HEPA1-6+LUC小(xiao)鼠(shu)肝癌細胞熒光(guang)素(su)酶標記(ji)

公(gong)司產品僅(jin)供科(ke)研研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於(yu)臨床(chuang)診斷(duan)！

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終(zhong)止(zhi)消化(hua)，再(zai)輕輕吹打(da)細(xi)胞使之脫落，然後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸，然後(hou)按(an) 1:2 比例(li)進行(xing)分瓶傳(chuan)代，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培養(yang)液(ye)終(zhong)

止(zhi)消化(hua)，輕(qing)輕吹打(da)細(xi)胞使之脫落，然後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適量的凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞(bao)，並放置於(yu)凍存管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍存管放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進行(xing)長期保存。使用(yong)程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇細胞：以下細(xi)胞(bao)培養凍(dong)存處理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考，具體操(cao)作步驟以隨(sui)貨產品說(shuo)明書為主。將(jiang)含(han)有1 mL細胞(bao)懸液(ye)的凍存管在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心3 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)含適(shi)量培養基的培養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養過(guo)夜（或將細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培(pei)養過(guo)夜）。第(di)二天換(huan)液(ye)並檢查細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細胞傳代：如果(guo)細胞(bao)密度達(da) 80%-90%，即可進行(xing)傳代培養(yang)。

a、棄去(qu)培養上(shang)清(qing)，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子的PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將培養瓶置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情況(kuang)而(er)定(ding)），然後(hou)在(zai)顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞消化(hua)情(qing)況(kuang)，若細胞(bao)大部(bu)分變圓(yuan)並脫落，迅(xun)速拿回操(cao)作臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化(hua)。輕(qing)輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸液(ye)按(an)1:2比例(li)分到新(xin)的含8 mL培(pei)養基(ji)的新皿中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時(shi)，可(ke)進行(xing)細胞凍存。下面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心4 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計(ji)數(shu)。

b、根據細胞數(shu)量加入(ru)無血(xue)清(qing)細(xi)胞凍存液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支(zhi)凍存管凍(dong)存1mL細胞(bao)懸液(ye)，註(zhu)意凍存管做(zuo)好標(biao)識(shi)。將凍存管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存。記(ji)錄凍(dong)存管位(wei)置以便(bian)下次拿取。

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的產品：

HSV 1： 神(shen)經(jing)毒性因子(zi)ICP34.5(人單皰(pao)疹病毒Ⅰ型)抗體 QSG-7701細胞，肝(gan)細胞(bao) 人結直腸(chang)腺(xian)癌(ai)上(shang)皮細(xi)胞(bao),DLD-1細(xi)胞 CM-R053大鼠(shu)卵(luan)巢上(shang)皮細(xi)胞(bao)培(pei)養基100mL

ALPI Others Human 人 Alkaline Phosphatase / ALPI 人細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性對照(zhao)) 大鼠(shu)三葉因子(zi)2(TFF2)ELISA試(shi)劑(ji)盒 ASMA  大鼠(shu)抗平(ping)滑(hua)肌(ji)抗(kang)體 人視網(wang)膜色素(su)上(shang)皮細(xi)胞(bao)HRPEpiC

P3X63Ag8.653小(xiao)鼠(shu)骨髓瘤(liu)細胞(bao) Mouse myeloma cell line P3X63Ag8.653 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠(shu)三葉因子(zi)1(TFF1)ELISA試(shi)劑(ji)盒 NF-KapB p65  大鼠(shu)核因子(zi)κB亞基(ji)p65親(qin)和肽 96T

NPAS3： 神(shen)經(jing)細(xi)胞(bao)PAS結構域蛋(dan)白(bai)3抗(kang)體 CSF2RA Others Human 人 GM-CSFR 人細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性對照(zhao))

CM-R092大(da)鼠(shu)關節軟(ruan)骨細胞(bao)培養(yang)基100mL 大鼠(shu)三0酸(suan)腺苷(gan)(ATP)ELISA試(shi)劑(ji)盒 ADAM8(Mouse A Disintegrin And Metalloprotease 8)  小(xiao)鼠(shu)解(jie)整合素(su)樣(yang)金(jin)屬(shu)蛋(dan)白(bai)酶8 96T

IL-29/IFNL1： 白(bai)細(xi)胞(bao)介素(su)29抗(kang)體 卵(luan)巢微(wei)血(xue)管(guan)內皮細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)

