ELISA試(shi)劑盒的(de)檢測方(fang)法(fa)步(bu)驟(zhou)

ELISA檢測方(fang)法(fa)的(de)解(jie)析(xi)：壹(yi)開(kai)始(shi)，試劑盒沒(mei)有打開(kai)的時(shi)候(hou)，所(suo)有試劑都需要(yao)按(an)照試(shi)劑瓶上面的(de)標(biao)簽所(suo)示來保(bao)存(cun)。值(zhi)得在意的(de)是(shi)，收(shou)到試劑盒後請(qing)盡快(kuai)將(jiang)標(biao)準(zhun)品、孔板(ban)保(bao)存(cun)於-20℃。接(jie)著，我(wo)們(men)再(zai)來(lai)看看具(ju)體的(de)方(fang)法(fa)吧(ba)：
  ELISA實驗(yan)的(de)類型
抗原(yuan)捕獲是(shi)多(duo)種類型中的(de)壹(yi)個共同點。壹(yi)般(ban)捕獲形式包(bao)括將(jiang)抗(kang)原吸附到(dao)微孔板(ban)或(huo)者(zhe)用(yong)微孔板(ban)上(shang)的抗體進(jin)行捕獲。
通(tong)常大(da)家使用(yong)雙(shuang)抗(kang)夾(jia)心(xin)法(fa)進(jin)行ELISA實驗(yan)，雙(shuang)抗(kang)夾(jia)心(xin)法(fa)中(zhong)抗(kang)原(yuan)被(bei)夾(jia)在捕獲抗(kang)體和(he)檢測抗體之(zhi)間(jian)，這(zhe)種方(fang)法(fa)既(ji)靈(ling)敏(min)又有(you)效，受到(dao)了(le)許(xu)多(duo)研究(jiu)者(zhe)的青(qing)睞(lai)。不過(guo)有時(shi)候(hou)雙(shuang)抗(kang)夾(jia)心(xin)法(fa)並不是(shi)*選擇(ze)，例如(ru)有時(shi)候(hou)抗(kang)原特(te)別(bie)小讓(rang)兩(liang)個大(da)抗(kang)體難以(yi)附(fu)著，又或(huo)者(zhe)抗體只(zhi)有(you)壹(yi)個抗體結(jie)合(he)位(wei)點。在上述情(qing)況(kuang)下(xia)，競(jing)爭性ELISA就更(geng)為適(shi)用(yong)，這(zhe)種方(fang)法(fa)是(shi)采(cai)用(yong)帶(dai)標(biao)記的純(chun)化抗(kang)原(yuan)與(yu)樣本中(zhong)無標記(ji)的(de)抗原(yuan)進行競(jing)爭，以(yi)結(jie)合(he)捕獲抗(kang)體。
此(ci)外(wai)，我們(men)還(hai)需要(yao)根(gen)據(ju)自(zi)身需要(yao)選擇(ze)96孔板(ban)或(huo)是48孔板(ban)進(jin)行ELISA實驗(yan)。
第(di)二(er)、交叉反(fan)應
如(ru)果(guo)抗體間(jian)發(fa)生沖(chong)突或(huo)交叉反(fan)應就會(hui)影響整個實驗(yan)的(de)特(te)異(yi)性。其(qi)中(zhong)抗體來(lai)源所帶(dai)來(lai)的兼容(rong)性就是(shi)交叉反(fan)應的壹(yi)個因素。盡管(guan)現(xian)在(zai)購買源自(zi)動(dong)物(wu)的(de)抗體越(yue)來(lai)越容(rong)易，我們(men)仍有必(bi)要(yao)確認壹(yi)下(xia)是(shi)否會(hui)產(chan)生(sheng)交叉反(fan)應的問題(ti)。在(zai)用(yong)雙(shuang)抗(kang)夾(jia)心(xin)法(fa)進(jin)行ELISA檢測時(shi)，檢測用(yong)的二(er)抗(kang)必(bi)須(xu)特(te)異(yi)性針對(dui)檢測壹(yi)抗(kang)，而(er)不能(neng)與(yu)捕獲抗(kang)體起(qi)反(fan)應。如(ru)果(guo)檢測用(yong)二(er)抗(kang)與(yu)捕獲抗(kang)體結(jie)合(he)，實驗(yan)特(te)異(yi)性就會(hui)大(da)打折(zhe)扣。通常(chang)我(wo)們(men)選(xuan)用(yong)源自(zi)不同(tong)宿(xiu)主的捕獲抗(kang)體和(he)檢測壹(yi)抗(kang)，來(lai)避免上(shang)述問(wen)題(ti)。
