HSC-T6永生(sheng)型(xing)大(da)鼠肝儲脂(zhi)細胞

公(gong)司(si)產(chan)品僅供(gong)科研(yan)研究(jiu)使用、不得(de)用於(yu)臨床診(zhen)斷！

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中，倒(dao)置顯(xian)微鏡下觀察(cha)，待細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終(zhong)止(zhi)消化，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清，沈(chen)澱細胞用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後按 1:2 比例(li)進(jin)行分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)；

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中，倒(dao)置顯(xian)微鏡下觀察(cha)，待細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培養(yang)液(ye)終(zhong)

止(zhi)消化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍(dong)存管(guan)中；

4）先將細胞凍(dong)存管(guan)放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後將其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進(jin)行長(chang)期保存。使用程序

降溫(wen)盒(he)可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇細胞：以(yi)下細胞培養(yang)凍(dong)存處理僅供(gong)參(can)考，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產(chan)品說(shuo)明書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存管(guan)在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所有(you)細胞懸(xuan)液加入(ru)含適量(liang)培養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶中培養(yang)過(guo)夜（或(huo)將細胞懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並(bing)檢查(zha)細胞密度。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細胞密度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳(chuan)代(dai)培養(yang)。

a、棄去(qu)培養(yang)上(shang)清，用不含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶中，使(shi)消化液(ye)浸潤(run)所有(you)細胞，將培養(yang)瓶置於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化1-2 min（視細胞情(qing)況(kuang)而定(ding)），然(ran)後在顯微鏡下觀察(cha)細胞消化情(qing)況(kuang)，若細胞大(da)部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾下(xia)培養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清液，補(bu)加1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液按1:2比例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中或者(zhe)瓶中，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存：待細胞生長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行細胞凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集細胞及細胞培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清液，用PBS清洗(xi)壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行細胞計數。

b、根(gen)據細胞數量(liang)加入(ru)無(wu)血(xue)清細胞凍(dong)存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞懸(xuan)液，註意(yi)凍(dong)存管(guan)做好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存管(guan)放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存。記錄凍(dong)存管(guan)位置以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取。

公(gong)司(si)正在出售(shou)的(de)產(chan)品：

NTF97： 親核(he)素(su)β1抗(kang)體 HCT 116細胞，結腸癌細胞 人(ren)肝(gan)癌細胞,Bel-7404細胞 CL-0016A549(人(ren)非(fei)小(xiao)細胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×2

HA Others H5N1 甲型(xing)流感(gan) H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血(xue)凝(ning)素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 大(da)鼠ⅩⅢA1肽(F13A1)ELISA試劑(ji)盒(he) TF(Human Transfer factor)  人(ren)轉移(yi)因(yin)子 96T

NMDA epsilon 1： 谷酸受(shou)體NMDAζ1抗(kang)體(ti) 小(xiao)氣(qi)道平滑(hua)肌(ji)細胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(1ml)

U-373MG-EGFP-puro[U-373MG-pLVT7](慢病(bing)毒(du)構(gou)建穩定株)人(ren)腦神經膠質(zhi)瘤細胞 U-373MG-EGFP-puro[U-373MG-pLVT7] (leiviral consuct stable sain) of human brain glioma cells 1640+10%Hyclone 滅活(huo)血(xue)清+2μg/ml puromycin 大(da)鼠ⅩⅢ(FⅩⅢ)ELISA試劑(ji)盒(he) Tn- I  大(da)鼠肌(ji)鈣(gai)蛋(dan)白Ⅰ 96T

NMDA epsilon 2： 谷酸受(shou)體NMDAζ2抗(kang)體(ti) CSF1R Others Human 人(ren) M-CSFR 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

RLE-6TN細胞，大(da)鼠肺上(shang)皮Ⅱ型(xing)細胞 PC-3(人(ren)前列腺癌細胞) 大(da)鼠肝細胞;BRL 3A 牛(niu)主(zhu)要(yao)組(zu)織(zhi)相容性復(fu)合體(ti)(MHC/BoLA)ELISA 試劑(ji)盒(he) PARP(poly ADP-ribose polymerase) 多腺(xian)苷(gan)二(er)0酸多聚(ju)酶(mei)抗原(yuan) 0.5mg

Jab1： Jun激活(huo)區域-連接(jie)蛋(dan)白1抗體(ti) HAVCR1 Others Canine 狗(gou) KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

