HPNE人(ren)胰腺導管細胞(bao)

公司產(chan)品(pin)僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究使用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

1、細胞(bao)傳(chuan)代：

1）細胞(bao)生長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打細胞(bao)使之脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比例(li)進(jin)行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代，最後放入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細胞(bao)凍存：

1）細胞(bao)生長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培養(yang)液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕(qing)吹打細胞(bao)使之脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍存管中(zhong)；

4）先將細胞(bao)凍存管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移入-80℃過(guo)夜，24h 後轉入液(ye)氮(dan)中進(jin)行長期(qi)保(bao)存。使用(yong)程(cheng)序

降溫盒(he)可直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞(bao)培養(yang)操作

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以下細胞(bao)培養(yang)凍存處理(li)僅(jin)供參(can)考，具體操作步驟以隨貨(huo)產品(pin)說(shuo)明書(shu)為(wei)主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍存管在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件下離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所有(you)細胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入含(han)適量培養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過(guo)夜（或將細胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二天換液(ye)並(bing)檢查(zha)細胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代：如果(guo)細胞(bao)密度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的PBS潤(run)洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所有(you)細胞(bao)，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞(bao)情(qing)況(kuang)而定(ding)），然(ran)後在(zai)顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)細胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細胞(bao)大(da)部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿回(hui)操作臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比例分(fen)到(dao)新的含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的新皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞(bao)凍存：待細胞(bao)生長狀(zhuang)態良(liang)好時，可(ke)進(jin)行細胞(bao)凍存。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件下離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據細胞(bao)數(shu)量加(jia)入(ru)無血(xue)清細胞(bao)凍存液，使細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存管凍存1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註意凍存管做(zuo)好標識(shi)。將(jiang)凍存管放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入液氮(dan)灌儲(chu)存。記錄凍存管位(wei)置(zhi)以便下次(ci)拿取。

三(san)、培養(yang)註意事(shi)項(xiang) 

1. 收到細胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是(shi)否有(you)漏液、渾濁(zhuo)等現象，若(ruo)有(you)上述現象 發(fa)生請及(ji)時和我們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞(bao)說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細胞(bao)相(xiang)關信息(xi)，如(ru)細胞(bao)形(xing)態、所(suo)用(yong)培養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例(li)、所需(xu) 細胞(bao)因(yin)子(zi)等，確保(bao)細胞(bao)培養(yang)條件壹致(zhi)，若由於培養(yang)條件不(bu)壹致(zhi)而導致細胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由 客戶自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)細胞(bao)狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部分細胞(bao)由於溫度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈碰亡破碎形成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正常現象。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞(bao)狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細胞(bao)可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞(bao)直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新的培養(yang)瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中進(jin)行培養(yang)。

5. 請客戶用(yong)相(xiang)同條件的培養(yang)基(ji)用(yong)於(yu)細胞(bao)培養(yang)。

6. 建議客戶收到細胞(bao)後(hou)前 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄細胞(bao)狀(zhuang)態，便於和我司技(ji)術(shu)部溝通 交流。由於運輸(shu)的原因(yin)，個(ge)別敏(min)感細胞(bao)會(hui)出現(xian)不(bu)穩定(ding)的情(qing)況(kuang)，請及(ji)時和我們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知細胞(bao) 的具體情(qing)況(kuang)，以便我們的技術(shu)人員跟(gen)蹤回(hui)訪直至問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅(jin)供科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備註：運輸(shu)用(yong)的培養(yang)基(ji) (灌液(ye)培養(yang)基(ji)) 不(bu)能再用(yong)來(lai)培養(yang)細胞(bao)，請換用(yong)按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)細胞(bao)培 養(yang)條件新配制的培養(yang)基(ji)來培養(yang)細胞(bao)。     收到細胞(bao)後(hou)第壹次(ci)傳代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司正(zheng)在(zai)出售(shou)的產品(pin)：

表皮(pi)角化(hua)細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml) 大(da)鼠(shu)血(xue)小(xiao)板(ban)膜(mo)糖(tang)蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA 試劑(ji)盒 Cobra venom factor,CVF  毒(du)蛇因(yin)子(zi) 96T

Phospho-Myt1(Ser83)： 0酸化(hua)髓鞘(qiao)轉(zhuan)錄因(yin)子(zi)1抗(kang)體 615小(xiao)鼠(shu)癌(ai)瘤(liu)株;Ca761

