hct-15人(ren)結(jie)腸(chang)癌(ai)細(xi)胞

公(gong)司(si)產(chan)品僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細胞生長(chang)至覆(fu)蓋培養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終(zhong)止消化，再(zai)輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱細(xi)胞用 1-2ml 培養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞生長(chang)至覆(fu)蓋培養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru)培養(yang)液(ye)終(zhong)

止消化，輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並放(fang)置(zhi)於凍(dong)存管中(zhong)；

4）先將(jiang)細胞凍(dong)存管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其移入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進行長期(qi)保(bao)存。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞培養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞：以下(xia)細胞培養(yang)凍(dong)存處(chu)理僅供(gong)參考，具(ju)體操作(zuo)步驟以隨(sui)貨(huo)產(chan)品說明(ming)書為主。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存管在(zai) 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培養(yang)基混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所有(you)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含適量培養(yang)基的培養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過夜（或(huo)將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基，培養(yang)過夜）。第(di)二天(tian)換液(ye)並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞密度。

2) 細胞傳(chuan)代：如果細(xi)胞密度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄去培養(yang)上清(qing)，用(yong)不含鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗細(xi)胞1-2次。

b、加1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消化液(ye)浸潤(run)所有(you)細(xi)胞，將(jiang)培養(yang)瓶置(zhi)於37℃培養(yang)箱中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況而(er)定），然(ran)後(hou)在顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細胞消化情(qing)況，若細胞大部分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫落(luo)，迅(xun)速拿(na)回(hui)操作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾下(xia)培養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培養(yang)基終(zhong)止消化。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的含8 mL培養(yang)基的新(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存：待細(xi)胞生長(chang)狀態良(liang)好時，可(ke)進(jin)行細胞凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集細(xi)胞及細胞培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行細胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細胞數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無血(xue)清(qing)細(xi)胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每(mei)支凍(dong)存管凍(dong)存1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註意凍(dong)存管做(zuo)好標識。將(jiang)凍(dong)存管放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管位(wei)置(zhi)以便下(xia)次拿(na)取。

公(gong)司(si)正在出(chu)售(shou)的產品：

MMP-17： 基質金(jin)屬蛋白(bai)酶(mei)-17抗(kang)體 小(xiao)鼠腎(shen)足(zu)細(xi)胞;Mouse podocyte

HKC(人(ren)胚(pei)腎上(shang)皮細胞) 5×106cells/瓶×2 小(xiao)腸(chang)結(jie)腸(chang)炎(yan)耶爾森(sen)氏(shi)菌(jun) 大(da)鼠(shu)結(jie)合(he)蛋白(bai)5(IGFBP5)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) GCP-2/CXCL6(Human granulocyte chemotactic protein-2,GCP-2)  人(ren)粒細胞趨化蛋白(bai)-2 96T

Moesin： 膜突蛋(dan)白(bai)抗(kang)體 CM-R006大鼠(shu)肺(fei)成纖維細胞培養(yang)基100mL

IFNA4 Protein Mouse 重(zhong)組小(xiao)鼠 IFNA4 / IFNα4 / Ierferon alpha-4 蛋(dan)白 (His 標簽) 大鼠(shu)結(jie)合(he)蛋白(bai)4(IGFBP-4)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) DAO(Rat diamine oxidase,DAO)  大(da)鼠氧(yang)化(hua)酶(mei) 96T

Measles virus fusion protein： 麻疹(zhen)病(bing)毒融合(he)蛋白(bai)抗(kang)體 TP63 Others Human 人(ren) P63 / TP63 / Tumor 桿狀病(bing)毒-昆蟲(chong)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照)

HIV1 p55 + p17： 艾(ai)滋(zi)病(bing)病(bing)毒p55抗(kang)體 MRPL44 Others Human 人(ren) MRPL44 桿狀病(bing)毒-昆蟲(chong)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照)

狗脂(zhi)肪間(jian)質幹(gan)細(xi)胞 The dog adipose mesenchymal stem cells 人(ren)精酸酶(mei)(Arg)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Secretin receptor 分(fen)泌(mi)素受體(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

Hck： 造血細(xi)胞激(ji)酶(mei)抗(kang)體 綿羊(yang)肺(fei)細(xi)胞;OAR-L1 胚(pei)胎(tai)成(cheng)纖維細胞，NIH/3T3細胞 NCTC1469細胞，小(xiao)鼠正常肝(gan)細胞

