HCT-8人結直(zhi)腸(chang)癌(ai)癌(ai)細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產品僅(jin)供(gong)科(ke)研研究使(shi)用(yong)、不得用(yong)於臨床(chuang)診(zhen)斷！

1、細胞(bao)傳代：

1）細胞(bao)生長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培養液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置顯微鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入 5ml 培養

液終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞(bao)使之(zhi)脫落，然(ran)後將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上清，沈澱(dian)細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養基重(zhong)懸，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行分(fen)瓶傳代，最(zui)後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養箱中(zhong)培養；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培養液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置顯微鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入培養液終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞(bao)使之(zhi)脫落，然(ran)後將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細胞(bao)凍(dong)存管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移(yi)入-80℃過夜，24h 後轉(zhuan)入液氮(dan)中(zhong)進行長(chang)期保(bao)存。使(shi)用(yong)程序

降溫(wen)盒(he)可直(zhi)接放(fang)入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培養操作

1) 復(fu)蘇細胞(bao)：以下(xia)細胞(bao)培養凍(dong)存處(chu)理(li)僅供(gong)參考，具(ju)體操作步(bu)驟(zhou)以隨貨產品說(shuo)明(ming)書為主。將含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液的凍(dong)存管(guan)在 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養基混(hun)合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)3 min，棄去上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後吹勻。然(ran)後將所有(you)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入含適(shi)量培(pei)養基的培養瓶中(zhong)培養過夜（或將細胞(bao)懸液加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加入約(yue)8 mL培養基，培(pei)養過夜）。第二天(tian)換(huan)液並(bing)檢(jian)查細(xi)胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳代：如果細胞(bao)密度達 80%-90%，即(ji)可進行傳代培養。

a、棄去培(pei)養上清，用(yong)不含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液浸潤所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將培養瓶置於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞(bao)情況(kuang)而(er)定），然(ran)後在顯微鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若細胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿回(hui)操作臺(tai)，輕(qing)敲幾下(xia)培養瓶後加(jia)2-3ml培養基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後裝入無菌離心管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培養液後吹勻。

c、將細胞(bao)懸液按(an)1:2比(bi)例(li)分(fen)到新的含8 mL培(pei)養基的新皿(min)中(zhong)或者瓶中(zhong)，置於(yu)培養箱中(zhong)培養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞(bao)生長狀態良好時(shi)，可進行細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面 T25 瓶為例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養液，裝入無菌離心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)4 min，棄去上清液，用(yong)PBS清洗壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據細胞(bao)數量加(jia)入無血清細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使(shi)細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好標識(shi)。將凍(dong)存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入液氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記錄凍(dong)存管(guan)位置(zhi)以便下(xia)次拿(na)取。

公(gong)司(si)正(zheng)在出(chu)售的產品：

CST7 Others Mouse 小鼠 Cystatin 7 / CST7 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對照(zhao)) 大鼠(shu)2(IGF-2)ELISA試劑(ji)盒(he) RSV IgM 合(he)胞(bao)病(bing)毒 IgM(間接法(fa)二步(bu)法(fa))

MEIS1： 同(tong)源(yuan)盒(he)蛋白(bai)Meis1抗(kang)體 人喉癌(ai)上皮細(xi)胞(bao);Hep-2

NRK-52E大鼠(shu)腎(shen)細(xi)胞(bao) In NRK-52E rat kidney cells DMEM培養基+5%FBS 大鼠(shu)2(IGF2)ELISA試劑(ji)盒(he) ECV IgG 艾柯(ke)病(bing)毒 IgG(間接法(fa)二步(bu)法(fa))

MAOA： 單(dan)氧(yang)化(hua)酶(mei)A抗(kang)體 IL7R Others Human 人 IL7Rα / CD127 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對照(zhao))

角(jiao)膜上皮細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) 大鼠(shu)2(IGF-2)ELISA 試劑(ji)盒(he) ECV IgM 艾柯(ke)病(bing)毒 IgM(間接法(fa)二步(bu)法(fa))

U-2 OS細(xi)胞(bao)，人骨(gu)肉瘤細胞(bao) 黃綠青(qing)黴(mei) 人正(zheng)常細胞(bao);Hs 578Bst 人結腸(chang)癌(ai)抗(kang)原(CCA)ELISA 試劑(ji)盒(he) CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha) 鈣(gai)/鈣(gai)調(tiao)素依(yi)賴(lai)蛋(dan)白(bai)激(ji)酶(mei)2α抗(kang)原 0.5mg

H-2Dd： I類(lei)組(zu)織(zhi)相容性H-2抗(kang)原D-Dalpha鏈(lian)抗(kang)體 HA Others H5N1 甲型(xing)流(liu)感(gan) H5N1 (A/duck/Laos/3295/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對照(zhao))

