huh-7.5.1人肝癌細胞(bao)

公(gong)司產品(pin)僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究使用(yong)、不得用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

1、細胞(bao)傳(chuan)代：

1）細胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加入 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使之脫落，然後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸，然後按 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分瓶傳代，最(zui)後放入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍存(cun)：

1）細胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加入培(pei)養(yang)液(ye)終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使之脫落，然後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適量的凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將(jiang)細胞(bao)凍存(cun)管(guan)放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入液(ye)氮中進(jin)行(xing)長期保存(cun)。使用(yong)程(cheng)序(xu)

降溫(wen)盒(he)可(ke)直接放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞(bao)培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以下(xia)細胞(bao)培(pei)養(yang)凍存(cun)處(chu)理僅供參(can)考，具體操作步(bu)驟(zhou)以隨貨(huo)產品(pin)說(shuo)明書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含(han)有1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍存(cun)管(guan)在 37℃水浴中迅速(su)搖晃(huang)解凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合均(jun)勻。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹勻。然後將(jiang)所有細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入含(han)適量培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜(ye)（或將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第(di)二天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢查(zha)細胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代：如果(guo)細胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上清，用(yong)不含(han)鈣、鎂(mei)離子的PBS潤(run)洗細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤所有細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞(bao)情(qing)況而定(ding)），然後在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)消(xiao)化(hua)情況，若細胞(bao)大(da)部分(fen)變(bian)圓並(bing)脫落，迅速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後裝入(ru)無(wu)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去(qu)上清液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹勻。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新皿(min)中或者(zhe)瓶中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長狀態(tai)良(liang)好時，可(ke)進(jin)行(xing)細胞(bao)凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌離心管中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上清液(ye)，用(yong)PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細胞(bao)數(shu)量加入(ru)無血(xue)清細胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍存(cun)管(guan)做好標(biao)識。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍存(cun)管(guan)位置(zhi)以便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

三、培(pei)養(yang)註意事項 

1. 收到(dao)細胞(bao)後首先(xian)觀(guan)察(cha)細胞(bao)瓶是否(fou)完(wan)好，培(pei)養(yang)液(ye)是否(fou)有漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若有上(shang)述現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和我們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞(bao)說(shuo)明書(shu)，了解細胞(bao)相(xiang)關信(xin)息(xi)，如細胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血(xue)清比例(li)、所(suo)需(xu) 細胞(bao)因(yin)子等(deng)，確(que)保細胞(bao)培(pei)養(yang)條件(jian)壹(yi)致，若由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條件(jian)不壹(yi)致而導(dao)致細胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由 客(ke)戶(hu)自行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題(ti)，部分(fen)細胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破碎形(xing)成碎片(pian)，是正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞(bao)狀態(tai)後，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞(bao)可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻收集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培(pei)養(yang)基重(zhong)懸 細胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到(dao)新的(de)培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱中進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條件的(de)培(pei)養(yang)基用(yong)於(yu)細胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收到(dao)細胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各拍幾(ji)張細胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄細胞(bao)狀態(tai)，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司技(ji)術部溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因(yin)，個(ge)別敏(min)感細胞(bao)會(hui)出(chu)現(xian)不穩定的情(qing)況，請(qing)及(ji)時和我們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知細胞(bao) 的(de)具體情況，以便(bian)我(wo)們(men)的(de)技(ji)術人員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直至問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅(jin)供科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養(yang)基) 不能(neng)再(zai)用(yong)來培(pei)養(yang)細胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)細胞(bao)培(pei) 養(yang)條件(jian)新配(pei)制的(de)培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收到(dao)細胞(bao)後第壹(yi)次傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。

公(gong)司正(zheng)在出售(shou)的(de)產品(pin)：

Vero非(fei)洲(zhou)綠(lv)猴腎細胞(bao) Vero the African green monkey kidney cells MEM培(pei)養(yang)基(GIBCO)+10%FBS 大(da)鼠血(xue)小板(ban)反應(ying)蛋(dan)白解整(zheng)合素金屬肽(tai)酶1(ADAMTS1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) CR2/sCD21(Human Soluble Cluster of differentiation 21)  人可(ke)溶(rong)性(xing)CD21 96T

