HTMC人(ren)眼小梁網(wang)細(xi)胞(bao)

公司產品(pin)僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷！

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養瓶中的(de)培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養

液(ye)終(zhong)止消化，再輕輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養基重(zhong)懸(xuan)，然後按(an) 1:2 比(bi)例進行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培養箱(xiang)中培養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養瓶中的(de)培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru)培(pei)養液(ye)終(zhong)

止消化，輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並放置於(yu)凍(dong)存管(guan)中；

4）先將細(xi)胞(bao)凍(dong)存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中進行(xing)長(chang)期(qi)保存。使用(yong)程序(xu)

降溫(wen)盒可(ke)直接(jie)放入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培養操作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培養凍(dong)存處理(li)僅(jin)供(gong)參考(kao)，具體操作(zuo)步驟以隨(sui)貨產(chan)品(pin)說(shuo)明書為(wei)主(zhu)。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的(de)凍(dong)存管(guan)在 37℃水(shui)浴中迅速搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養基混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基後吹勻(yun)。然後將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶中培養過夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基，培(pei)養過夜）。第(di)二(er)天換(huan)液(ye)並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如果細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即可(ke)進行(xing)傳代(dai)培養。

a、棄去培(pei)養上(shang)清(qing)，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中，使消化液(ye)浸潤所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將培養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況而定），然後在顯微(wei)鏡下觀察(cha)細(xi)胞(bao)消化情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速拿回(hui)操作(zuo)臺，輕(qing)敲幾(ji)下培養瓶後加(jia)2-3ml培養基終(zhong)止消化。輕輕打(da)勻(yun)後裝入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養液(ye)後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例分到(dao)新的(de)含(han)8 mL培(pei)養基的(de)新皿中或(huo)者(zhe)瓶中，置於(yu)培(pei)養箱(xiang)中培養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好時，可(ke)進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養液(ye)，裝入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數量加(jia)入(ru)無血清細(xi)胞(bao)凍(dong)存液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻(yun)，每(mei)支凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標識。將凍(dong)存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存。記錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置(zhi)以便(bian)下次拿取(qu)。

公司正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

MOBP： 少突膠(jiao)質細(xi)胞(bao)髓鞘(qiao)相(xiang)關(guan)蛋白(bai)抗(kang)體 615小鼠(shu)癌瘤(liu)株;Ca759

KiMA(人(ren)胚腎上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)系(xi)) 5×106cells/瓶×2 艱(jian)難梭(suo)菌Closidium difficile 大(da)鼠(shu)血小板(ban)生成素(su)(TPO)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 LZM (Rabbit Lysozyme)  兔 96T

MRCK alpha： CDC42結(jie)合(he)蛋白激酶(mei)α抗(kang)體 CM-H022人(ren)前列腺(xian)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)培養基100mL

IFNA5 Protein Rat 重組(zu)大鼠(shu) IFNA5 / IFNaG 蛋(dan)白(bai) (His 標簽) 大(da)鼠(shu)血小板(ban)內皮(pi)細(xi)胞(bao)粘附分子(zi)1(PECAM1)ELISA試(shi)劑(ji)盒 IFN- Beta/IFNB(Human Interferon Beta)  人(ren)β幹擾素 96T

MyD88： 髓樣分化蛋白抗(kang)體 SRC Others Human 人(ren) SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 桿狀(zhuang)病毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對照)

HuH-7(人(ren)肝癌細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 GH3, 大鼠垂體生長(chang)激(ji)素腺(xian)瘤 EB病(bing)毒轉(zhuan)化的(de)人(ren)B淋(lin)巴細(xi)胞(bao);KMY0928 人(ren)基質金屬(shu)蛋白(bai)酶1(MMP-1)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 CD24 CD24抗(kang)原 0.5mg

Hemopexin： 糖蛋(dan)白(bai)β-1B抗(kang)體 人(ren)支氣(qi)管(guan)平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞(bao)cDNAHBSMC cDNA

UMR-106(大鼠(shu)骨(gu)肉(rou)瘤(liu)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 人(ren)基質γ羧(suo)基谷酸(suan)蛋(dan)白(bai)(MGP)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 CD2AP (CD2-associated protein) 白細(xi)胞(bao)分化抗(kang)原CD2AP 0.5mg

