探討標(biao)本(ben)不(bu)同情況對(dui)ELISA試(shi)驗(yan)的(de)影響(xiang):
1. 溶血標(biao)本(ben)及混有紅細胞(bao)的(de)血清(qing)采(cai)用ELISA法檢(jian)測(ce)易(yi)產(chan)生假(jia)陽性(xing)。可(ke)能是(shi)溶血血(xue)清(qing)中含有(you)過(guo)氧(yang)化酶(mei)物(wu)質(zhi)(紅(hong)細胞(bao)或血紅(hong)蛋白中的(de)亞鐵血紅素(su)),在(zai)洗(xi)滌過(guo)程(cheng)中往往難(nan)以(yi)洗(xi)脫(tuo),它(ta)可(ke)使(shi)H2O2釋放出(chu)原(yuan)生態(tai)氧(yang)(O),從(cong)而催(cui)化底物(wu)四甲基C6H6胺生成(cheng)可(ke)溶性的(de)有色(se)物(wu)質(zhi),即(ji)顯藍色,產生(sheng)假(jia)陽性(xing)。所(suo)以(yi)嚴(yan)重溶血標(biao)本(ben)禁(jin)用。
2. 標(biao)本(ben)受(shou)細菌汙(wu)染(ran)。因菌(jun)體中可能含有(you)內(nei)源性(xing)辣(la)根(gen)過(guo)氧(yang)化物(wu)酶(mei),因此(ci),被(bei)細菌汙(wu)染(ran)的(de)標(biao)本(ben)同溶血標(biao)本(ben)壹樣,亦可(ke)產(chan)生非(fei)特(te)異(yi)性(xing)顯色(se)而幹(gan)擾(rao)測(ce)定結(jie)果(guo)。
3. 標(biao)本(ben)保(bao)存(cun)不(bu)當(dang)。在(zai)冰(bing)箱中保存(cun)過久(jiu)的(de)標(biao)本(ben),在(zai)間(jian)接法ELISA測(ce)定中會(hui)導(dao)致(zhi)本(ben)底(di)過(guo)深、造成假(jia)陽性(xing);為(wei)克服(fu)上述幹(gan)擾(rao),ELISA試(shi)劑(ji)盒測定的(de)血清(qing)標(biao)本(ben)宜為(wei)新鮮采(cai)集;如不(bu)能(neng)立即(ji)測(ce)定,5 d內(nei)測定的(de)血清(qing)標(biao)本(ben)可(ke)存(cun)放於4℃,1周後測(ce)定的(de)血清(qing)標(biao)本(ben)應(ying)低溫(wen)凍存(cun);凍存(cun)後融(rong)解(jie)的(de)標(biao)本(ben),蛋白質(zhi)局(ju)部濃縮(suo),分布不(bu)均(jun),應(ying)充分混(hun)合後再(zai)測(ce)定,但(dan)混勻時(shi)應(ying)輕柔,不(bu)可(ke)強(qiang)烈振蕩(dang)。
4. 塑(su)料(liao)試(shi)管(guan)能(neng)吸附抗原(yuan)物(wu)質(zhi),樣(yang)本(ben)久(jiu)置在(zai)塑(su)料(liao)管(guan)內(nei)會(hui)使(shi)樣(yang)本(ben)內(nei)抗原(yuan)含量(liang)下降(jiang)造(zao)成(cheng)假陰(yin)性。
好(hao)使(shi)用真空(kong)采(cai)血(xue)管(guan);並(bing)使用非抗凝(ning)標(biao)本(ben),肝(gan)素(su)抗凝(ning)血漿會(hui)增(zeng)加(jia)OD值,EDTA、酶(mei)抑制(zhi)劑(如NaN3)可(ke)抑制(zhi)ELISA系統中辣(la)根(gen)過(guo)氧(yang)化物(wu)酶(mei)活性(xing)。
5. 標(biao)本(ben)凝(ning)固不(bu)全。 在(zai)工(gong)作中,有時為(wei)了爭取(qu)時(shi)間(jian)快(kuai)速(su)檢測(ce),常在血(xue)液(ye)還未開始凝(ning)固時即(ji)強(qiang)行離(li)心分離(li)血清(qing),使血(xue)清中仍殘留(liu)部分纖(xian)維蛋白原(yuan),在ELISA測(ce)定過(guo)程中可以(yi)形(xing)成肉眼(yan)可見(jian)的(de)纖(xian)維蛋白塊(kuai),易(yi)造(zao)成假(jia)陽性(xing)結(jie)果(guo);因(yin)此血液標(biao)本(ben)采(cai)集後必(bi)須使其(qi)充分凝(ning)固後再(zai)分離(li)血清(qing)。
綜上所(suo)述,標(biao)本(ben)對(dui)ELISA試(shi)驗(yan)的(de)影響(xiang)不(bu)容忽(hu)視(shi)。為(wei)了確(que)保(bao)試(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)的(de)準確(que)性和(he)可(ke)靠性,我(wo)們應(ying)重視(shi)標(biao)本(ben)的(de)采(cai)集、處理和(he)保(bao)存(cun)等環(huan)節,嚴(yan)格(ge)遵守操作規(gui)程(cheng),並(bing)采(cai)取(qu)適(shi)當(dang)的(de)措(cuo)施(shi)優(you)化試驗(yan)條件(jian)。