EB病(bing)毒轉化(hua)的人B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao);KMY0922 人窖蛋(dan)白Caveolin1(Cav-1)ELISA 試劑(ji)盒(he) Camk1g(Calcium/calmodulin dependent protein kinase IG) 鈣(gai)/鈣(gai)調(tiao)蛋白依(yi)賴(lai)蛋(dan)白(bai)激(ji)酶(mei)IG抗(kang)原 0.5mg

HEATR5A： HEAT重(zhong)復(fu)內(nei)含蛋(dan)白5A蛋(dan)白抗(kang)體 人胚胎(tai)心(xin)臟成纖維樣(yang)細胞(bao);HEH2

HIC(人(ren)小腸癌(ai)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 小鼠神經(jing)幹細(xi)胞(bao)(EGFP標記) 人胚胎(tai)，皮(pi)膚，肌(ji)肉;M-22 人角(jiao)質(zhi)素(KS)ELISA 試劑(ji)盒(he) TGF- Beta1 (Ttansforming Growth Factor – Beta1) 轉移(yi)生長因(yin)子–β1(抗(kang)原) 0.5mg

HCT-8人(ren)結直(zhi)腸(chang)癌(ai)癌(ai)細(xi)胞(bao)phospho-P53(Ser15)： 0酸(suan)化(hua)抑制(zhi)基因(yin)P53抗(kang)體 S100B Others Human 人 S100B 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對照(zhao))

豚(tun)鼠皮膚(fu)細胞(bao);GP-S1 大鼠(shu)和肽素(copeptin)ELISA試劑(ji)盒(he) ICA(Human islet cell antibody)  人胰(yi)島細(xi)胞(bao)抗(kang)體 雪(xue)羊皮膚細胞(bao);SSHS1

小鼠神經(jing)皮質(zhi)細(xi)胞(bao)(MN-c)(1×106) LncaP, 人前(qian)列(lie)腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao) Human 大鼠(shu)含(han)血管性(xing)血友(you)病(bing)因(yin)子(zi)A域(yu)蛋(dan)白1(vWA1)ELISA試劑(ji)盒(he) M-CSF  大鼠(shu)巨噬(shi)細胞(bao)集落刺(ci)激因子(zi) 96T

phospho-P53(Ser37)： 0酸(suan)化(hua)抑制(zhi)基因(yin)P53抗(kang)體 上皮細(xi)胞(bao)生長添加物(wu)EpiCGS

CTF1 Protein Human 重(zhong)組(zu)人(ren) Cardioophin-1 / CTF1 蛋(dan)白 (Fc 標簽(qian)) 大鼠(shu)含(han)纈酪肽蛋白(bai)(VCP)ELISA試劑(ji)盒(he) MDC/CCL22  大鼠(shu)巨噬(shi)細胞(bao)來源(yuan)的趨化(hua)因子(zi) 96T

三(san)、培(pei)養註(zhu)意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到細胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完好(hao)，培養液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等現象，若有(you)上述現(xian)象 發(fa)生請及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀(du)細胞(bao)說明(ming)書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相關(guan)信(xin)息，如細胞(bao)形態、所用(yong)培養基、血清比(bi)例(li)、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因子(zi)等，確保(bao)細胞(bao)培養條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若由(you)於(yu)培養條(tiao)件不壹(yi)致(zhi)而(er)導致(zhi)細胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，責任由(you) 客戶(hu)自(zi)行承擔。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭細胞(bao)瓶表面(mian)，顯微鏡下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀態。因運(yun)輸(shu)問題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫度 變化(hua)及劇(ju)烈碰亡破(po)碎(sui)形成碎片，是(shi)正(zheng)常現象。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞(bao)狀態後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒瓶壁將 T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞(bao)可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸浮細(xi)胞(bao)直接(jie)混(hun)勻收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培養基重(zhong)懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種到新的培養瓶或培(pei)養皿中(zhong)，置於(yu)培養箱中(zhong)進行培(pei)養。

5. 請客戶(hu)用(yong)相同(tong)條(tiao)件的培養基用(yong)於細胞(bao)培養。

6. 建議客戶(hu)收(shou)到細胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各拍幾張細胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄細胞(bao)狀態，便於和我(wo)司(si)技術(shu)部(bu)溝(gou)通 交流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的原因(yin)，個別(bie)敏(min)感(gan)細胞(bao)會(hui)出現(xian)不(bu)穩定的情況(kuang)，請及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯系(xi)，告(gao)知細(xi)胞(bao) 的具體情況(kuang)，以(yi)便我(wo)們(men)的技術(shu)人員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至(zhi)問題解決。

7. 該細胞(bao)僅供(gong)科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的培養基 (灌(guan)液培(pei)養基) 不(bu)能再用(yong)來培養細胞(bao)，請換(huan)用(yong)按照說明(ming)書細胞(bao)培 養條(tiao)件新配(pei)制(zhi)的培養基來培養細胞(bao)。     收(shou)到細胞(bao)後第壹(yi)次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個10cm 皿。