hacat人(ren)永生(sheng)化表皮細(xi)胞(bao)

公司產(chan)品僅供科(ke)研研究(jiu)使(shi)用(yong)、不得用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止消化，再輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，然後按(an) 1:2 比(bi)例進行(xing)分瓶傳代，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮變(bian)圓後加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止消化，輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放置於(yu)凍(dong)存(cun)管中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮中進行(xing)長(chang)期(qi)保存。使(shi)用(yong)程序

降(jiang)溫(wen)盒(he)可直接放入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理僅供參考，具體操作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品說(shuo)明書為主(zhu)。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水浴(yu)中迅速(su)搖晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹(chui)勻(yun)。然後將(jiang)所有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入(ru)含(han)適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換液(ye)並(bing)檢查(zha)細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如果細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即可進行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上清(qing)，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂離子的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化液浸潤(run)所有(you)細(xi)胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況而定(ding)），然後在顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分變圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿回操作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止消化。輕輕打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例分到新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時(shi)，可進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使(shi)細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍(dong)存(cun)管做(zuo)好(hao)標識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮灌(guan)儲存。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管位(wei)置以(yi)便下(xia)次(ci)拿取。

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是否完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁等現(xian)象，若(ruo)有(you)上述現象(xiang) 發生(sheng)請及(ji)時和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明書，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關信息，如細(xi)胞(bao)形(xing)態、所用(yong)培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比(bi)例、所需 細(xi)胞(bao)因子等(deng)，確(que)保細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致而導(dao)致細(xi)胞(bao)出現問題(ti)，責(ze)任(ren)由 客(ke)戶自行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭細(xi)胞(bao)瓶表面，顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀態。因(yin)運輸(shu)問題(ti)，部分細(xi)胞(bao)由於(yu)溫(wen)度 變化及劇烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎形(xing)成碎片，是正常(chang)現(xian)象。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀態後，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可以(yi)消化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直接混勻(yun)收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接種(zhong)到新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客(ke)戶用(yong)相(xiang)同(tong)條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議客(ke)戶收到細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照片，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態，便(bian)於(yu)和(he)我司(si)技(ji)術(shu)部溝(gou)通(tong) 交流。由於(yu)運輸(shu)的(de)原因，個(ge)別敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會出(chu)現(xian)不穩定的(de)情(qing)況，請(qing)及(ji)時和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具體情(qing)況，以(yi)便我們的(de)技術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直至問題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液培(pei)養(yang)基) 不能再用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請換用(yong)按照(zhao)說(shuo)明書細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到細(xi)胞(bao)後第(di)壹(yi)次(ci)傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。

公司正在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：

MGLUR1 + MGLUR5： 促代謝(xie)型谷酸(suan)受體1+5抗(kang)體 BPH-1, 人(ren)前(qian)列(lie)腺(xian)增(zeng)生細(xi)胞(bao) B淋(lin)巴細(xi)胞(bao),XJH細(xi)胞(bao) PLC/PRF/5(人(ren)肝癌細(xi)胞(bao))

EFNA1 Others Rat 大鼠(shu) Ephrin-A1 / EFNA1 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照) 大鼠(shu)乙酰(xian)(Ach)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) CA153 癌相(xiang)關抗(kang)原 96T

MICA： MHC I類鏈相(xiang)關蛋(dan)白A/組織相(xiang)容(rong)性(xing)復合(he)物MHCIa抗(kang)體 人(ren)導管癌細(xi)胞(bao);HCC38

OKT 11雜(za)交瘤細(xi)胞(bao)抗CD2 OKT 11 hybridoma cells against CD2 IMDM培(pei)養(yang)基(GIBCO)+20%FBS 大鼠(shu)乙酰(xian)δ脫(tuo)水酶(mei)(ALAD)ELISA試劑(ji)盒 CA199 胰(yi)腺(xian)癌(ai)相(xiang)關抗(kang)原 96T