TNFRSF19 Others Human 人(ren) TNFRSF19 / OY 人(ren)細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照) 人(ren)精酸加(jia)壓(ya)素(su)(AVP)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Socs 1 (suppressor of cytokine signaling 1) 細(xi)胞激(ji)酶(mei)信號-1抑制劑(ji)(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

HEATR5B： HEAT重(zhong)復(fu)內含蛋(dan)白(bai)5B蛋白(bai)抗(kang)體 CL-0365HuTu-80(人(ren)十(shi)二(er)脂腸(chang)腺(xian)癌(ai))5×106cells/瓶(ping)×2

hct-15人(ren)結(jie)腸(chang)癌(ai)細(xi)胞小(xiao)鼠神經黑質細胞(MN-sn)(1×106) T24, 人(ren)膀胱癌(ai)細(xi)胞 Human 大鼠核(he)因子(zi)κB受體激(ji)活因子(zi)(RANκ)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) LEP  大(da)鼠瘦(shou)素(su) 96T

Phospho-PLC gamma 1(Tyr775)： 0酸化(hua)0酯(zhi)酶(mei)Cγ1抗(kang)體 間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞軟骨細胞分(fen)化(hua)生長(chang)添加(jia)物(wu)MCDS

VEGFC Protein Human 重(zhong)組人(ren) VEGF-C 蛋白 (His 標簽) 大鼠(shu)核(he)因子(zi)κB受體活化因(yin)子(zi)配基(ji)(RANKL)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) ALG(Human anti-lymphocyte globulin)  人(ren)抗(kang)淋巴(ba)細(xi)胞球(qiu)蛋(dan)白(bai) 96T

Phospho-PLC gamma 2(Tyr753)： 0酸化(hua)0酯(zhi)酶(mei)Cγ2抗(kang)體 LAYN Others Rat 大鼠(shu) Layilin / LAYN 人(ren)細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照)

JEG-3 人(ren)絨(rong)毛膜(mo)癌(ai)細(xi)胞 大鼠核(he)因子(zi)κB受體活化因(yin)子(zi)配基(ji)(RANKL)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) LIF  大(da)鼠白(bai)血(xue)病(bing)抑制因子(zi) 96T

三(san)、培養(yang)註意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞後(hou)首先(xian)觀(guan)察(cha)細胞瓶是否(fou)完好，培養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現象，若有上述(shu)現象 發(fa)生請(qing)及時和我(wo)們(men)聯系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說明(ming)書，了解(jie)細胞相關(guan)信息，如細(xi)胞形態、所(suo)用(yong)培養(yang)基、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因子(zi)等，確保(bao)細胞培養(yang)條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若由於培養(yang)條(tiao)件不壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細胞出(chu)現問(wen)題(ti)，責任由 客戶自(zi)行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)細(xi)胞瓶表面(mian)，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細胞狀態。因(yin)運(yun)輸問(wen)題(ti)，部分(fen)細(xi)胞由於溫度 變化(hua)及劇烈碰亡破碎形成(cheng)碎片，是正常現象。觀察(cha)好細(xi)胞狀態後(hou)，75%酒(jiu)精消毒瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置(zhi)於 37℃培養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞可(ke)以消化，懸(xuan)浮細(xi)胞直接混勻(yun)收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細胞，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱中(zhong)進行培養(yang)。

5. 請客戶用(yong)相同條(tiao)件的培養(yang)基用(yong)於細胞培養(yang)。

6. 建議(yi)客戶收(shou)到細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞照片，記(ji)錄(lu)細胞狀態，便於和我(wo)司(si)技(ji)術部溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由於運(yun)輸的原(yuan)因，個別(bie)敏(min)感細胞會(hui)出(chu)現不穩(wen)定的情(qing)況，請(qing)及時和我(wo)們(men)聯系，告知(zhi)細(xi)胞 的具體情(qing)況，以便我(wo)們(men)的技術人(ren)員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細胞僅供科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用(yong)的培養(yang)基 (灌(guan)液(ye)培養(yang)基) 不能再用來培養(yang)細胞，請換用按(an)照說明(ming)書細胞培 養(yang)條(tiao)件新(xin)配制的培養(yang)基來(lai)培養(yang)細胞。     收(shou)到細(xi)胞後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。