hepg2.2.15人肝癌細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)研研究使用、不(bu)得用(yong)於臨床診(zhen)斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培養(yang)液，用 PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置顯微鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消化，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然後將(jiang)懸液轉移至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然(ran)後按 1:2 比(bi)例進行(xing)分瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱中培養(yang)；

2、細胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培養(yang)液，用 PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置顯微鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru)培(pei)養(yang)液終

止消化，輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然後將(jiang)懸液轉移至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞(bao)，並放置於凍存(cun)管中；

4）先(xian)將(jiang)細胞(bao)凍存(cun)管放置於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其移入-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中進行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1) 復(fu)蘇細胞(bao)：以下(xia)細胞(bao)培養(yang)凍存(cun)處理僅(jin)供(gong)參考，具(ju)體(ti)操作步驟以隨貨產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書為主。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的凍存(cun)管在 37℃水(shui)浴中迅速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件下(xia)離心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹勻(yun)。然後將(jiang)所有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶中培養(yang)過夜(ye)（或將(jiang)細胞(bao)懸液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第(di)二天(tian)換(huan)液並檢查(zha)細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如果(guo)細(xi)胞密(mi)度(du)達 80%-90%，即可(ke)進行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離子的PBS潤(run)洗(xi)細胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中，使消化液浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培養(yang)瓶置於37℃培養(yang)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定(ding)），然(ran)後在顯微鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞(bao)消化情況，若細胞大部分變(bian)圓(yuan)並脫落(luo)，迅速(su)拿回操作臺，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養(yang)瓶後加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消化。輕輕打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸液按1:2比(bi)例分到新的含8 mL培養(yang)基(ji)的新皿(min)中或者瓶中，置於培養(yang)箱中培養(yang)。 3) 細胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長狀態良好(hao)時，可(ke)進行(xing)細胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為例；a、收集細(xi)胞及細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝入無菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm條件下(xia)離心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清液，用PBS清洗壹(yi)遍，棄盡PBS，進行(xing)細胞計(ji)數。

b、根據細胞(bao)數量(liang)加入(ru)無(wu)血清(qing)細胞(bao)凍存(cun)液，使細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混勻(yun)，每支凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意凍存(cun)管做(zuo)好(hao)標識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管放入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管位置以便(bian)下(xia)次拿取。

公司(si)正(zheng)在出(chu)售的產(chan)品(pin)：

MSH γ1： 促(cu)黑(hei)細(xi)胞(bao)激(ji)素γ1抗體(ti) 人惡(e)性多發(fa)性畸胎(tai)瘤(liu)細胞(bao);ERA-2

RSC96大(da)鼠(shu)雪旺(wang)細(xi)胞(bao) Schwann cells in RSC96 rats DMEM+10%FBS 大鼠(shu)合(he)成(cheng)酶(NOS)ELISA試(shi)劑盒 PIV IgM 付流感病毒 IgM(間接法(fa)二步法(fa))

PKM2： 小(xiao)鼠(shu)抗酸(suan)激(ji)酶-M2抗體(ti) FCGR1 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) CD64 / FCGR1 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽性對(dui)照(zhao))

肝實質(zhi)細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次方(fang)(1ml) 大鼠(shu)合(he)成(cheng)酶(NOS)ELISA 試(shi)劑盒 EHF IgG 流行(xing)性出(chu)血熱(re)病毒 IgG(間接法(fa)二步法(fa))

PABP (Methyl Arg455/460)： 甲基(ji)化(hua)多聚腺(xian)苷(gan)酸(suan)結合(he)蛋(dan)白抗體(ti) BALB/C小(xiao)鼠(shu)肝上皮(pi)細(xi)胞;BNL 1ME A.7R.1

人膀(pang)胱(guang)上皮(pi)永(yong)生(sheng)化細(xi)胞;SV-HUC-1 人間變性淋巴(ba)瘤(liu)激(ji)酶(ALK)ELISA 試(shi)劑盒 Trk B 神經(jing)生(sheng)長因(yin)子受體(ti)的壹(yi)種(抗原(yuan)) 0.5mg

HMGCL： 三羥基(ji)基(ji)裂解酶抗體(ti) 雙(shuang)位(wei)點(dian)HC-kit受體(ti)細(xi)胞(bao)株(zhu);DMF7

HMy2.CIR(人B淋(lin)巴(ba)母細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 mOPC, 小(xiao)鼠(shu)少突(tu)膠(jiao)質(zhi)前體(ti)細(xi)胞(bao) 人皮(pi)膚(fu)成纖維細(xi)胞(bao);HSAS4 人甲狀腺(xian)素(su)抗體(ti)(TAb)ELISA 試(shi)劑盒 GDF8/MSTN(growth differntiation factor 8) 重組(zu)生(sheng)長分化(hua)因(yin)子8/肌肉(rou)抑(yi)制素 0.1mg

