HEC-1-B人(ren)子(zi)宮膜腺(xian)癌細胞(bao)

公(gong)司產(chan)品僅供(gong)科(ke)研研究使用(yong)、不得(de)用於臨床(chuang)診斷(duan)！

1、細(xi)胞傳代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆蓋培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下(xia)觀察，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養

液終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再輕輕吹打細胞使之(zhi)脫落，然(ran)後將(jiang)懸液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細胞用 1-2ml 培養基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至覆蓋培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下(xia)觀察，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培養液終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹打細胞使之(zhi)脫落，然(ran)後將(jiang)懸液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於凍存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細胞(bao)凍存管(guan)放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其移入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉入(ru)液氮(dan)中(zhong)進行長期保(bao)存。使(shi)用(yong)程序

降(jiang)溫盒(he)可直接放入(ru)-80℃。

二、細胞培養操作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以下細胞(bao)培養凍存處(chu)理(li)僅供(gong)參(can)考，具體操作(zuo)步驟以隨(sui)貨產(chan)品說(shuo)明書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍(dong)存管(guan)在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速搖晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培養基混合(he)均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培養基後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所有細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適(shi)量(liang)培養基的(de)培養瓶(ping)中(zhong)培養過夜(ye)（或將(jiang)細胞(bao)懸液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養基，培養過夜(ye)）。第(di)二天換液並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果細胞密度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進行傳代培養。

a、棄去培養上(shang)清(qing)，用不含鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤(run)洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液浸潤(run)所有細(xi)胞，將(jiang)培養瓶(ping)置(zhi)於37℃培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞(bao)情況而(er)定），然(ran)後在顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情況，若細(xi)胞(bao)大部分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫落，迅(xun)速拿回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕輕打勻後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培養液後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸液按(an)1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的含8 mL培養基的(de)新(xin)皿(min)中或者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可進行細胞凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞及(ji)細胞(bao)培養液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄盡PBS，進行細胞計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細胞數(shu)量加(jia)入(ru)無(wu)血清細(xi)胞凍(dong)存液，使細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每支(zhi)凍存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸液，註意凍存管(guan)做好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲存。記錄凍(dong)存管(guan)位置(zhi)以便下次(ci)拿取(qu)。

公司正在出(chu)售的(de)產(chan)品：

Rhesus antibody Rh DVL2 蓬亂蛋(dan)白(bai)2抗(kang)體 EPD3 Others Human 人 EPD3 / PDase3 / CD39L3 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照)

大鼠(shu)大隱(yin)靜(jing)脈(mai)內皮(pi)細胞(bao)培養基 100mL 大鼠(shu)1(IGF-1)ELISA試劑(ji)盒(he) ADV IgG III 腺(xian)病毒(du) IgG Ⅲ型(間(jian)接法(fa)二(er)步法(fa))

MIG7： 富(fu)含(han)半胱(guang)酸蛋白(bai)質MIG7抗(kang)體 T24, 人膀胱(guang)癌細胞 胚(pei)癌細(xi)胞,Pcc4細(xi)胞 NCI-H1299(人肺(fei)癌細(xi)胞(bao))

TNFRSF11A Others Rat 大鼠(shu) TNFRSF11A 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對照) 大鼠(shu)1(IGF1)ELISA試劑(ji)盒(he) ADV IgM III 腺(xian)病毒(du) IgM Ⅲ型(間(jian)接法(fa)二(er)步法(fa))

MOS： 原癌基(ji)因(yin)絲(si)酸/蘇酸蛋白(bai)激(ji)酶MOS抗(kang)體 人皮(pi)膚黑(hei)色素瘤細胞(bao);SK-MEL-1

PTH Others Human 人 PTH / PTH1 / Parathyroid Hormone 人細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照) 人(ren)膠質纖維酸性蛋白(bai)(GFAP)ELISA試劑(ji)盒(he) CAP2(Adenylyl cyclase-associated protein 2) 環化(hua)酶相(xiang)關(guan)蛋白(bai)CAP-2抗(kang)原 0.5mg

H5N1 Hemagglutinin： A型流(liu)感病(bing)毒(du)H5N1凝集(ji)素(su)抗(kang)體 CL-0336FC33(人胚(pei)胎(tai)腎細胞(bao)(Asp-2基(ji)因(yin)修(xiu)飾))5×106cells/瓶(ping)×2

