Hs 815.Pl人(ren)胎盤(pan)細(xi)胞（有限(xian)細胞系）

公(gong)司(si)產品(pin)僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用、不(bu)得用於臨(lin)床診(zhen)斷！

1、細胞傳代(dai)：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的培養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯微鏡(jing)下觀察(cha)，待細胞回縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培養

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱細胞用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例進(jin)行分瓶傳代(dai)，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養(yang)箱中培養；

2、細(xi)胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的培養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯微鏡(jing)下觀察(cha)，待細胞回縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru)培養液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化，輕(qing)輕吹打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並(bing)放(fang)置於凍(dong)存(cun)管(guan)中；

4）先將(jiang)細(xi)胞凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入液(ye)氮(dan)中進(jin)行長(chang)期保存(cun)。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放(fang)入-80℃。

二、細胞培養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞：以(yi)下細胞培養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理僅(jin)供(gong)參考，具體(ti)操作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產品(pin)說明書為(wei)主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合均勻。在(zai)1000 rpm條件下離心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹勻。然(ran)後將(jiang)所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含適量培(pei)養(yang)基(ji)的培養瓶中培養過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第(di)二天換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查細胞密度。

2) 細胞傳代(dai)：如(ru)果細(xi)胞密度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去培(pei)養上(shang)清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤所有(you)細(xi)胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置於37℃培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞情況(kuang)而定），然(ran)後在(zai)顯微鏡(jing)下觀察(cha)細胞消(xiao)化情(qing)況，若細胞大部(bu)分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿回操作(zuo)臺，輕(qing)敲幾(ji)下培養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。輕(qing)輕打(da)勻後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹勻。

c、將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例分(fen)到新(xin)的含8 mL培養(yang)基(ji)的新(xin)皿中或者瓶中，置於培養(yang)箱(xiang)中培養。 3) 細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待細胞生長(chang)狀態(tai)良好(hao)時，可進(jin)行細胞凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶為(wei)例；a、收集細胞及(ji)細(xi)胞培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件下離心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行細胞計數。

b、根(gen)據細(xi)胞數量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻，每支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入液(ye)氮(dan)灌儲存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置以(yi)便(bian)下次拿(na)取。

公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售的產品(pin)：

Metallothionein 3： 金(jin)屬硫(liu)蛋(dan)白3抗體 TH Others Mouse 小鼠 TH / Tyrosine Hydroxylase 桿(gan)狀病(bing)毒-昆蟲細胞裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

大(da)鼠前(qian)脂(zhi)肪細(xi)胞培養(yang)基(ji) 100mL 大(da)鼠血(xue)小(xiao)板衍生生長(chang)因(yin)子(zi)B(PDGFB)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) MHB  小(xiao)鼠高(gao)鐵血紅(hong)蛋(dan)白 96T

MAP4K6： 原(yuan)活化(hua)蛋(dan)白激(ji)酶(mei)MAP4K6抗體 CaEs-17, 人食管(guan)癌(ai)細(xi)胞株 癌(ai)細胞,SHZ-88細胞 SJCRH30 [RC13; RMS 13; SJRH30](人骨(gu)髓橫(heng)紋(wen)肌(ji)肉(rou)癌細(xi)胞)

SHH Others Human 人(ren) SHH / Sonic hedgehog (aa 198-462) 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 大鼠血(xue)小(xiao)板衍生生長(chang)因(yin)子(zi)AB(PDGF-AB)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) LF/LTF (Rabbit Lactoferrin)  兔乳鐵傳遞蛋(dan)白/乳(ru)鐵蛋(dan)白 96T

MAP65： 擬(ni)南芥(jie)MAP65蛋(dan)白抗體 SV40轉染人成(cheng)骨(gu)細(xi)胞;hFOB 1.19

hCG alpha 4： 甲狀腺促(cu)進(jin)激(ji)素(su)alpha鏈(lian) 0.2ml

Rhesus antibody Rh C3c/Complement fragment 3c 補(bu)體片(pian)段(duan)C3c抗體 豬腎細胞;PK(15) 骨髓(sui)瘤細(xi)胞，FO細胞 G422細胞，KM小鼠腦(nao)神經(jing)膠質母(mu)細胞瘤瘤(liu)株