第(di)三、檢測方(fang)式
如(ru)今(jin)檢測ELISA有許(xu)多(duo)途徑(jing)，我們(men)可(ke)以(yi)根(gen)據(ju)自(zi)己的偏(pian)好進(jin)行選擇(ze)。壹(yi)般(ban)ELISA檢測的是(shi)酶促反(fan)應的可溶性產(chan)物(wu)，抗(kang)體上(shang)結(jie)合(he)有相(xiang)應的酶，而(er)反(fan)應體系中添(tian)加(jia)有(you)相(xiang)應的底物(wu)。這(zhe)種酶促反(fan)應生成(cheng)具有(you)特(te)征性的顏(yan)色(se)，可以(yi)通(tong)過(guo)分光(guang)光(guang)度計進(jin)行檢測，堿性磷(lin)酸(suan)酶(mei)AP也(ye)是(shi)壹(yi)種常用(yong)酶。酶(mei)可(ke)以(yi)結(jie)合(he)在壹(yi)抗(kang)上(shang)，也可以(yi)結(jie)合(he)在二(er)抗(kang)上(shang)，還(hai)可以(yi)使(shi)用(yong)鏈黴(mei)親(qin)和(he)素(su)標記的酶與(yu)親(qin)和(he)素(su)標記的壹(yi)抗(kang)結(jie)合(he)。此外(wai)ELISA的結(jie)果(guo)檢測還(hai)包括(kuo)放(fang)射(she)性檢測、熒光(guang)檢測、化學發光(guang)或(huo)顯(xian)色(se)法(fa)檢測等。
第(di)四(si)、提(ti)出(chu)的(de)特(te)別(bie)註意
1. 按(an)試劑盒說(shuo)明書的(de)要(yao)求準(zhun)備實(shi)驗(yan)中(zhong)需(xu)用(yong)的試(shi)劑。
2. 試劑盒中(zhong)用(yong)的蒸(zheng)餾水(shui)或(huo)去離子水(shui)，包(bao)括用(yong)於洗滌的，應為新(xin)鮮的和(he)高(gao)質(zhi)量(liang)的。
3. 自(zi)配的緩沖液應用(yong)pH計測量(liang)較正。
4. 試劑盒中(zhong)本(ben)次試驗(yan)不需(xu)用(yong)的部(bu)分應及時(shi)放(fang)回冰(bing)箱(xiang)保(bao)存(cun)。
第(di)五、ELISA試(shi)劑盒的(de)評(ping)價角度思(si)考
1. 靈(ling)敏(min)度：①為試(shi)劑檢出(chu)被(bei)檢物(wu)質(zhi)的(de)zui低(di)量(liang)的能(neng)力;②為(wei)試劑對大(da)量(liang)樣品中(zhong)陽(yang)性檢出(chu)的(de)能(neng)力。
2. 特(te)異(yi)性、精密(mi)度、準(zhun)確度、簡便(bian)性、安全性。
3. 經濟(ji)性：試劑在同等質(zhi)量(liang)條件下通(tong)過(guo)大(da)規(gui)模生產(chan)或(huo)技術(shu)進步(bu)降(jiang)低(di)成(cheng)本，而(er)市場(chang)價格比(bi)較合(he)理(li);
4. 試劑評價：需(xu)要(yao)有的(de)確證(zheng)方(fang)法(fa)和(he)確證(zheng)的(de)樣品進(jin)行檢測。
另外(wai)，ELISA試劑盒使(shi)用(yong)後，要(yao)將(jiang)剩(sheng)余(yu)試(shi)劑仍需按(an)照試(shi)劑瓶標簽所(suo)示的溫(wen)度保存(cun)哦(o)!開(kai)封(feng)後的酶(mei)標板(ban)要(yao)加(jia)幹燥劑後密封(feng)保(bao)存(cun)於-20℃，註意避(bi)免(mian)潮(chao)濕(shi)。