Phospho-HSP27 (Ser15)： 0酸化熱休克(ke)蛋(dan)白(bai)27抗(kang)體 IL17RB Others Human 人(ren) IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對照)

C57BL/6小鼠(shu)骨(gu)髓間質幹細(xi)胞(bao) C57BL/6 mouse bone marrow mesenchymal stem cells 人(ren)基脲敏感(gan)性胺(an)氧(yang)化酶(SSAO)ELISA試(shi)劑(ji)盒 CD33/Siglec-3(mouse ret) CD33抗(kang)原(大(da)、小鼠(shu)) 0.5mg

HTMC人(ren)眼小梁網(wang)細(xi)胞(bao)大鼠(shu)垂體瘤細(xi)胞(bao);GH3 大鼠骨(gu)成型(xing)蛋(dan)白3(BMP-3)ELISA試(shi)劑(ji)盒 HBeAb(Human anti-hepatitis B virus e antibody)  人(ren)抗(kang)乙(yi)型(xing)肝炎病毒e抗(kang)體 豬腎細(xi)胞(bao);PK-15

小鼠(shu)胚胎成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)(MEF)(5×105) U266B1 [U266], 人(ren)多發(fa)性(xing)骨(gu)髓瘤細(xi)胞(bao) Human 大鼠骨(gu)成型(xing)蛋(dan)白2(BMP-2)ELISA試(shi)劑(ji)盒 IL-11  大鼠(shu)白(bai)介素11 96T

Proteasome 20S C2： 蛋白(bai)酶(mei)體PSMα1抗(kang)體 小膠(jiao)質細(xi)胞(bao)培養基MM

EPO Protein Mouse 重組(zu)小鼠(shu) Erythropoietin / EPO 蛋白(bai) (His 標簽) 大(da)鼠(shu)骨(gu)成型(xing)蛋(dan)白2(BMP2)ELISA試(shi)劑(ji)盒 EHF(Human anti-epidemic hemorrhagic fever virus IgM antibody)  人(ren)抗(kang)流(liu)行(xing)性(xing)出血熱病毒(du)抗(kang)體 FAIM3 Others Human 人(ren) FAIM3 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對照)

LCC1 人(ren)癌細(xi)胞(bao) 大鼠骨(gu)成型(xing)蛋(dan)白2(BMP-2)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 anti-RV(Human anti-rabies virus antibody)  人(ren)抗(kang)狂犬(quan)病毒抗(kang)體 Hep G2細(xi)胞(bao)，人(ren)肝癌細(xi)胞(bao) 人(ren)腎上(shang)腺(xian)皮(pi)質腺(xian)癌細(xi)胞(bao),SW-13細(xi)胞(bao) 人(ren)內根(gen)鞘(qiao)細(xi)胞(bao)HHIRSC

三、培(pei)養註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞(bao)後首(shou)先觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是否(fou)完(wan)好(hao)，培養液(ye)是否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生請及時和(he)我們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明書，了(le)解細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如細(xi)胞(bao)形態、所(suo)用(yong)培養基、血(xue)清(qing)比(bi)例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因子等(deng)，確保細(xi)胞(bao)培養條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養條(tiao)件(jian)不壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出現問題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因運(yun)輸(shu)問題(ti)，部(bu)分細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化及劇(ju)烈(lie)碰亡破碎形(xing)成碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精消毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以消化，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直接(jie)混勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培(pei)養基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到(dao)新的(de)培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養皿中，置於(yu)培(pei)養箱(xiang)中進行(xing)培養。

5. 請客戶用(yong)相(xiang)同條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養基用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培養。

6. 建(jian)議客戶收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天各拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和(he)我司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝通 交(jiao)流。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原因(yin)，個別敏感(gan)細(xi)胞(bao)會出現不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況，請及時和(he)我們聯系(xi)，告知細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情(qing)況，以便(bian)我(wo)們的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員跟蹤回(hui)訪直至(zhi)問題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培(pei)養基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養基) 不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)來培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用(yong)按照說(shuo)明書細(xi)胞(bao)培 養條(tiao)件(jian)新配制的(de)培(pei)養基來培(pei)養細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細(xi)胞(bao)後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。