SP20細胞，人骨肉(rou)瘤細胞(bao) 圓(yuan)弧(hu)青(qing)黴(mei) 人肺(fei)成纖維細(xi)胞(bao);HFL1 人(ren)膠質細胞系來(lai)源(yuan)的(de)神(shen)經營養因(yin)子(zi)(GDNF)ELISA 試劑(ji)盒(he) TGF beta 2 Propeptide 轉移生(sheng)長因(yin)子(zi)–β2前(qian)體肽(tai) 0.5mg

H1N1++H3N2 nucleocapsid protein： A型流(liu)感病(bing)毒(du)核衣(yi)殼(ke)蛋白(bai)抗(kang)體 HA Others H1N2 甲型流(liu)感 H1N2 (A/swine/Guangxi/13/2006) 血凝素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照)

EB病毒(du)轉化的(de)人B淋巴細胞;KMY0911 人膠原凝集(ji)素(su)(Collectin)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) TGF- Beta3 (Ttansforming Growth Factor – Beta3) 轉移生(sheng)長因(yin)子(zi)–β3(抗(kang)原) 0.5mg

HEC-1-B人子宮膜腺(xian)癌細胞(bao)敘利(li)亞倉鼠(shu)腎細(xi)胞(bao);BHK-21 大鼠(shu)過氧(yang)化物酶體增殖因(yin)子(zi)活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑(ji)盒(he) MIP-2  大鼠(shu)巨噬(shi)細胞炎性蛋白(bai)2 96T

phospho-P53(Thr81)： 0酸化抑制基因(yin)P53抗(kang)體 盤羊皮(pi)膚細(xi)胞;ASHS2

小鼠(shu)顆(ke)粒(li)神經元(MGC)(1×106) 6-10B, 人(ren)鼻咽癌(ai)細胞(bao)系 Human 大鼠(shu)過氧(yang)化物酶體增殖因(yin)子(zi)活化受體γ( PPAR-γ)ELISA 試劑(ji)盒(he) MYO/MB(Mouse Myoglobin)  小鼠(shu)肌紅(hong)蛋(dan)白(bai) 96T

p73 alpha： p53相關(guan)蛋白(bai)P73α抗(kang)體 成纖維細(xi)胞(bao)生(sheng)長添加(jia)物FGS

SCG2 Protein Human 重組人 SCG2 / Secretogranin II 蛋白(bai) (His 標(biao)簽(qian)) 大鼠(shu)過氧(yang)化物酶體增殖物激(ji)活受體γ輔(fu)激(ji)活因(yin)子(zi)1α(PPARγC1α)ELISA試劑(ji)盒(he) AKA(Human Anti-keratin antibody)  人抗(kang)角蛋(dan)白(bai)抗(kang)體 IL22RA2 Others Rat 大鼠(shu) IL22BP / L22RA2 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對照)

三(san)、培養註意事項 

1. 收(shou)到細(xi)胞後首先(xian)觀察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否完(wan)好(hao)，培養液是否有(you)漏液、渾濁(zhuo)等現象，若有(you)上(shang)述現象 發(fa)生(sheng)請及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細胞(bao)說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信息(xi)，如(ru)細胞形態(tai)、所用培養基、血清比(bi)例(li)、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等，確(que)保細(xi)胞培養條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若由(you)於(yu)培養條(tiao)件(jian)不壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題，責(ze)任由(you) 客戶自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭細胞瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下觀察細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸問(wen)題，部分(fen)細胞由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎(sui)形成碎片，是(shi)正(zheng)常(chang)現象。觀察好(hao)細胞狀態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可以消(xiao)化，懸浮細胞(bao)直接混勻(yun)收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培養基重(zhong)懸(xuan) 細胞，並(bing)接種到新(xin)的培養瓶(ping)或培養皿(min)中，置(zhi)於培養箱(xiang)中(zhong)進行培養。

5. 請客戶用(yong)相(xiang)同條(tiao)件(jian)的培養基用(yong)於(yu)細胞培養。

6. 建議(yi)客戶收(shou)到細(xi)胞後前(qian) 3 天各拍幾張(zhang)細胞(bao)照片(pian)，記錄細(xi)胞狀態(tai)，便(bian)於和我(wo)司技術(shu)部溝通(tong) 交流(liu)。由(you)於(yu)運輸的原因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感細(xi)胞會(hui)出(chu)現不(bu)穩(wen)定的(de)情況，請及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系，告(gao)知細胞 的具體情況，以便我們(men)的(de)技(ji)術(shu)人員跟蹤(zong)回訪(fang)直至問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供(gong)科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用的(de)培養基 (灌(guan)液培養基) 不(bu)能再用來(lai)培養細胞(bao)，請換用(yong)按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)細(xi)胞培 養條(tiao)件(jian)新配(pei)制的培養基來(lai)培養細胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞後第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。