CSF1 Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小(xiao)鼠(shu) M-CSF / CSF-1 蛋白 人B-淋巴細(xi)胞(bao)趨(qu)化(hua)因子(zi)1(BLC-1/CXCL13)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 XIAP(X-linked Inhibitor of Apoptosis Protein) X-連鎖雕亡蛋白(bai)/性連鎖雕亡抑制(zhi)蛋白抗(kang)原 0.5mg

IL-22BP/IL22RA2： 白(bai)介素(su)22受體結合蛋白抗(kang)體 OPTN Others Human 人 Optineurin / OPTN 桿狀(zhuang)病毒-昆(kun)蟲(chong)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對照(zhao))

人臍靜脈(mai)內皮細(xi)胞(bao)培(pei)養基 100mL 人BH3結構域雕(diao)亡誘導(dao)蛋(dan)白(bai)(Bid)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 XAF1(XIAP-associated factor 1) XIAP相關(guan)因子(zi)1雕亡抑制(zhi)蛋白抗(kang)原 0.5ml

IRAK4： 白(bai)介素(su)-1受體相關激(ji)酶4抗體 人臍靜脈(mai)平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞 人胚肺(fei)細胞，NCI-H1563[H1563]細(xi)胞(bao) MLTC-1(間質細胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao))

HEPA1-6+LUC小(xiao)鼠(shu)肝癌細胞熒光(guang)素(su)酶標記(ji)phospho-Rb (Ser780)： 0酸(suan)化(hua)成視(shi)網(wang)膜細胞(bao)瘤抑癌(ai)蛋白抗(kang)體 人肺癌(ai)細胞;A549 [A-549]

CL-0078EL4(小(xiao)鼠(shu)淋巴瘤(liu)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2 大(da)鼠(shu)白介素(su)1β(IL-1β)ELISA試(shi)劑(ji)盒 MCT(Human mast cell tryptase)  人肥大(da)細(xi)胞(bao)類 96T

RGS2： G蛋(dan)白(bai)信號轉(zhuan)導(dao)調(tiao)節(jie)因子(zi)2抗體 DPP4 Others Human 人 DPPIV 人細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性對照(zhao))

AsoFectagen?星(xing)形細胞轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)盒 大鼠(shu)白介素(su)1β(IL1β)ELISA試(shi)劑(ji)盒 DT(Human dopachrome tautomerase)  人多巴色素(su)異(yi)構(gou)酶 96T

Retinoid X receptor： 核受體RXRα抗體 草魚腎細胞(bao);GIK

三(san)、培(pei)養(yang)註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)首(shou)先觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述現象(xiang) 發(fa)生請及(ji)時(shi)和我們聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀細胞說明(ming)書，了(le)解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信息，如細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用(yong)培養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因子(zi)等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條件壹(yi)致，若由(you)於(yu)培養(yang)條件(jian)不壹(yi)致而(er)導(dao)致細胞(bao)出(chu)現問題，責(ze)任由 客戶自行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀態(tai)。因運輸問題，部(bu)分細胞(bao)由於(yu)溫度 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰亡破碎(sui)形成碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消毒瓶壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可以消化(hua)，懸浮細胞(bao)直接(jie)混勻(yun)收集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培養(yang)基重(zhong)懸 細胞(bao)，並接種到新(xin)的培養(yang)瓶或培養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱中(zhong)進行(xing)培養。

5. 請客戶(hu)用(yong)相同條(tiao)件的培養(yang)基用(yong)於(yu)細胞(bao)培養(yang)。

6. 建議客戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞狀態(tai)，便(bian)於(yu)和我司技(ji)術部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運輸的原因，個(ge)別(bie)敏感細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現不穩(wen)定的情況(kuang)，請及(ji)時(shi)和我們聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的具體情況(kuang)，以便(bian)我們的技(ji)術人員跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直至(zhi)問題解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備註(zhu)：運輸用(yong)的培養(yang)基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養(yang)基(ji)) 不能(neng)再(zai)用(yong)來培養(yang)細胞(bao)，請換用(yong)按(an)照(zhao)說明書細(xi)胞(bao)培 養(yang)條件新配制的培養(yang)基來培養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)第(di)壹(yi)次傳(chuan)代建議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代就是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿。