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          支原體(ti)汙(wu)染(ran)細(xi)胞(bao)常用(yong)清(qing)除(chu)方(fang)法(fa)
        2. 發布日(ri)期:2022-05-31      瀏覽(lan)次(ci)數(shu):1722
          • 支(zhi)原體(ti)汙(wu)染(ran)細(xi)胞(bao)後,有(you)必(bi)要清(qing)除(chu)支原體(ti),常用(yong)方(fang)法(fa)有:

            1、對於(yu)非重(zhong)要的(de)細胞(bao),如培(pei)養中(zhong)的細胞(bao)、WCB的(de)細胞等,將培(pei)養物(wu)與用過(guo)的(de)培養基(ji)滅(mie)活(huo)後丟(diu)棄即可(ke)。對(dui)於(yu)較為(wei)重要(yao)的(de)細(xi)胞,如來源(yuan)珍貴或(huo)實(shi)驗室(shi)中細(xi)胞保(bao)藏量較小(xiao)等可(ke)以(yi)采用以(yi)下(2)-(8)的方(fang)法(fa)。

            2、用MRA處(chu)理(li):用支(zhi)原體(ti)清(qing)除(chu)劑(Mycoplasma Removal Agent)處(chu)理(li)細胞(bao),作(zuo)用濃(nong)度(du)為(wei) 25μg/ml,兩(liang)周(zhou)可(ke)以(yi)清(qing)除(chu)支原體(ti)。

            3、用(yong)清(qing)洗(xi)純(chun)化法清(qing)除(chu)支原體(ti)汙(wu)染(ran)的(de)方(fang)法(fa):細胞營(ying)養馴化→上等細胞(bao)群的(de)篩(shai)選(xuan)→細胞清(qing)洗(xi)→反復離心洗(xi)滌(di),其(qi)原理(li)是(shi)利(li)用(yong)離(li)心力(li)、細(xi)胞(bao)、微(wei)生(sheng)物質(zhi)量(liang)和(he)懸液(ye)的浮力(li)差達(da)到清(qing)除(chu)支原體(ti)的(de)目(mu)的(de)。由(you)於(yu)支原體(ti)個體(ti)小(xiao)且除(chu)發酵(jiao)支(zhi)原體(ti)外(wai)多為細(xi)胞外(wai)寄生,所以(yi)通(tong)過(guo)反復洗(xi)滌(di)細(xi)胞(bao)和(he)低(di)速(su)離心換液(ye)使其(qi)中潛(qian)在(zai)的(de)支(zhi)原體(ti)數(shu)量(liang)降(jiang)低(di)至ji 限(xian). 如(ru)結合敏感抗生(sheng)素的(de)抑(yi)殺(sha)作(zuo)用,可(ke)達(da)到更好(hao)的效(xiao)果。 

            4、藥物輔(fu)助(zhu)加(jia)溫處(chu)理(li):先用(yong)藥物處(chu)理(li)後,再(zai)將汙(wu)染的(de)組(zu)織培養物(wu)放在(zai)41℃培(pei)養18小(xiao)時,可(ke)殺(sha)死支(zhi)原體(ti),但(dan)對細胞有(you)不(bu)佳影(ying)響。

            5、使用支原體(ti)特(te)異(yi)性血(xue)清(qing):用(yong)5%的(de)兔支原體(ti)免疫(yi)血清(qing)可(ke)去(qu)除(chu)支原體(ti)汙(wu)染(ran),因(yin)特異(yi)抗體(ti)可(ke)抑(yi)制(zhi)支(zhi)原體(ti)生(sheng)長(chang),故經抗血(xue)清(qing)處(chu)理(li)後11天(tian)即轉(zhuan)為陰性,並且5個月(yue)後仍為(wei)陰性。

            6、動(dong)物體(ti)內(nei)接(jie)種(zhong)除(chu)菌法(fa):把受支(zhi)原體(ti)汙(wu)染(ran)的(de)腫(zhong)瘤(liu)細胞(bao)接(jie)種(zhong)在(zai)同(tong)種(zhong)動(dong)物皮下或(huo)腹(fu)腔中,借動(dong)物免疫(yi)系統(tong)消(xiao)滅(mie)支原體(ti),而(er)腫(zhong)瘤(liu)細胞(bao)卻能(neng)在(zai)體(ti)內(nei)繼續(xu)生長(chang),待(dai)壹(yi)定時間後,從(cong)體(ti)內(nei)取(qu)出細(xi)胞(bao)再進(jin)行培養繁殖(zhi)。

            7、巨(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)吞噬(shi)法(fa):從動(dong)物腹(fu)腔采取巨(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao),為排除(chu)其(qi)它(ta)細胞(bao)成分,可(ke)先(xian)進(jin)行(xing)純(chun)化,然後再(zai)加(jia)入(ru)被(bei)支原體(ti)汙(wu)染(ran)的(de)細(xi)胞培養液(ye)中混(hun)合培養。在(zai)培(pei)養過(guo)程(cheng)中(zhong),為(wei)檢查(zha)支(zhi)原體(ti)是(shi)否(fou)已被消(xiao)除(chu)幹凈(jing),可(ke)利(li)用(yong)支(zhi)持(chi)物培(pei)養法(fa)驗證,取(qu)出支(zhi)持(chi)物逐日染色(se)、鏡(jing)檢(jian)觀(guan)察,至支(zhi)原體(ti)已被消(xiao)除(chu)幹凈(jing)為(wei)止。

            8、使用支原體(ti)清(qing)除(chu)培養基(ji),每(mei)2~3天(tian)更(geng)換1次(ci)新鮮(xian)培(pei)養液(ye),換液(ye)時用(yong)無菌的(de)平衡(heng)yan 溶ye洗(xi)滌(di)細(xi)胞(bao)1~2次(ci);期間如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)過(guo)大,請保(bao)持(chi)細胞(bao)密(mi)度(du)適(shi)當(dang)(貼(tie)壁(bi)細胞可(ke)能(neng)需要(yao)用(yong)yi酶消(xiao)化),並更換新的培(pei)養器(qi)皿,3天(tian)之(zhi)後,即可(ke)見(jian)明(ming)顯(xian)清(qing)除(chu)效果(guo);處(chu)理(li)15天(tian)後,可(ke)以(yi)用(yong)支原體(ti)檢(jian)測試劑盒(he)進(jin)行檢(jian)測,檢測支原體(ti)是(shi)否(fou)殺(sha)滅(mie)*;如果(guo)仍有(you)支原體(ti)殘(can)留(liu),可(ke)以(yi)考(kao)慮(lv)再(zai)處(chu)理(li)6天(tian);為(wei)避(bi)免細(xi)胞再(zai)次(ci)受到“支原體(ti)"的(de)汙(wu)染(ran),以(yi)後每(mei)隔(ge)1個月(yue)進(jin)行支(zhi)原體(ti)的(de)常規(gui)檢測,以(yi)保(bao)證(zheng)沒(mei)有新(xin)的(de)支(zhi)原體(ti)汙(wu)染(ran)。


            註:支(zhi)原體(ti)汙(wu)染(ran)時細(xi)胞表(biao)現為長(chang)得(de)不(bu)好(hao),也不(bu)死亡,同(tong)時,培(pei)養基(ji)又是(shi)清(qing)亮(liang)的(de),時間長(chang)達(da)壹(yi)周(zhou)也(ye)沒(mei)有(you)什麽(me)變化,這時基(ji)本上可(ke)以(yi)判斷出是(shi)支原體(ti)汙(wu)染(ran)了(le)。

             


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