RNASE1 Others Human 人(ren) RNase A / Ribonuclease A / RNASE1 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 人基(ji)質金(jin)屬蛋(dan)白酶(mei)7(MMP-7)ELISA 試劑(ji)盒(he) CD10/CALLA (Neutral Endopeptidase) CD10抗原(yuan) 0.5mg

H7N9 NA： A型(xing)流(liu)感病(bing)毒H7N9凝集素(su)抗體 CL-0259BC-020(人癌細(xi)胞)5×106cells/瓶×2

HME1細(xi)胞，人黑色(se)素(su)瘤(liu)細(xi)胞 長(chang)雙歧(qi)桿(gan)菌 EB病毒轉化的人B淋巴細(xi)胞;Mao 人基(ji)質金(jin)屬蛋(dan)白酶(mei)5(MMP-5)ELISA 試劑(ji)盒(he) ZCWCC1(Zinc finger CW-type coiled-coil domain protein 1) ZCWCC1抗原(yuan) 0.5mg

Hs 815.Pl人(ren)胎盤(pan)細(xi)胞（有限(xian)細胞系）PAX2： 配(pei)對(dui)盒(he)基(ji)因(yin)2抗體 豬胚胎(tai)傳代(dai)細(xi)胞;ST

小(xiao)鼠心(xin)肌(ji)細(xi)胞(MCM)(1×106) QGY-7701, 人肝癌細(xi)胞 Human 大鼠骨(gu)成(cheng)型(xing)蛋(dan)白受體(ti)Ⅱ(BMPRⅡ)ELISA試(shi)劑盒(he) FLU A(Human Influenza viruses A)  人(ren)流(liu)感病(bing)毒A 96T

PAK2： p21激(ji)活(huo)激(ji)酶(mei)2抗體 星(xing)形(xing)細(xi)胞培養(yang)基(ji)SteCM

FLT3LG Protein Mouse 重(zhong)組小(xiao)鼠 FLT3L / Flt3 ligand 蛋(dan)白 (Fc 標(biao)簽) 大(da)鼠骨(gu)成(cheng)型(xing)蛋(dan)白受體(ti)Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA 試(shi)劑盒(he) uPA  大(da)鼠型(xing)纖(xian)溶酶原(yuan)激(ji)活(huo)物 96T

PLC beta 3： 0酯(zhi)酶Cβ3抗體 STX7 Others Human 人 STX7 / Syaxin 7 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

三(san)、培(pei)養註(zhu)意(yi)事(shi)項 

1. 收到細(xi)胞後首(shou)先(xian)觀察(cha)細胞瓶是(shi)否完(wan)好，培(pei)養液(ye)是(shi)否有漏(lou)液(ye)、渾濁等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述(shu)現象(xiang) 發(fa)生請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細(xi)胞說明書，了解細(xi)胞相關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細胞形(xing)態(tai)、所(suo)用培(pei)養基(ji)、血(xue)清(qing)比例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因(yin)子(zi)等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞培養(yang)條件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於培養(yang)條件不(bu)壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞出現(xian)問題，責任由 客(ke)戶自(zi)行承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞瓶表面(mian)，顯微鏡(jing)下觀察(cha)細胞狀態(tai)。因(yin)運輸問(wen)題，部分細胞由於溫度 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰亡破碎形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正常現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好細胞狀態(tai)後，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置於 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接混(hun)勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培養基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種到新(xin)的培養瓶或培(pei)養(yang)皿中，置於培養(yang)箱(xiang)中進(jin)行培養(yang)。

5. 請(qing)客戶用相(xiang)同(tong)條件的培養基(ji)用於細胞培養(yang)。

6. 建議客戶收到細(xi)胞後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾張(zhang)細胞照(zhao)片，記錄(lu)細胞狀態(tai)，便(bian)於和我(wo)司(si)技(ji)術部溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由於運輸的原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細胞會(hui)出(chu)現不穩定的情況，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告知細(xi)胞 的具體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的技術人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題解決。

7. 該細胞僅供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用的培養基(ji) (灌液(ye)培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能再(zai)用來(lai)培養(yang)細(xi)胞，請(qing)換用按(an)照(zhao)說明書細胞培 養(yang)條件新(xin)配制(zhi)的培養基(ji)來(lai)培養細胞。     收到細(xi)胞後第(di)壹(yi)次(ci)傳代(dai)建議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。