MURF2： 肌(ji)肉特異(yi)性(xing)環指(zhi)蛋(dan)白2抗(kang)體 IL18R1 Others Human 人(ren) IL18R1 / CD218a 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照)

脂肪間(jian)質幹(gan)細(xi)胞(bao) Adult adipose derived mesenchymal stem cells 人(ren)抗Mi2抗(kang)體(ai-Mi2-Ab)ELISA 試(shi)劑盒 PDGF-B 血(xue)小板(ban)源性(xing)生(sheng)長(chang)因子-B(抗(kang)原) 0.5mg

HE4： 附(fu)睪(gao)分泌(mi)蛋(dan)白4抗(kang)體 家兔骨髓間(jian)充質幹(gan)細(xi)胞(bao);2012083MSC 人(ren)主(zhu)動(dong)脈(mai)血(xue)管平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)，T/G HA-VSMC細(xi)胞(bao) MPC-11細(xi)胞(bao)，小鼠漿(jiang)細(xi)胞(bao)瘤

FIGF Others Rat 大鼠(shu) VEGF-D / VEGFD / FIGF 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照) 人(ren)抗Ku抗(kang)體(ai-Ku-Ab)ELISA 試(shi)劑盒 PDGF-R-A 血(xue)小板(ban)源性(xing)生(sheng)長(chang)因子受體-A(抗(kang)原) 0.5mg

HBLD1： 鐵(tie)硫(liu)簇整(zheng)合(he)同(tong)源物(wu)2蛋(dan)白抗(kang)體 CL-0405NCI-H716(人(ren)結(jie)直腸腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2

SW038-C2細(xi)胞(bao)，人(ren)腦膠(jiao)質母細(xi)胞(bao)瘤細(xi)胞(bao) 致病(bing)性(xing)大腸(chang)埃(ai)希(xi)氏菌(jun) 人(ren)間(jian)充質幹(gan)細(xi)胞(bao)-脂肪RNAHMSC-ad miRNA5 μg 人(ren)抗IVIgG抗(kang)體ELISA 試(shi)劑盒 PDGF-R-B 血(xue)小板(ban)源性(xing)生(sheng)長(chang)因子受體-B(抗(kang)原) 0.5mg

hacat人(ren)永生(sheng)化表皮細(xi)胞(bao)PGF Protein Mouse 重(zhong)組小(xiao)鼠(shu) PIGF / PLGF 蛋(dan)白 (Fc 標簽) 大鼠(shu)環加(jia)氧酶(mei)2(PTGS2)ELISA試劑(ji)盒 IL-1sR I  大鼠(shu)白介(jie)素1可溶性(xing)受體Ⅰ 96T

Pokemon/ZBTB7： 蒙(meng)蛋(dan)白抗(kang)體 SDF2 Others Human 人(ren) SDF2 桿狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照)

Huh-7 人(ren)肝癌細(xi)胞(bao) 大鼠(shu)環加(jia)氧酶(mei)2(COX-2)ELISA試劑(ji)盒 BMP-7(Mouse Bone morphogenetic protein 7)  小(xiao)鼠骨成型蛋(dan)白7 96T

Protein CASP： CASP抗(kang)體 HT-29細(xi)胞(bao)，人(ren)結(jie)腸(chang)癌(ai)細(xi)胞(bao) 人(ren)胚(pei)腎(shen)細(xi)胞(bao),293細(xi)胞(bao) 腎系(xi)膜(mo)細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 ×105次(ci)方(1ml)

SELPLG Others Mouse 小(xiao)鼠 PSGL-1 / CD162 / SELPLG 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照) 大鼠(shu)環加(jia)氧酶(mei)1(PTGS1)ELISA試劑(ji)盒 AMA(Human anti-Monocyte antibody)  人(ren)抗單核細(xi)胞(bao)抗體 CL-0072Daudi(人(ren)淋(lin)巴瘤細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2