1、多克(ke)隆(long)抗(kang)體的(de)制(zhi)備:
①免(mian)疫方法:對多(duo)克(ke)隆(long)抗(kang)體,免(mian)疫方法壹般(ban)有(you)皮(pi)下(xia)或肌肉免(mian)疫法、皮(pi)內免(mian)疫法、淋(lin)巴(ba)結(jie)免(mian)疫法和混合(he)法等(deng)。壹般(ban)來說,皮(pi)下(xia)或肌肉免(mian)疫法產(chan)生(sheng)的抗體比(bi)較(jiao)多;皮(pi)內免(mian)疫法所(suo)需(xu)的(de)抗(kang)原(yuan)量(liang)少(shao),在(zai)抗原(yuan)寶貴時特別適用(yong),但(dan)與之(zhi)相對的(de),它(ta)產(chan)生(sheng)的抗體量(liang)也(ye)不多。混合(he)免(mian)疫法的優點(dian)是抗原(yuan)用(yong)量(liang)小(xiao),產(chan)生(sheng)抗體速度(du)快。
②多克(ke)隆(long)抗(kang)體的(de)制(zhi)備:將抗原(yuan)免(mian)疫動物(wu)(常用(yong)的(de)動(dong)物(wu)為兔(tu)、羊、狗(gou)等(deng)),分離(li)出(chu)抗血清並純(chun)化(hua)抗(kang)體(ti)。多(duo)克隆(long)抗(kang)體的(de)均(jun)壹性(xing)較差(cha),其特異(yi)性(xing)相對較(jiao)低(di),因(yin)此,多克隆(long)抗(kang)體在(zai)農藥(yao)殘(can)留(liu)速測(ce)技術(shu)中的(de)應(ying)用(yong)受(shou)到壹(yi)定的限制(zhi)。但近年(nian)來有學(xue)者恰恰利用(yong)了(le)多(duo)抗的交叉(cha)反(fan)應(ying)高(gao)的(de)特點(dian),通過(guo)制(zhi)備出(chu)具有某類(或某幾(ji)種(zhong))農藥(yao)的(de)“共(gong)性(xing)結構"的(de)半(ban)抗原(yuan)或者通過(guo)制(zhi)備出(chu)含多個抗(kang)原(yuan)決(jue)定(ding)簇(cu)的人工(gong)抗原(yuan)來制(zhi)備“寬譜特異(yi)性(xing)"抗體,進(jin)行農藥(yao)多(duo)殘(can)留(liu)分(fen)析研(yan)究(jiu)。
2、單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體的(de)制(zhi)備:
單克隆(long)抗(kang)體制(zhi)備技術(shu)最(zui)初是由K鰄(鰄)ler和Milstein(1975)利用(yong)B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)雜交瘤技術(shu)創(chuang)立的(de)。目前(qian)該(gai)技術(shu)已廣泛(fan)應用(yong)於(yu)疾病(bing)診(zhen)斷(duan)及生(sheng)物(wu)、醫學(xue)研(yan)究(jiu)、環(huan)境和食品安全(quan)檢(jian)測(ce)(監測)等(deng)方面(mian)。單(dan)抗(kang)均(jun)壹性(xing)高(gao),只(zhi)和抗原(yuan)某壹決(jue)定(ding)簇(cu)結合,有(you)更(geng)高(gao)的(de)特異(yi)性(xing),而(er)且,產(chan)生(sheng)抗體的單(dan)克(ke)隆(long)細(xi)胞(bao)可在(zai)體外(wai)傳(chuan)代繁(fan)殖,不(bu)受(shou)動物(wu)免(mian)疫時間(jian)限(xian)制(zhi)生產(chan)抗(kang)體。只要(yao)管(guan)理和培(pei)養技術(shu)正確,抗(kang)體就(jiu)可(ke)無(wu)限(xian)的產(chan)生(sheng)。基本過(guo)程是動物(wu)免(mian)疫、細(xi)胞(bao)融(rong)合、克隆(long)篩(shai)選、單(dan)克隆(long)抗(kang)體性(xing)質鑒(jian)定、腹水(shui)誘(you)發、收(shou)集(ji)和純(chun)化(hua)等(deng)。
3、重組(zu)抗(kang)體的(de)制(zhi)備:
近年(nian)來,隨(sui)著蛋白(bai)質技術(shu)及(ji)DNA重組(zu)技術(shu)的(de)發展(zhan),人們通過(guo)對抗(kang)體產(chan)生(sheng)的基因(yin)本質、基因(yin)重組(zu)抗(kang)體篩(shai)選(xuan)技術(shu)和直接定(ding)位誘導基因(yin)操(cao)縱(zong)技術(shu)的(de)研(yan)究(jiu),獲(huo)得(de)用(yong)於(yu)zhi定(ding)空(kong)間(jian)位置(zhi)並具(ju)有(you)各(ge)種特異(yi)性(xing)、親和性(xing),能忍受(shou)壹定(ding)溫度(du)、pH和有機(ji)溶劑的(de)人工(gong)重組(zu)抗(kang)體。壹(yi)般(ban)是將抗(kang)原(yuan)免(mian)疫小鼠(shu),壹定(ding)時間(jian)後(hou)無(wu)菌(jun)條(tiao)件下(xia)取(qu)出(chu)小鼠(shu)脾臟(zang),提取脾細(xi)胞(bao)總(zong)RNA,以(yi)RNA逆轉錄(lu)合成的(de)cDNA為模板(ban),PCR擴(kuo)增抗(kang)體(ti),將(jiang)抗體中的(de)輕鏈(lian)、重鏈連(lian)接成(cheng)ScFv(single-chainvariablefragment)。酶(mei)切經PCR擴(kuo)增的(de)ScFv片(pian)段(duan),並與噬(shi)菌(jun)體載(zai)體(ti)連(lian)接,然後(hou)以(yi)常(chang)規方法(fa)轉(zhuan)化入大腸(chang)桿(gan)菌或其他(ta)生物(wu)體中。人工(gong)培(pei)養帶(dai)有噬(shi)菌(jun)體(ti)抗體的(de)大腸(chang)桿(gan)菌,即得(de)到(dao)重組(zu)抗(kang)體。該(gai)方(fang)法(fa)生(sheng)產(chan)抗(kang)體速度(du)快,可通過(guo)誘變(bian)改變(bian)抗體特性(xing),使(shi)抗體的特異(yi)性(xing)更(geng)強(qiang),而(er)且,利用(yong)這項(xiang)技術(shu)獲(huo)得的(de)噬菌體抗體(ti)庫,能(neng)同時識(shi)別多(duo)種農藥(yao),可(ke)用(yong)於(yu)農藥(yao)多(duo)殘(can)留(liu)免(mian)疫速測(ce)技術(shu)的(de)研(yan)究(jiu)。