣幹(gan)細(xi)胞(bao) HL-60(白血(xue)病(bing)原(yuan)髓(sui)細(xi)胞(bao)) 大(da)鼠肝(gan)細(xi)胞(bao)瘤;H4-II-E-C34-丙(bing)氧(yang)基(ji)苯二(er)甲(jia)腈(jing)(>95.0%(GC))4-Propoxyphthalonitrile質量(liang)規格(ge)：>95.0%(GC)

EFNA1 Protein Rat 重組大(da)鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白(bai) (His 標簽)4-戊氧(yang)基(ji)苯二(er)甲(jia)腈(jing)(>98.0%(GC))4-Pentyloxyphthalonitrile質量(liang)規格(ge)：>98.0%(GC)

ZR-75-1(人癌(ai)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 C3H/An小鼠(shu)結(jie)締(di)組織細(xi)胞(bao)(L929-TK-);LTK-四氟鄰苯二(er)甲(jia)腈(jing)(>98.0%(GC))Tetrafluorophthalonitrile質量(liang)規格(ge)：>98.0%(GC)

人食(shi)管(guan)癌(ai)細(xi)胞(bao);EC1091,2-萘二(er)甲(jia)腈(jing)(>98.0%(GC))1,2-Naphthalenedicarbonitrile質量(liang)規格(ge)：>98.0%(GC)
人呼(hu)吸道上皮(pi)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基(ji) 100mL扁桃苷(gan)/苦杏(xing)仁(ren)苷(gan)質(zhi)量規格(ge)：>98%,BRAmygdalin

U2OS-Luc teT-on細(xi)胞(bao)，熒(ying)光素(su)酶(mei)轉(zhuan)染(ran)人(ren)成(cheng)骨肉(rou)瘤細(xi)胞(bao) 枯草芽(ya)孢桿(gan)菌(jun) 小鼠(shu)腎(shen)集合管(guan)細(xi)胞(bao)(SV40轉(zhuan)化);M-1扁桃苷(gan)/苦杏(xing)仁(ren)苷(gan)(標準(zhun)品(pin))質量(liang)規格(ge)：HPLC≥98%,標準(zhun)品(pin)Amygdalin

CCL3 Protein Human 重組人 CCL3 / Mip1a 蛋白(bai) (His 標簽)鹽酸(suan)阿比(bi)朵爾(er)（標準(zhun)品(pin)）質(zhi)量(liang)規格(ge)：HPLC>98%,標準(zhun)品(pin)Arbidol HCl

LoVo(人大(da)腸(chang)癌細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 人 EDNRB / Endothelin B Receptor 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照) 質量(liang)規格(ge)：>99%,超,細(xi)胞(bao)培(pei)養級(ji)Argatroban

大(da)額(e)牛(niu)與婆羅門(men)牛(niu)雜交(jiao)F1代(dai)皮(pi)膚(fu)成(cheng)纖維(wei)樣細(xi)胞(bao);BOS-6（標準(zhun)品(pin)）質(zhi)量(liang)規格(ge)：HPLC>98%,標準(zhun)品(pin)Argatroban
GYPA Others Human 人 GYPA / CD235a / Glycophorin A 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照) 1酸(suan)銅(tong)三水(shui)(>98%,BR)質量(liang)規格(ge)：>98%,BRCopper(II) tartrate, trihydrate

扁桃體上皮(pi)細(xi)胞(bao)培(pei)養基(ji)TEpiCM2'-脫氧(yang)腺(xian)苷(gan)5'二1酸(suan)三鈉鹽(yan)(>97%,BR)質量(liang)規格(ge)：>97%,BRdADP

NCI-H1563[H1563]細(xi)胞(bao)，人胚肺細(xi)胞(bao) 人胚腎(shen)細(xi)胞(bao),2V6.11細(xi)胞(bao) 人少突膠質前體細(xi)胞(bao)-懸浮(fu)生(sheng)長HOPC-os堿性(xing)品(pin)紅(hong)(分析(xi)標準(zhun)品(pin))質量(liang)規格(ge)：分析(xi)標準(zhun)品(pin)Basic Fuchsin

小型豬(zhu)腎(shen)細(xi)胞(bao);MPK溴(xiu)百裏香酚(fen)藍(lan)質(zhi)量規格(ge)：酸(suan)堿指示劑Bromothymol blue

PDGFRA Others Human 人 PDGFRa / CD140a 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照) 鉍試劑Ⅱ(CP)質量(liang)規格(ge)：CPBismuthiol II
防風(feng)探(tan)針法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑盒(he)保(bao)存(cun)小鼠(shu)誘(you)導性(xing)多(duo)潛(qian)能(neng)幹(gan)細(xi)胞(bao);PUMC-mips-B1β-促激(ji)素(su)，人(ren)質(zhi)量(liang)規格(ge)：>95%,BRβ-MSH, human

Z-HL16C細(xi)胞(bao)，人胚肺成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)突變(bian)癌細(xi)胞(bao) 非(fei)洲綠猴腎(shen)細(xi)胞(bao),COS-6細(xi)胞(bao) CL-0074DLD-1(人結(jie)腸(chang)腺癌細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2β-促激(ji)素(su)，猴質(zhi)量規格(ge)：>95%,BRβ-MSH, monkey

SW620(人結(jie)腸(chang)癌細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2Ac-垂體腺苷(gan)酸(suan)環(huan)化酶激(ji)活(huo)肽-38，人，小(xiao)鼠(shu)，綿(mian)羊，豬(zhu)，大(da)鼠質(zhi)量規格(ge)：>95%,BRAc-PACAP-38 (human, m