人(ren)滑(hua)膜(mo)細胞cDNAHS cDNA 牛(niu)腫(zhong)瘤壞(huai)死(si)因(yin)子α(TNF-α)ELISA試劑(ji)盒(he) Visfatin-1 (PBEF1)(NT) Human 內脂(zhi)素(su)/內(nei)臟脂(zhi)肪(fang)素(人(ren)：N端多肽(tai))、內(nei)臟脂(zhi)肪(fang)素、 又(you)稱：前B細胞克(ke)隆增(zeng)強(qiang)因(yin)子、內肥素、腹(fu)脂(zhi)素(su) 0.5mg

phospho-JAK2(Tyr221)： 0酸化蛋(dan)白酪酸激酶(mei)JAK-2抗體 人(ren)導(dao)管(guan)瘤細胞;UACC812

16HBE(人(ren)支(zhi)氣(qi)管(guan)上(shang)皮樣細胞) 5×106cells/瓶×2 小(xiao)鼠(shu)B淋巴(ba)細胞雜交(jiao)瘤細胞;SH3 牛(niu)脂(zhi)聯(lian)素(ADP)ELISA試劑(ji)盒(he) Visfatin-1 (PBEF1)(NT) 內脂(zhi)素(su)/內(nei)臟脂(zhi)肪(fang)素 0.5mg

HSC-T6永生(sheng)型(xing)大(da)鼠肝儲脂(zhi)細胞CD164 Others Human 人(ren) CD164 / Endolyn 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 大(da)鼠α1-酸性糖(tang)蛋白(α1AGP)ELISA試劑(ji)盒(he) Human Homocysteine(Hcy)  人(ren)血(xue)漿(jiang)同型(xing)半胱(guang)酸 96T

RPS6KB1： 核糖(tang)體(ti)S6蛋(dan)白激酶(mei)抗體 非洲綠猴腎細胞系(xi)/HCV-E2;Vero-HCV-E2

CM-R123大(da)鼠角(jiao)膜(mo)成纖維細胞培養(yang)基(ji)100mL 大(da)鼠α1酸性糖(tang)蛋白(α1-AGP)ELISA 試劑(ji)盒(he) Human similar to RIKEN cDNA 3110050K21 gene  人(ren)類(lei)似(si)RIKEN cDNA 3110050K21 基(ji)因(yin) 96T

Rad52： Rad52抗體(ti) IL8 Others Human 人(ren) IL-8 (aa 1-77) 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

星(xing)形膠質(zhi)細胞培養(yang)基(ji)ACM 大(da)鼠α1抗前體(pre-α1-AT)ELISA試劑(ji)盒(he) Human similar to RIKEN cDNA 2610307008 gene  人(ren)類(lei)似(si)RIKEN cDNA 2610307008 基(ji)因(yin) 96T

三、培養(yang)註(zhu)意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到(dao)細胞後首先觀察(cha)細胞瓶是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象，若有(you)上(shang)述現象 發生請及時(shi)和我(wo)們聯(lian)系(xi)。

2. 仔細閱讀細胞說明(ming)書(shu)，了解細胞相關(guan)信息(xi)，如(ru)細胞形態(tai)、所用培養(yang)基(ji)、血(xue)清比例(li)、所需(xu) 細胞因(yin)子等(deng)，確(que)保(bao)細胞培養(yang)條件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培養(yang)條件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞出現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭細胞瓶表面(mian)，顯微鏡下觀察(cha)細胞狀(zhuang)態。因(yin)運輸(shu)問(wen)題(ti)，部分細胞由於(yu)溫(wen)度 變(bian)化及劇烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎(sui)片，是(shi)正常(chang)現(xian)象。觀察(cha)好(hao)細胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可(ke)以(yi)消化，懸(xuan)浮(fu)細胞直(zhi)接(jie)混勻(yun)收(shou)集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種到(dao)新(xin)的(de)培養(yang)瓶或培養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用相同條件(jian)的(de)培養(yang)基(ji)用於(yu)細胞培養(yang)。

6. 建議(yi)客戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後前 3 天各(ge)拍幾張細胞照片(pian)，記錄細胞狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和我(wo)司(si)技術部溝通 交(jiao)流。由於(yu)運輸(shu)的(de)原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏感(gan)細胞會出(chu)現(xian)不穩定的(de)情(qing)況(kuang)，請及時(shi)和我(wo)們聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細胞 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們的(de)技術人(ren)員(yuan)跟蹤回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解決。

7. 該(gai)細胞僅供(gong)科研(yan)使用。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用的(de)培養(yang)基(ji) (灌(guan)液(ye)培養(yang)基(ji)) 不(bu)能再用來培養(yang)細胞，請換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明書(shu)細胞培 養(yang)條件(jian)新(xin)配制(zhi)的(de)培養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細胞。     收(shou)到(dao)細胞後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。