Phospho-MYL(Ser19)： 0酸化(hua)肌球蛋(dan)白輕鏈(lian)2抗體 HA Others H1N1 甲型(xing)流(liu)感 H1N1 (A/Brevig Mission/1/1918) 血凝(ning)素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao))

膀胱(guang)平(ping)滑肌細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml) 大鼠血小板(ban)反應(ying)蛋(dan)白2(THBS2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) (MAG Ab) 大(da)鼠抗髓鞘(qiao)相(xiang)關糖(tang)蛋白抗體 615小鼠癌瘤(liu)株;Ca763

L W-3A(小鼠皮下(xia)結(jie)締組織(zhi)細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 HeLa [ Chang Liver ](張氏(shi)肝(gan)細胞(bao)) 大(da)鼠血(xue)小板(ban)反應(ying)蛋(dan)白/敏(min)感蛋白1(TSP-1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) LH (Rabbit luteotropic hormone)  兔(tu)子促(cu)黃(huang)體激素 96T

MCL1： 髓樣細胞(bao)白血(xue)病-1抗體 CM-H021人前(qian)列腺(xian)平(ping)滑肌細胞(bao)培(pei)養(yang)基100mL

HME7細胞(bao)，人黑色素瘤細胞(bao) 短(duan)雙(shuang)歧(qi)桿(gan)菌 EB病毒轉化(hua)的人B淋巴(ba)細胞(bao);HH-29 人肌球蛋(dan)白輕鏈(lian)激(ji)酶(MLCK)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Argireline peptide 抗皺寡肽(tai)-1/六(liu)勝(sheng)肽(tai)-3/阿(e)基瑞(rui)林(lin)/乙酰六(liu)勝(sheng)肽(tai)-3 1g

Hydroxyethyk starch： 澱粉抗體 HA Others H1N1 甲型(xing)流(liu)感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/1934) 血凝(ning)素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao))

人胚肺(fei)成纖(xian)維(wei)細胞(bao);WI-38 [WI38] 人肌球蛋(dan)白輕鏈(lian)(MLC)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) GHRP-2 Acetate peptide(Growth hormone-releasing peptides 2) 醋(cu)酸促(cu)生(sheng)長激素釋(shi)放肽(tai)2 1g

H1N1 Matrix Protein 2： A型(xing)流(liu)感病毒H1N1-M2蛋白抗體 Sars結(jie)構(gou)蛋(dan)白表(biao)達株;293sars181A

HUVEC(HUV-EC-C) (人臍靜(jing)脈血管(guan)內(nei)皮細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞(bao) 人癌細胞(bao);MDA-MB-435S 人肌球蛋(dan)白(Myosin)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) GHRP-6 Acetate peptide(Growth hormone-releasing peptides 6) 醋(cu)酸促(cu)生(sheng)長激素釋(shi)放肽(tai)6 1g

huh-7.5.1人肝癌細胞(bao)PROK1 Protein Human 重組人 EG-VEGF / prokineticin-1 蛋白 (His 標(biao)簽) 大鼠谷(gu)酸脫羧(suo)酶自身(shen)抗體(GAD-Ab)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) VEGFR-1/Flt1  大(da)鼠血管內(nei)皮細胞(bao)生(sheng)長因(yin)子受體1 96T

ProSAPiP1： 含(han)脯酸(suan)突(tu)觸相(xiang)關蛋(dan)白相(xiang)互作(zuo)用(yong)蛋白1抗體 LRG1 Others Human 人 LRG1 人細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao))

Li-7 人肝癌細胞(bao) 大(da)鼠谷(gu)酸脫羧(suo)酶2(GAD2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) Human anti-typhus antibody  人抗斑疹(zhen)傷(shang)寒(han)抗體 C2C12細胞(bao)，人肌肉(rou)成纖(xian)維(wei)細胞(bao)瘤(liu) 人腎癌細胞(bao)系(xi),ACHN細胞(bao) 人肺微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮細胞(bao)HPMEC

CSF3R Others Human 人 G-CSFR / CD114 人細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠(shu)谷(gu)酸脫羧(suo)酶1(GAD1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) VEGFR-2/Flk-1  大(da)鼠血管內(nei)皮細胞(bao)生(sheng)長因(yin)子受體2 96T

Pregnancy zone protein： 區帶蛋白PZP抗體 CM-R109大鼠腦(nao)成纖(xian)維(wei)細胞(bao)培(pei)養(yang)基100mL