KP-N-NS(人(ren)腎上(shang)腺神(shen)經(jing)母(mu)細胞(bao)瘤(liu)細胞(bao)(腦轉(zhuan)移(yi))) 5×106cells/瓶(ping)×2 破(po)傷(shang)風(feng)桿菌/梭菌Closidium tetani 大(da)鼠(shu)血(xue)小(xiao)板(ban)激(ji)活(huo)因(yin)子(zi)(PAF)ELISA試(shi)劑(ji)盒 MUC5B  小(xiao)鼠(shu)粘蛋(dan)白/粘液(ye)素5B 96T

Mre11： DNA損傷(shang)關(guan)鍵蛋(dan)白Mre11抗體 CM-H029人(ren)臍(qi)帶單核(he)細胞(bao)培養(yang)基(ji)100mL

IFNW1 Protein Human 重組(zu)人 IFN omega 1 / IFNW1 蛋(dan)白 (His 標簽(qian)) 大(da)鼠(shu)血(xue)小(xiao)板(ban)活(huo)化因(yin)子(zi)(PAF)ELISA試(shi)劑(ji)盒 PRL (Rabbit prolactin)  兔(tu)子催乳素 96T

人(ren)惡性非霍(huo)奇金淋(lin)巴(ba)瘤(liu)患(huan)者(zhe)的自(zi)然(ran)殺(sha)傷(shang)細胞(bao);NK-92MI [NK92MI] 人(ren)肌(ji)養蛋白(dysophin)ELISA 試劑(ji)盒 CD38(human) CD38抗(kang)原(人) 0.5mg

HPL： 人(ren)胎盤(pan)泌(mi)乳素抗體 Sars結(jie)構(gou)蛋白表達株;293 001B

Hut-102(人(ren)皮(pi)膚T淋(lin)巴(ba)瘤(liu)細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 SKOV3/Taxol-25, 人(ren)卵巢(chao)癌(ai)耐(nai)藥細胞(bao)株 EB病(bing)毒(du)轉化的人B淋巴(ba)細胞(bao);KMY1022 人(ren)肌(ji)細胞(bao)生成素(MYOG)ELISA 試劑(ji)盒 CD36 CD36(多(duo)肽) 0.5mg

HSP27： 熱(re)休(xiu)克蛋(dan)白27抗體 人(ren)肺(fei)動(dong)脈內皮(pi)細胞(bao)cDNAHPAEC cDNA

UM-UC-3(人(ren)膀胱(guang)移行細胞(bao)癌(ai)) 5×106cells/瓶(ping)×2 人(ren)肌(ji)酸激(ji)酶(mei)同工酶(mei)MB(CK-MB)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 CD7 CD7抗(kang)原 0.5mg

HPNE人(ren)胰腺導管細胞(bao)小(xiao)鼠(shu)胚(pei)胎成纖維(wei)細胞(bao)(MEF-mt)(5×105) Hep G2, 人(ren)肝癌(ai)細胞(bao)系(xi) Human 大(da)鼠(shu)骨保(bao)護(hu)素(OPG)ELISA 試劑(ji)盒 VEGF-D  大(da)鼠(shu)血(xue)管內皮(pi)細胞(bao)生長因(yin)子(zi)D 96T

PITX2： 成(cheng)對樣同源結(jie)構域轉(zhuan)錄因(yin)子(zi)2抗(kang)體 神(shen)經(jing)前(qian)體細胞(bao)培養(yang)基(ji)NsM

GREM1 Protein Mouse 重組(zu)小(xiao)鼠(shu) Gremlin 1 / GREM1 蛋(dan)白 (His 標簽(qian)) 大(da)鼠(shu)谷(gu)酰胺合(he)成酶(mei)(GS)ELISA試(shi)劑(ji)盒 anti-HAV(Human anti-hepatitis A virus IgG antibody)  人(ren)抗甲型肝(gan)炎病(bing)毒(du)IgG抗體 BTN3A3 Others Human 人(ren) BTN3A3 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao))

Lewis瘤(liu) 肺(fei)癌(ai) 大(da)鼠(shu)谷(gu)酰胺合(he)成酶(mei)(GLUL)ELISA試(shi)劑(ji)盒 anti-PIV IgM(Human anti-parainfluenza virus IgM antibody)  人(ren)抗副流感病毒(du)IgM抗體 SJCRH30[RC13;RMS 13;SJRH30]細胞(bao)，人(ren)骨髓橫(heng)紋(wen)肌(ji)肉(rou)癌(ai)細胞(bao) 人(ren)腎癌(ai)細胞(bao)系(xi),A498細胞(bao) 人(ren)食道平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)HESMC

HA Others H5N1 甲(jia)型流(liu)感 H5N1 (A/Hubei/2011) 血凝(ning)素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao)) 大(da)鼠(shu)谷(gu)酰胺(Gln)ELISA試(shi)劑(ji)盒 IGFBP-2  大(da)鼠(shu)結(jie)合(he)蛋白2 96T