HDL： 高密(mi)度(du)脂(zhi)蛋白(bai)抗體(ti) 人海(hai)馬趾神(shen)經(jing)細胞總RNAHN-h NA

TE-11(人食(shi)管癌細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 人甲狀腺(xian)素(su)(T4)ELISA 試(shi)劑盒 Trk B 神經(jing)生(sheng)長因(yin)子受體(ti)的壹(yi)種(抗原(yuan)) 0.5mg

hepg2.2.15人肝癌細(xi)胞(bao)phospho-P70 S6 Kinase beta (Thr228)： 0酸(suan)化核(he)糖(tang)體(ti)S6蛋(dan)白(bai)激(ji)酶抗體(ti) CM-M118小(xiao)鼠(shu)虹(hong)膜(mo)色素(su)上(shang)皮(pi)細(xi)胞培養(yang)基(ji)100mL

MDA-MB-436人腺(xian)癌(ai)細胞(bao) MDA-MB-436 human breast adenocarcinoma cells L-15培(pei)養(yang)基(ji)+10%FBS 大(da)鼠(shu)胱天(tian)蛋(dan)白(bai)酶9(Casp-9)ELISA 試(shi)劑盒 MMP-2/Gelatinase A  大鼠(shu)基(ji)質(zhi)金屬(shu)蛋白(bai)酶2/明(ming)膠(jiao)酶A 96T

PROK1/PRK1/EG-VEGF： 內分泌(mi)腺(xian)衍(yan)生(sheng)血管內皮(pi)生(sheng)長因(yin)子抗體(ti) RBP4 Others Human 人 RBP4 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽性對(dui)照(zhao))

中國(guo)倉(cang)鼠(shu)卵巢(chao)細胞K1(亞系克隆);CHO-K1 大鼠(shu)胱天(tian)蛋(dan)白(bai)酶8(Casp-8)ELISA試(shi)劑盒 Cath Ab(Human Cathepsin Antibodies)  人組(zu)織蛋白酶抗體(ti) 豬(zhu)源細(xi)胞

小(xiao)鼠(shu)雪旺(wang)細(xi)胞(bao)(MSC)(5×105) MDA-MB-231, 人癌(ai)細(xi)胞 Human 大鼠(shu)胱天(tian)蛋(dan)白(bai)酶8(CASP8)ELISA試(shi)劑盒 LF/LTF Ab-Ig(Human Lactoferrin antibody IgG)  人乳(ru)鐵傳(chuan)遞蛋(dan)白(bai)/乳(ru)鐵蛋(dan)白抗體(ti) 星(xing)形細胞(bao)培養(yang)基(ji)SteCM-prf

三、培養(yang)註意(yi)事項(xiang) 

1. 收到細胞(bao)後首(shou)先(xian)觀察細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否有(you)漏(lou)液、渾濁(zhuo)等現(xian)象，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象 發(fa)生(sheng)請及(ji)時和我們聯系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了解(jie)細胞(bao)相關(guan)信息(xi)，如細胞(bao)形態、所用培養(yang)基(ji)、血清(qing)比例、所需(xu) 細胞因(yin)子等，確(que)保(bao)細(xi)胞培養(yang)條件壹(yi)致(zhi)，若由(you)於培(pei)養(yang)條件不(bu)壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題，責(ze)任由(you) 客(ke)戶自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭(shi)細胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯微鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞(bao)狀態。因運輸(shu)問題，部(bu)分細(xi)胞(bao)由於(yu)溫度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰(peng)亡(wang)破碎(sui)形成碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞(bao)狀態後，75%酒精(jing)消毒瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於 37℃培養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞可(ke)以消化，懸浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接混勻(yun)收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的培養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細(xi)胞，並接種到新的培養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中，置於培養(yang)箱中進行(xing)培養(yang)。

5. 請客(ke)戶用(yong)相(xiang)同(tong)條件的培養(yang)基(ji)用(yong)於細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶收到細胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾張(zhang)細胞(bao)照(zhao)片，記錄細(xi)胞(bao)狀態，便(bian)於(yu)和我司(si)技(ji)術部溝通(tong) 交(jiao)流。由於(yu)運輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏感細胞會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的情況，請及時和我們聯系，告知細胞(bao) 的具(ju)體(ti)情(qing)況，以便(bian)我(wo)們的技(ji)術人員(yuan)跟蹤回訪直(zhi)至問題解(jie)決(jue)。

7. 該細胞(bao)僅供(gong)科(ke)研使用。

8. 備註：運輸(shu)用的培養(yang)基(ji) (灌(guan)液培養(yang)基(ji)) 不(bu)能再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，請換(huan)用(yong)按照(zhao)說(shuo)明(ming)書細胞(bao)培 養(yang)條件新(xin)配(pei)制的培養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細胞(bao)。     收到細胞(bao)後第(di)壹(yi)次傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。